五苓散細粉與超微粉的質量控制及溶出度對比研究

蔡 萍，嚴方艷，肖 娟，李躍輝，萬 丹，張水寒*

（1.湖南省中醫藥研究院中藥研究所，湖南 長沙410013；2.楊永華全國名老中醫藥專家傳承工作室，湖南 長沙410013；3.湖南中醫藥高等專科學校，湖南 株洲412000）

五苓散出自于中醫經典名著《傷寒論》，全方由白術、茯苓、澤瀉、豬苓、桂皮5 味藥組成。 原文記載用以治療太陽蓄水證，現在五苓散的基礎上加減，將其廣泛應用在消化[1]、泌尿[2]、呼吸、內分泌等系統疾病，特別是治療水腫[3]、關節炎、頭痛、血壓[4-5]等疾病上取得了良好的療效。 五苓散超微粉末是將超微技術應用到該方劑而得到的一種新的散劑。 本文旨在探索超微技術在五苓散中的應用， 比較傳統細粉與超微粉五苓散中桂皮醛的含量以及其體外溶出情況，為超微粉技術在散劑中的應用提供實驗依據。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

RCZ-8A 智能藥物溶出儀 （天津大學精密儀器廠）；BFM-T6BI 型翻滾式貝利粉碎機；FW-100 型高速萬能小型粉碎機；ZM 型振動粉碎機；Agilent1200高效液相色譜儀。

1.2 試藥

茯苓、澤瀉、豬苓、桂皮和白術均由湖南海川醫藥有限公司提供，經湖南省中醫藥研究院中藥鑒定室謝昭明副研究員鑒定為正品。

桂皮醛對照品（批號110710-201217，中國藥品生物制品檢定所，純度98%）；乙腈為色譜純；其他試劑為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

2.1.1 細粉 將五苓散中五味藥材粉碎成細粉，過80 目篩，混勻，即得。

2.1.2 超微粉 分別取上述五味藥，混合，采用貝利粉碎機粉碎，藥材干燥至水分6%，介質填充率60%～70%， 振幅為5 mm， 粉碎溫度10～15 ℃，粉碎時間20 min，得超微粉。

2.2 薄層鑒別[6]

2.2.1 取細粉、 超微粉的五苓散各4 g， 加甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過。 濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取澤瀉對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。 取本品缺澤瀉藥材的五苓散細粉4 g，同法制成陰性樣品溶液。 吸取上述兩種溶液各5 μL， 分別點于同一硅膠G 薄層板上。 以環己烷-乙酸乙酯-丙酮（4∶1∶1）為展開劑展開，取出，晾干。 噴以2%香草醛硫酸溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。 結果如圖1 所示。

2.2.2 取細粉、 超微粉的五苓散各4 g， 加乙醇20 mL，振搖20 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取桂皮醛對照品適量，加乙醇制成每1 mL 含1 μL 溶液，作為對照品溶液。 取缺桂皮藥材的本品細粉4 g，同法制成陰性樣品溶液。 吸取上述三種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯溶液（17∶3）為展開劑展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇溶液。 結果如圖2 所示。

2.2.3 取細粉、 超微粉的五苓散各3 g， 加正己烷10 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液。 另取白術對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。 取本品缺白術藥材的五苓散細粉3 g，同法制成陰性樣品溶液。吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上。 以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（50∶0.5）為展開劑展開，取出，晾干。 噴以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。結果如圖3 所示。

圖1 五苓散中澤瀉藥材薄層鑒別色譜圖

圖2 五苓散中桂皮薄層鑒別色譜圖

圖3 五苓散中白術薄層鑒別色譜圖

2.3 桂皮醛含量測定

2.3.1 色譜條件 Hypersil BDS C18柱；以乙腈-水（33∶67） 為 流動相； 檢測 波長為290 nm； 流 速1.0 mL/min。

2.3.2 對照品溶液的制備及標準曲線的繪制 精密稱定桂皮醛對照品12.9 mg，加甲醇制成每1 mL含1.29 mg/mL 的儲備液， 精密吸取1 mL 溶液到100 mL 容量瓶， 配置成濃度為12.90 μg/mL 溶液，備用。 精密吸取2、4、6、8、10 μL 的上述對照品溶液，測定峰面積，以桂皮醛的濃度為橫坐標（x）、桂皮醛相應的峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，其回歸方程為

可見桂皮醛在25.8～129 ng 之間具有良好的線性關系。 桂皮醛對照品的HPLC 色譜圖見圖4。

2.3.3 供試品溶液的制備[6]取細粉及超微粉末各約2 g， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中， 加入甲醇50 mL，塞緊，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz) 10 min，放置過夜，同法再超聲處理1 次，并稱定質量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液5 mL，置25 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。 取缺桂皮藥材的五苓散細粉1.960 2 g，同法制成陰性樣品溶液。

2.3.4 樣品測定 按“2.3.1”色譜條件對10 批五苓散樣品中桂皮醛含量進行測定， 傳統飲片中桂皮醛的含量為（1.55±0.03）mg/g，超微飲片中桂皮醛的含量均值為（1.55±0.02）mg/g。 其HPLC 圖譜見圖4。

2.4 溶出度測定[7]

2.4.1 供試液處理 樣品的溶出采用槳法[6]。 脫氣純凈水900 mL 為溶出介質，溫度（37.0±0.5）℃，轉速為100 r/min， 取超微粉末5.092 1 g 和細粉5.055 7 g分別置于杯內，槳降入溶出介質中，立即計時至2、4、8、15、30、45、60、80、120、180 min。 取樣約5 mL，同時補充已預熱的相同溫度下等量的溶出介質。 微孔濾膜過濾，備用。

圖4 桂皮醛對照品與五苓散供試品HPLC 圖

溶出量的測定比較按照 《中國藥典》2010 版一部制劑通則散劑項下規定的散制劑溶散時限為1 h，現設3 h 為測定終點。 測得數據如下：超微粉末、細粉在3 h 時桂皮醛的溶出量分別為1.50 mg/g與1.25 mg/g。五苓散超微粉末在溶出時限內有效成分溶出量明顯優于細粉。 各時間點測得的桂皮醛累計溶出百分率見表1。

表1 五苓散中桂皮醛累計溶出百分率 （%）

2.4.2 Weibull 分布曲線擬合[8-9]結果，按威布爾分布模型進行數據擬合， 以lnt、ln[-ln(1-F)]為變量得到兩種制劑的回歸方程分別為：

2.4.3 溶出速率的比較 根據Weibull 分布模型可以得到以下分布參數方程， 計算T50、T60、T70、T80、T90值，結果見表2。

表2 超微粉與細粉五苓散中桂皮醛的溶出速率（min）

3 討論

從表2 中的數據可以看出， 實際溶出數據與Weibull 分布模型結論基本符合， 將超微粉與細粉中桂皮醛的溶出參數比較，發現前者與后者溶出參數之間差異十分顯著，超微粉所用溶出時間明顯少于細粉。以溶出90%為例， 細粉長達966 min， 而超微只需64 min，因此超微粉碎技術可以顯著加快五苓散中桂皮醛的體外溶出率，符合中藥粉體工程學理論[10]。

通過細粉與超微粉中薄層鑒別桂皮醛的含量等實驗，表明經超微化的五苓散其有效化學成分穩定，為該技術應用于中藥散劑中提供實驗依據。

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