熱敷騰包質量標準建立的方法研究

廖 欣 巖林蘋 白玲玲 王 婷 蘇 華 陳 星

江蘇省南京軍區南京總醫院制劑科，江蘇南京 210002

熱敷騰包質量標準建立的方法研究

廖 欣 巖林蘋 白玲玲 王 婷 蘇 華 陳 星▲

江蘇省南京軍區南京總醫院制劑科，江蘇南京 210002

目的研究建立熱敷騰包的質量標準。 方法 采用薄層色譜鑒別法對方中艾葉、乳香、黃柏、赤芍、續斷、桑寄生6味中藥進行定性分析；采用醇溶性浸出物熱浸法測定制劑中浸出固體物。 結果薄層色譜斑點清晰，分離度好，陰性無干擾，專屬性強；浸出固體物≥2.0%。 結論建立熱敷騰包質量標準的方法有效可行，專屬性強，重復性好，制劑質量穩定可控。

熱敷騰包；質量標準；薄層色譜法；醇溶性浸出物

熱敷騰包由艾葉、透骨草、乳香、丹參、黃柏、赤芍等19味中藥組成，為南京軍區南京總醫院（以下簡稱“我院”）自主研發的外用制劑。采用化學發熱劑熱包作為熱源，藥材經粉碎滲漉提取精制后吸收于無紡布而制成藥物紙，使用時先將藥物紙敷于患處，再用熱包進行熱敷，借助熱的傳導作用促進局部血液循環，進而促進藥物吸收，并發揮治療作用。適用于關節炎、肩周炎、腰腿痛、慢性腸炎、痛經、子宮內膜異位等癥。為了更好地控制熱敷騰包的質量，對其質量標準進行了研究，根據中醫藥理論采用薄層色譜法對方中君藥艾葉、貴重藥材乳香、臣藥黃柏、赤芍和佐藥續斷、桑寄生進行了定性鑒別并對其浸出固體物做了限量測定，方法專屬性強，操作簡便，準確可靠，可有效控制熱敷騰包的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

WFH-203B三用紫外分析儀（上海精科實業有限公司），AE240電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），KQ-250DB臺式數控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司），HH-6數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司），SC202-00電熱恒溫干燥箱（江蘇省南通市金余科研儀器設備廠）；以上儀器均檢定合格，實驗所用玻璃量具均經過校驗合格。

1.2 試劑和試藥

艾葉對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121345-201002），乳香對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120970-201305），鹽酸小檗堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110713-200208），赤芍對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121092-201003），芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-200732），川續斷皂苷Ⅵ對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111685-201305），桑寄生對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121075-201003）。熱敷騰包（規格：熱包1個加435 mm×160 mm藥物紙 1張，我院自制，批號：150423、150528、150612），其余所用試劑均為分析純。薄層層析硅膠G（薄層色譜用，青島海洋化工廠）。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 艾葉的薄層色譜鑒別 艾葉主含揮發油，為多成分混合物，經分離鑒定的有：萜品烯醇-4、芳樟醇、桉油素、樟腦等。該薄層檢查法選擇這些成分作為觀察指標進行薄層鑒別。具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加石油醚（30～60℃）100 mL浸泡2 h，濾過蒸干，殘渣加石油醚（30～60℃）溶解并定容至1 mL，作為樣品溶液。另取艾葉對照藥材1 g，同樣品溶液制備法制成對照藥材溶液。除艾葉外的藥材按處方比例稱取、粉碎，按生產工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各20 μL，對照藥材溶液10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑自制的硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸-乙酸乙酯 （8∶0.5∶2）的上層溶液為展開劑展開晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視，結果顯示，樣品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的紅色熒光斑點，陰性對照在此位置上無斑點，見圖1（封四）。

