溫潤通脈方治療大鼠心律失常模型的實驗研究

王從陽，魏凱峰*

（南京中醫藥大學，江蘇 南京210029）

心律失常[1]是臨床上的常見病、多發病，是指心臟沖動的頻率、節律、起源部位、傳導速度或激動次序的異常，是心臟疾病臨床常見的表現形式，可見于多種器質性心臟病。 抗心律失常西藥往往可誘發心律失常，藥物副作用大，遠期療效不佳，臨床使用有所局限。 中醫藥在治療心律失常方面有特殊療效，其特點為療效顯著且毒副作用低。 本實驗通過制備烏頭堿誘發大鼠心律失常模型[2]，評價溫潤通脈方治療大鼠心律失常的作用及相關機制，為溫潤通脈方在臨床的進一步應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 主要實驗儀器

臺式離心機（型號AnkeTDL-5，上海安亭科學儀器廠）；酶標儀（型號DG5033A，南京華東電子集團醫療裝備有限責任公司）； 電子天平 （型號YP1002N，上海天平儀器廠）。

1.2 藥物及試劑

溫潤通脈方（由桂枝、炙甘草、炒白芍、茯苓按1∶1∶3∶1.5 比例組成的方劑， 購于南京中醫藥大學國醫堂門診部），自制0.585 g/mL 藥液；鹽酸普奈洛爾片（常州第四制藥有限公司，批號：200208312）；烏頭堿（中國食品藥品檢定研究院）；水合氯醛（國藥集團化學試劑有限公司，批號20091113）；超氧化物歧化酶（SOD） 檢測試劑盒、丙二醛（MDA）檢測試劑盒、一氧化氮（NO）檢測試劑盒（購于南京建成生物有限公司）。

1.3 動物及分組

SD 雄性大鼠，32 只，體質量（190±20）g，隨機分為正常組、模型組、西藥組（即普萘洛爾組）、復方組（即溫潤通脈方組），每組8 只。

1.4 造模及藥物干預[2]

適應性喂養3 d 后即正式開始實驗，正常組和模型組采用生理鹽水灌胃（2 mL/200 g），西藥組采用普萘洛爾溶液灌胃（0.54 mg/200 g），復方組使用溫潤通脈方灌胃（1.17 g 生藥/200 g）。 上述4 組連續灌胃7 d，每天1 次，最后1 次給藥1 h 后，腹腔注射100 g/L 的水合氯醛溶液(30 mg/kg)麻醉，除正常組外， 余3 組均由舌下靜脈5 s 內快速注射0.001%的烏頭堿溶液0.2 mL/100 g（20 μg/kg）。

1.5 檢測指標

正常組小鼠麻醉后直接頸動脈取血及取心臟組織， 余3 組均在舌下靜脈注射烏頭堿10 min 后頸動脈取血及取心臟組織。 按試劑盒說明書分別檢測血清及心臟組織SOD、MDA、NO 含量。

1.6 統計學分析

實驗結果應用SPSS 16.0 軟件進行分析， 所得數據計量資料用“±s”表示，多組間比較采用方差分析， 兩兩比較采用LSD 法，P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠血清和組織SOD 含量比較

血清SOD 含量方面，復方組與模型組、西藥組與模型組相比均P＜0.05，差異有統計學意義，同時復方組與西藥組相比P＞0.05（P=0.44），即復方組、西藥組均能提高血清SOD 含量，且可以認為兩組作用等同。 與正常組比較，復方組及西藥組均能使血清SOD 含量基本達到烏頭堿致心律失常前水平。 組織SOD 含量方面， 西藥組與模型組相比能增加組織SOD 含量且P＜0.01 （P=0.0027）， 差異有統計學意義；復方組與模型組相比差異沒有統計學意義（P＞0.05），但其組織SOD 含量有所提高。 結果見表1。

表1 各組大鼠血清和組織SOD 含量比較（±s，n=8）

表1 各組大鼠血清和組織SOD 含量比較（±s，n=8）

注： 與正常組相比*P＜0.05，**P＜0.01； 與模型組相比#P＜0.05，##P＜0.01；與西藥組相比△P＜0.05。 下表同。

組 別正常組模型組西藥組復方組血清SOD 含量（U/mL）236.82±10.81 221.07±15.68*234.11±7.32#233.38±10.13#組織SOD 含量（U/mgProt）119.17±13.09 97.95±6.6**113.86±11.88##102.23±8.56△

2.2 各組大鼠血清和組織MDA 含量比較

血清MDA 含量方面，與模型組相比復方組及西藥組均差異無統計學意義（P＞0.05），但大鼠血清及組織MDA 含量方面， 復方組及西藥組與模型組相比均P＞0.05，差異無統計學意義。 結果見表2。

