上皮性卵巢癌組織中ASAP1蛋白的表達及其臨床意義

劉亞南，高愛華，朱維培

（蘇州大學附屬第二醫院婦產科，江蘇蘇州215000）

上皮性卵巢癌組織中ASAP1蛋白的表達及其臨床意義

劉亞南，高愛華，朱維培

（蘇州大學附屬第二醫院婦產科，江蘇蘇州215000）

目的：探討ASAP1蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達及臨床意義。方法：采用免疫組織化學法檢測73例上皮性卵巢癌患者卵巢癌組織石蠟切片中ASAP1蛋白的表達。采用χ2檢驗分析ASAP1表達與卵巢癌患者病理資料間的關系。并采用Kap1an-Meier進行單因素生存分析，比較不同ASAP1蛋白表達水平的卵巢癌患者的預后。結果：ASAP1蛋白表達與腹腔積液量相關（P=0.005）；單因素生存分析顯示，ASAP1蛋白高表達組與低表達組總生存時間、無復發生存時間比較，差異具有統計學意義（P=0.005，0.001）。結論：ASAP1蛋白高表達是上皮性卵巢癌患者預后不良的高危因素。

ASAP1；上皮性卵巢癌；免疫組化

上皮性卵巢癌是常見的婦科腫瘤，2008年全球約有225 500卵巢癌新增病例，死亡約140 200例［1］。卵巢癌患者的生存率與腫瘤細胞的擴散及轉移相關。ASAP1［a phosphatidy1inosito1 4，5-bisphosphate-dependent Arf GTPase-activating protein（Arf GAP）］是磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸依賴Arf（ADP糖基化因子）的GTP激活蛋白，與細胞的黏附和樹突狀偽足形成有關［2］。文獻報道，近來有ASAP1的表達與前列腺癌及宮頸癌的轉移有關［3-4］。目前國內暫無ASAP1蛋白在卵巢癌轉移方面的相關研究報道，因此，本研究通過免疫組化法檢測卵巢癌組織中ASAP1的表達，分析ASAP1與上皮性卵巢癌患者臨床指標和預后的關系，初步探討ASAP1在上皮性卵巢癌發展以及預后判斷中的作用。

1 資料與方法

1.1 標本來源

收集2004年1月至2008年12月在我院行全面分期手術或腫瘤細胞減滅術、經病理證實具有完整病歷和隨訪資料的上皮性卵巢癌患者卵巢癌組織蠟塊73例，患者術前未接受化療。患者年齡22～75歲，平均50.75歲；病理類型：漿液性癌44例，非漿液性癌29例。按照國際婦產科聯盟（FIGO）2000年的手術病理分期標準，Ⅰ期16例，Ⅱ期5例，Ⅲ期45例，Ⅳ期7例；病理分化程度：低分化26例，高分化47例。本實驗所采用的石蠟標本均取得患者的知情同意。以因子宮肌瘤行子宮加附件切除患者的正常卵巢組織標本為對照。

1.2 免疫組化檢測ASAP1蛋白表達

采用SP法，所有標本經10％甲醛固定，石蠟包埋，選擇具有代表性的組織蠟塊進行4 μm連續切片，常規脫蠟，抗原修復，加1∶100 ASAP1一抗小鼠抗人單抗（美國Abcam公司）4℃過夜，二抗1∶200生物素化的抗小鼠抗體（丹麥Dako公司）室溫孵育30 min，二氨基聯苯胺（DAB）顯色，蘇木精復染，中性樹膠封固。PBS代替一抗為陰性對照。

1.3 免疫組織化學結果判斷

由2位病理醫師進行獨立雙盲評分，每張切片在400倍鏡下隨機選擇5個腫瘤細胞區，每個區域觀察100個腫瘤細胞。光鏡下ASAP1陽性表達主要分布于細胞核及細胞質，以出現棕色或棕褐色顆粒作為陽性結果，將所選取區域中細胞的染色范圍和染色強度參考文獻［5］標準進行半定量化，①染色強度的評分標準：未染色為0分，淡黃色為1分，棕色為2分，棕褐色為3分。②染色范圍計分以陽性細胞數占總細胞數的比例計算：陽性細胞率＜5％計0分，6％～10％計1分，11％～50％計2分，51％～80％計3分，≥80％計4分。染色結果總分為染色強度與染色范圍計分的乘積，0～4分為低表達，6～12分為高表達。

1.4 隨訪

對73例卵巢癌患者進行隨訪，隨訪截止時間為2013年6月，隨訪時間為2.6～107個月（中位隨訪時間為29.2個月）。

1.5 統計學方法

應用SPSS 15.0軟件進行統計學分析，采用χ2檢驗分析ASAP1表達與卵巢癌患者病理資料間的關系。采用Kap1an-Meier和Log-rank檢驗進行單因素生存分析，比較ASAP1蛋白高表達和低表達卵巢癌患者的預后。

2 結果

2.1 ASAP1蛋白在卵巢癌組織中的表達

ASAP1蛋白的表達主要位于細胞核與細胞質，呈棕色，見圖1。根據ASAP1蛋白的表達將卵巢癌患者分為2組：ASAP1蛋白低表達組37例，ASAP1蛋白高表達組36例。