2.1.2 乳香的薄層色譜鑒別 乳香主要含有樹脂、樹膠和揮發油，樹脂的主要成分為游離α/β-乳香酸等；樹膠主要成分為阿糖酸的鈣鹽和鎂鹽；揮發油含蒎烯、α，β-水芹烯等。該薄層檢查法選擇這些成分作為觀察指標進行薄層鑒別[1-2]。具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加150 mL乙醚室溫超聲30 min，濾過蒸干，殘渣加乙酸乙酯溶解并定容至1 mL，作為樣品溶液。另取乳香對照藥材0.5 g，加50 mL乙醚，同樣品溶液制備法制成對照藥材溶液。除乳香外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各10 μL，對照藥材溶液2 μL，分別點于同一市售的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-石油醚（30～60℃）（1∶10）為展開劑展開晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱3 min。結果顯示，樣品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的桃紅色斑點，陰性對照在此位置上無斑點，見圖2。

2.1.3 黃柏的薄層色譜鑒別 選擇鹽酸小檗堿作為觀察指標對黃柏進行薄層鑒別，具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加甲醇150 mL加熱回流30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為樣品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品適量加甲醇制成每毫升含0.5 mg的對照品溶液。除黃柏外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各20 μL，對照品溶液10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑自制的硅膠G薄層板上，以甲酸-乙酸異戊酯-36%醋酸（3∶7∶1）為展開劑展開晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視，結果顯示，樣品色譜在與對照品色譜相應的位置上顯相同的黃色熒光斑點，陰性對照在此位置上無斑點，見圖3。

圖2 乳香鑒別的TLC圖譜

圖3 黃柏鑒別的TLC圖譜

2.1.4 赤芍的薄層色譜鑒別 赤芍含芍藥苷、芍藥內酯苷等，具有清熱涼血，散瘀止痛的功效[3]147-148。該薄層檢查法選擇芍藥苷作為觀察指標進行薄層鑒別[4-5]，具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加150 mL乙醇水浴加熱回流1 h，濾過蒸干，殘渣加水30 mL溶解，用乙醚振搖提取（15 mL×2次），棄去乙醚液，水層再用正丁醇振搖提取（20 mL×3次），合并正丁醇提取液，再用純化水洗滌（20 mL×2次），棄去水液，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至1 mL，作為樣品溶液。另取赤芍對照藥材0.5 g，加50 mL乙醇，同樣品溶液制備法制成對照藥材溶液。再取芍藥苷對照品適量加甲醇制成每毫升含1 mg的對照品溶液。除赤芍以外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各20 μL，對照藥材溶液與對照品溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑自制的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶40∶10∶0.4）為展開劑展開晾干，噴5%香草醛硫酸溶液，105℃下加熱3 min。結果顯示，樣品色譜在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點，陰性對照在此位置上無斑點，見圖4。

圖4 赤芍鑒別的TLC圖譜

2.1.5 續斷的薄層色譜鑒別 川續斷皂苷Ⅵ為其主要作用成分，該薄層檢查法選擇此成分作為觀察指標進行薄層鑒別[6]。具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加100 mL甲醇室溫超聲30 min，濾過蒸干殘渣加水30 mL溶解，用正丁醇振搖提取（30 mL×2次），合并正丁醇提取液，用30 mL氨試液洗滌一次，氨試液棄去，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至1 mL，作為樣品溶液。另取川續斷皂苷Ⅵ對照品適量加甲醇制成每毫升含1 mg的對照品溶液。除續斷外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各15 μL，對照品溶液10 μL，分別點于同一市售的硅膠G薄層板上，以甲醇-三氯甲烷-水（7∶13∶2）的下層溶液為展開劑（分層時間久一些，使其分至澄清），展開晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱3 min。結果顯示，樣品色譜在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的紫色斑點，陰性對照在此位置上無斑點，見圖5。