表2 各組大鼠血清和組織MDA 含量比較 （±s，n=8）

表2 各組大鼠血清和組織MDA 含量比較 （±s，n=8）

組 別正常組模型組西藥組復方組血清MDA 含量（nmol/mL）3.71±0.62 3.99±0.45 3.92±0.38 3.93±0.44組織MDA 含量（nmol/mgProt）1.14±0.15 1.20±0.23 1.34±0.22 1.34±0.18

2.3 各組大鼠血清和組織NO 含量比較

血清NO 含量方面， 復方組及西藥組與模型組相比均P＞0.05，差異無統計學意義。 但復方組、西藥組與正常組相比，仍能較大程度提高心律失常大鼠血清NO 含量。 組織NO 含量方面，復方組和模型組相比P＜0.01 （P=0.0029）， 西藥組和模型組相比P＜0.05(P=0.0100)，差異有統計學意義。 復方組和西藥組均能增加組織NO 含量， 且兩組之間相比P＞0.05（P=0.1012）， 即可認為兩組在增加組織NO 含量方面作用等同。 結果見表3。

表3 各組大鼠血清和組織NO 含量比較 （±s，n=8）

表3 各組大鼠血清和組織NO 含量比較 （±s，n=8）

組 別正常組模型組西藥組復方組血清NO 含量（nmol/mL）14.35±5.53 18.81±7.75 15.44±7.55 17.56±8.83組織NO 含量（μmol/gProt）3.71±1.52 1.61±0.97**2.73±0.71#3.40±1.21##△

3 討論

心律失常是心血管系統疾病中最為嚴重的病癥之一， 其發生機制涉及到離子通道、 心肌受體、miRNA、 縫隙連接蛋白及編碼通道基因等異常改變[3]。 溫潤通脈方由桂枝、炙甘草、炒白芍、茯苓組成，方中桂枝辛、甘、溫，歸心、肺、膀胱經，能助心陽，通經脈，止悸動；炙甘草甘、平、微溫，歸心、肺、脾、胃經，補益心脾、益氣復脈；茯苓甘、淡、平，歸心、脾、腎經，益心脾而寧心安神；炒白芍苦、酸，微寒，歸肝、脾經，養血斂陰，柔肝止痛，平抑肝陽。 桂枝配炙甘草有辛甘化陽之力，專入心營，助陽而不燥，補營而不寒，為補益心陽常用配伍，即《傷寒論》桂枝甘草湯，可補營氣、益心氣、通心陽而治療心悸、脈結代諸癥。 桂枝配茯苓則化氣行水、通陽除濕，用于水飲為患而致心下逆滿、心悸等，正合仲景“病痰飲者，當以溫藥和之”之意。 桂枝配炒白芍則調和營衛、養陰止汗。炙甘草配炒白芍有酸甘化陰之妙用， 養血斂陰、緩急止痛。 四藥配伍補益心陽、溫通血脈、調和營血、化陰養血，共奏溫潤通脈之功。

MDA 是氧自由基與細胞膜發生脂質過氧化反應的一種產物，檢測其在血清中含量可以反應脂質過氧化的程度，間接體現氧自由基對機體危害性程度；SOD 是體內清除氧自由基的抗氧化酶類物質，檢測血清中該指標含量可以反應出機體清除自由基的狀態。 若SOD 值過低，則反應出體內氧自由基聚集[4]。 NO 是內皮依賴的血管舒張因子，在機體內具有舒張血管、抑制血小板聚集、抑制血管平滑肌增殖和氧自由基清除作用，在心律失常中作為內源性心臟保護因子[5]。MDA 含量方面，本實驗并未達到預期結果，可能與實驗藥物未能使大鼠血藥濃度達到理想、烏頭堿注射劑量較大等方面有關，具體原因有待進一步研究。 本實驗結果表明復方組即溫潤通脈方能增加SOD 活力，提高NO 含量，從而達到保護心肌的作用，由此推測溫潤通脈方可能是通過有效清除氧自由基以減輕對血管內皮細胞損傷，提高抗氧化酶活性及抗脂質過氧化能力，從而發揮減輕心律失常發生的作用。

[1]陸再英，鐘南山.內科學（第七版）[M].北京：人民衛生出版社，2008：183.

[2]（德）H.G.沃格爾，（美）W.H.沃格爾.藥理學實驗指南——新藥發現和藥理學評價[M].杜冠華，李學軍，張永祥，等譯.北京：科學出版社，2001：757-758.

[3]楊寶峰，蔡本志.心律失常發病機制研究進展[J].國際藥學研究雜志，2010(2)：81-88.

[4]劉 悅，劉 雅，張 瑾，等.七氟烷后處理聯合七氟烷預處理對急性心肌缺血-再灌注大鼠血漿SOD 及MDA 的影響[J]. 河北醫藥，2011(3)：329-331.

[5]劉勝中，楊雙強.心肌缺血/再灌注損傷機制研究進展[J].實用醫院臨床雜志，2007(1)：88-90.