圖1 ASAP1蛋白的表達（×400）

2.2 ASAP1蛋白表達與卵巢癌臨床病理特征的關系

ASAP1蛋白的表達與卵巢癌患者的腹腔積液量相關（P=0.005），與患者年齡、腫瘤分期、病理類型、腫瘤分化無關（P均＞0.05），見表1。

2.3 ASAP1蛋白不同表達水平的上皮性卵巢癌患者預后分析

隨訪期間共有21例死亡，患者的總生存時間為2.6～107個月，中位生存時間為29.2個月，無瘤生存時間為2.6～107個月，中位無復發生存時間為22個月。單因素生存分析顯示，ASAP1蛋白高表達組與低表達組間總生存時間與無進展時間的差異均有統計學意義（P=0.005，0.001）。見圖2、3。

3 討論

ASAP1相對分子質量約為125 000，位于染色體8q24，與細胞的黏附和樹突狀偽足形成有關，敲除ASAP1或沉默ASAP1基因，樹突狀偽足的形成及黏附現象則消失［6-10］。ASAP1與腫瘤的發展與侵襲有關。Eh1ers等［11］報道，在惡性黑色素瘤中，ASAP1表達與促進細胞的侵襲能力有關。Mü11er等［12］研究表明，在動物實驗中ASAP1能促進直腸癌的轉移，在體外實驗中ASAP1能促進直腸癌細胞的侵襲。本研究表明，ASAP1的表達與腹盆腔內腹腔積液量相關。卵巢癌患者有腹腔積液是預后不良的高危因素，腹腔積液的產生是晚期患者的特征［13］。本課題組前期也有研究表明，隨著卵巢癌患者臨床分期的增加，腹腔積液量也有增加的趨勢，卵巢癌腹腔積液與腫瘤的惡性程度相關，惡性程度高者易形成腹腔積液，預后差［14］。卵巢癌患者癌細胞可阻塞淋巴管，暫時阻擋癌細胞向腹膜外轉移，但同時可促進腹腔積液的產生，腫瘤轉移至腹膜和大網膜時引起局部刺激，使血漿蛋白滲漏至腹腔形成腹腔積液。ASAP1可被Arf1募集至細胞周邊，與細胞的跨膜轉運有關。ASAP1通過阻斷Arf1活性增強細胞的活動性，ASAP1高表達組易形成腹腔積液，考慮與ASAP1促進卵巢癌細胞局部黏附，調節跨膜轉運及細胞支架重塑有關。上述研究證明，ASAP1在惡性腫瘤的發展及轉移過程中可能起重要作用。本研究中ASAP1蛋白的表達與患者年齡、腫瘤分期、病理類型、腫瘤分化無關。

表1 上皮性卵巢癌組織中ASAP1表達與臨床病理特征的關系

圖2 ASAP1高低表達上皮性卵巢癌患者的總生存曲線

圖3 ASAP1高低表達上皮性卵巢癌患者的無復發生存曲線

本研究結果還顯示，ASAP1高表達患者總生存時間及無復發時間較ASAP1低表達患者短。由此提示ASAP1高表達是上皮性卵巢癌患者預后不良的高危因素，ASAP1不僅可作為卵巢癌的潛在標志物，而且促進上皮性卵巢腫瘤的侵襲，但分子機制有待進一步研究。研究表明，ASAP1高表達致上皮生長因子受體增多，與卵巢癌的進展有關［15］。Baron等［16］研究結果表明，ASAP1高表達使腫瘤細胞遷徙及轉移與血小板衍生生長因子（PDGF）介導的細胞通路有關。ASAP1的SH3結構域可以與Src介導的細胞通路結合，與腫瘤細胞的偽足形成有關［17］。

本研究初步表明ASAP1可作為預測卵巢癌預后的潛在標志物，但其在卵巢癌發展過程中的分子機制仍需進一步研究。

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Expression and clinical significance of ASAP1 in epithelial ovarian carcinoma

LIU Ya-nan，GA0 Ai-hua，ZHU Wei-pei
（Department of Obstetrics and Gyneco1ogy，the Second Affi1iated Hospita1 of Soochow University，Suzhou Jiangsu 215000，China）

Objective：To exp1ore the expression and c1inica1 significance of ASAP1 in epithe1ia1 ovarian carcinoma（EOC）.Methods：The expression 1eve1 of ASAP1 in 73 paraffin-embedded EOC specimen was measured by immunohistochemistry staining.Statistica1 ana1ysis was performed to eva1uate the c1inicopatho-1ogic significance of ASAP1.Assemb1ed c1inica1 surviva1 data were ana1yzed with Kap1an-Meier curves.Results：Statistica1 ana1ysis disp1ayed a significant corre1ation in ASAP1 expression with ascitic f1uid（P= 0.005）.High expression of ASAP1 was corre1ated with poor overa11（P=0.005）and recurrence-free（P=0.001）surviva1 in patients with EOC.Conclusion：E1evated expression of ASAP1 may be used as a potentia1 marker of EOC patients.

ASAP1；epithe1ia1 ovarian carcinoma；immunohistochemistry

R737.31

A

1671-7783（2015）06-0495-03

10.13312/j.issn.1671-7783.y150187

2015-08-24 ［編輯］ 劉星星

劉亞南（1983—），女，湖北武漢人，主治醫師，碩士，主要從事婦科腫瘤診治研究；朱維培（通訊作者），主任醫師，E-mai1：zwp333xx@126.com