2.1.6 桑寄生的薄層色譜鑒別 桑寄生主要含黃酮類化合物：槲皮素、槲皮苷及少量的右旋兒茶酚[3]281，該薄層檢查法選擇這些成分作為觀察指標進行薄層鑒別[7-8]。具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加甲醇-水（1∶1）100 mL，加熱回流1 h，趁熱濾過，濾液濃縮至約20 mL，加水10 mL，再加稀硫酸0.5 mL，煮沸回流1 h，用乙酸乙酯振搖提取（30 mL×2次），合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯溶解并定容至1 mL，作為樣品溶液。另取桑寄生對照藥材1 g，同樣品溶液制備法制成對照藥材溶液。除桑寄生外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。

圖5 續斷鑒別的TLC圖譜

照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各15 μL，對照藥材溶液5 μL，分別點于同一市售的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲苯-甲酸（4∶5∶0.8）為展開劑展開晾干，噴2%三氯化鐵乙醇溶液。結果顯示，樣品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的墨色斑點，陰性對照在此位置上無斑點，見圖6。

圖6 桑寄生鑒別的TLC圖譜

2.2 浸出固體物限量測定

取本品一袋，取出藥物紙置錐形瓶中，精密加入75%乙醇100 mL使其完全浸泡，稱重，超聲30 min，放冷，補足重量，搖勻，濾過，精密量取濾液10 mL置已恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，置恒溫干燥箱中105℃干燥3 h，立即移至干燥器中，冷卻30 min后，迅速稱定重量[8]，計算供試品中浸出固體物的含量（%），不得少于2.0%[3]附錄XA。測定10批樣品，3批制劑的浸出固體物含量均在標準限度內，該標準有效可行，制劑質量穩定可控。見表1。

表1 浸出固體物測定結果

3 討論

熱敷騰包共19味中藥制成，藥味較多，原質量標準中無薄層色譜鑒別項，此次實驗對方中艾葉、乳香、黃柏、赤芍、續斷、桑寄生6味中藥進行薄層色譜定性鑒別。經方法學考察，所建立的薄層色譜鑒別方法專屬性強，重復性和穩定性好，陰性無干擾，取3批不同批號的樣品依法檢驗，結果均滿意，可作為熱敷騰包的質量控制方法。

方中艾葉含揮發油，易溶于石油醚、二硫化碳等，故采用石油醚浸泡提取。以藥典收載的石油醚（60～90℃）加熱回流提取為提取方法，所提取出的樣品與對照藥材以及陰性對照在相應位置上均有紫紅色斑點，陰性干擾較大。經處方分析實驗，分別以石油醚（60～90℃）和石油醚（30～60℃）為提取溶劑，采用浸泡提取的方法，后者所提取出的樣品點樣后斑點較前者清晰，分離度好，陰性無干擾，所以選用石油醚（30～60℃）為艾葉薄層色譜鑒別的提取溶劑浸泡提取[9]。

黃柏為方中臣藥，含生物堿類等，其中生物堿類中的鹽酸小檗堿為其主要作用成分，含量較多，用于抗菌、抗炎、解熱等癥，易溶于甲醇[10]。本研究分別用“1%醋酸甲醇溶液”與“甲醇溶液”為提取溶劑做比較，以藥典中“三氯甲烷-甲醇-水（30∶15∶4）下層溶液，氨蒸氣飽和為展開劑，稀碘化鉍鉀試液為顯色劑”與“乙酸異戊酯-36%醋酸-甲酸（7∶1∶3）為展開劑，紫外燈（365 nm）下檢視為顯色劑”為顯色條件相比較，前者所提取出的樣品斑點與對照品斑點拖尾嚴重，分離度較差，并且樣品斑點顏色較淺，不利于薄層色譜分析。后者所提取出的樣品與對照品斑點位置相一致，且較前者斑點分離度高，斑點表現較好，陰性無干擾，所以選用甲醇溶液為提取溶劑，乙酸異戊酯-36%醋酸-甲酸（7∶1∶3）為展開劑，紫外燈（365 nm）下檢視為顯色劑作為黃柏的薄層色譜鑒別方法。

方中續斷主要含龍膽堿、皂苷類成分（如川續斷皂苷Ⅵ）及揮發油，其中主要作用成分川續斷皂苷Ⅵ具有止血，促進骨損傷愈合，降低子宮收縮等作用，易溶于正丁醇，故供試品溶液采用正丁醇振搖提取，因雜質較多用氨水洗滌可有效除去雜質，并采用皂苷類常用顯色劑10%硫酸乙醇溶液作為顯色劑，斑點表現較好，可作為續斷的質量控制方法。

方中桑寄生的提取方法為《中國藥典》中所收載的方法，但藥典以甲苯（水飽和）-甲酸-甲酸乙酯（5∶1∶4）為展開劑，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈（365 nm）下檢視為顯色劑的方法不適用于本制劑中桑寄生的鑒別，其樣品與對照均無斑點。經查閱文獻與實驗摸索后，分別以“甲苯-乙酸乙酯（3∶1）為展開劑，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑”與“甲苯-乙酸乙酯-甲酸 （5∶4∶0.8）為展開劑，2%三氯化鐵乙醇溶液為顯色劑”相比較，點樣結果顯示后者樣品與對照藥材在相同位置有一相同的墨色斑點，且斑點分離度較前者好，清楚明顯，陰性對照在此位置上沒有斑點，故后者可作為桑寄生的質量控制方法。

熱敷騰包為我院自制外用制劑，其藥味較多，藥量相對較小，陰性干擾大，指標成分亦較多，給含量測定及其方法學考察帶來一定困難，為此本研究對制劑的浸出固體量進行限量測定，加強了熱敷騰包的質量控制，質量標準也更加規范完整可靠。

[1]聶黎行，劉燕，代忠，等.活血止痛制劑質量標準研究[J].中國藥學雜志，2012,47（12）：989-992.

[2]付妍，張亞雙，閔春艷.活絡丸小中乳香的定性鑒別方法研究[J].中國藥事，2013,27（2）：183-185.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[4]郭強.活血通脈片質量標準研究[J].中國藥事，2014,28（12）：1374-1379.

[5]張克良，劉雪蓮，張雯，等.宮連消顆粒質量標準研究[J].世界中醫藥，2014,9（7）：941-944.

[6]薛世嬌，談聰，馬世華，等.骨痹顆粒質量標準研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2014,25（5）：614-618.

[7]羅霄山，孫冬梅，羅文匯，等.痹痛巴布劑質量標準研究[J].海峽藥學，2013,25（4）：8-10.

[8]鞏偉，孫旭，趙慶華，等.板藍根配方顆粒的質量標準研究[J].中國藥房，2015,26（18）：2541-2544.

[9]雷利利，張熙潔，侯林中，等.現代色譜技術在中藥制劑多指標成分質量控制中的應用[J].中國藥房，2011,22（39）：3733-3735.

[10]鐘長軍.對中藥現代化研究的幾點思考[J].西部中醫藥，2012，25（1）：92-94.

Quality standard establishment of Refutengbao

LIAO Xin YAN Linping BAI Lingling WANG Ting SU Hua CHEN Xing▲
Department of Preparation Division,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command,Jiangsu Province,Nanjing 210002,China

Objective To research the establishment of quality standard of Refutengbao.Methods TLC was used in Folium Artemisiae argyi,Frankincense,Phellodendron,Radix Paeoniae rubra,Radix Dipsaci and the Parasitic Loranthus of prescription for qualitative analysis.Solid content in the preparation was determined by the method of alcohol leaching. Results The TLC spots were clear,the separation degree was good without interference.The method was highly specific.The extract was more than or equal to 2.0%.Conclusion The established quality standard of Refutengbao is feasible and effective,strong specific,with good repeatability,the quality of the preparation is stable and controllable.

Refutengbao;Quality standard;Thin Layer Chromatography;Ethanol-soluble extractive

R927.11

A

1673-7210（2015）11（c）-0013-04

2015-07-23本文編輯：趙魯楓）

全軍醫療機構制劑標準提高科研專項課題重點項目（14ZJZ08）。

▲通訊作者