妊娠期高血壓疾病胎盤源性vWF與vWF-cp的表達及意義

李 媛，張延麗

（1．山西醫科大學2012級碩士10班，山西 太原 030001；2．山西醫科大學第一臨床醫學院婦產科，山西 太原 030001）

妊娠期高血壓疾病胎盤源性vWF與vWF-cp的表達及意義

李 媛1，張延麗2

（1．山西醫科大學2012級碩士10班，山西 太原 030001；2．山西醫科大學第一臨床醫學院婦產科，山西 太原 030001）

目的 探討血管性血友病因子（vWF）與血管性血友病因子裂解酶（vWF-cp）在妊娠期高血壓疾病胎盤組織中的表達及意義。方法 采用免疫組織化學方法檢測妊娠期高血壓疾病患者90例（妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組，各30例）與30名正常妊娠產婦胎盤組織中vWF和vWF-cp的表達。結果 妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組對比正常妊娠組，vWF在胎盤組織的表達強度顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.05）；vWF-cp在胎盤組織里的表達強度顯著降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 妊娠期高血壓疾病中vWF及vWF-cp的表達水平變化最終導致血管內皮細胞脫落產生胎盤源性改變，從而與妊娠期高血壓疾病的發病與病情有關。

vWF；vWF-cp；胎盤源性子癇前期；妊娠期高血壓疾病；免疫組織化學

妊娠期高血壓疾病（HDCP，Hypertensive disorders complicating pregnancy）是孕婦所有的一類疾病。[1]是危害孕婦健康和造成胎兒、新生兒死亡的重要疾病之一，是國內外產科專家學者研究的熱點課題。HDCP中子癇前期的發生機制可為母源性子癇前期、胎盤源性子癇前期、還存在以上二者同時存在的情況。vWF與vWF-cp，在高血壓或糖尿病等疾病患者血漿中變化的相關報告較多，其在HDCP發病過程中的報道較為罕見，本研究以二者在HDCP胎盤組織中可能存在的作用意義為切入點，通過采用SABC方法，檢測vWF和vWF-cp在正常妊娠產婦與HDCP各組患者胎盤組織內的表達與強度，來探討二者在HDCP胎盤組織中的表達及意義，進而為臨床上研究HDCP提供實驗理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取山西醫科大學第一臨床醫院婦產科2013年3月～2014年3月收治的120例（正常妊娠30例、妊娠期高血壓疾病30例、輕度子癇前期30例、重度子癇前期30例）產婦的胎盤組織。子癇前期的診斷標準參照謝幸和荀文麗主編的《婦產科學》第8版[1]。所有產婦均排除其他妊娠合并癥等疾病，且均為單胎初產婦。四組產婦年齡、孕次、分娩方式之間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。重度子癇前期產婦組和正常妊娠產婦組孕齡比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 四組產婦一般資料比較（±s）

表1 四組產婦一般資料比較（±s）

組別 n 年齡（歲） 孕齡（周） 胎盤重量（g）正常妊娠組 30 26.32±4.64 38.15±1.77 722.36±67.24妊娠期高血壓組 30 28.17±3.42 38.25±2.67 713.52±73.28輕度子癇前期組 30 28.61±4.41 37.47±3.31 622.33±42.17重度子癇前期組 30 29.49±5.32 36.01±3.53 610.71±76.13

1.2 實驗方法

1.2.1 標本采集

產婦在胎盤娩出后，第一時間于胎盤母體組織胎盤中央帶上（臍帶附著部的對側母體面），避開梗死、鈣化及出血區等非正常區域，采集約1 cm× 1 cm×1 cm實驗標本。用生理鹽水漂洗標本3次后，浸泡于10%中性福爾馬林溶液中固定24～48 h，常規石蠟包埋，備用待做HE染色及免疫組化。

1.2.2 標本處理

將所有標本按厚度為4 μm，進行5張連續切片，放置于多聚賴氨酸處理過的玻片上，并以58 ℃烤片2 h，然后在4℃條件下保存備用。再各取10 m石蠟標本3張，置1.0 mL無菌Eppendorl試管中，同樣4℃保存備用。

1.2.3 測定方法

采用免疫組化SABC法。特異性兔抗人vWF-cp抗體與VWF-cp抗體工作濃度均為1:100（由武漢博士德生物工程有限公司提供）。實驗步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

1.2.4 判定結果

以陽性細胞界定為胎盤血管內皮出現明顯的棕黃色顆粒；陰性細胞界定為無色（或與背景顏色一致）。把備用的標本切片放置于顯微鏡下，5名經驗豐富的專業人員以400倍高倍數下獨立閱片，每人隨機讀取5個視野，采用病理圖像分析軟件做半定量分析，計算整體的平均灰度值。

1.3 統計學方法

采用SPSS 13.0統計學軟件對數據進行處理，計量資料以“±s”表示，計數資料采用x2檢驗，LSD法對組間分析比較，以P＜0.05為差異有統計意義。

2 結 果

2.1 vWF-cp表達強度

通過軟件對vWF-cp免疫組織化學染色切片進行灰度測定，實現對vWF-cp在胎盤組織中表達的強弱比較。實驗結果發現：與正常妊娠組比較，輕、重度子癇前期組和妊娠高血壓組vWF-cp陽性表達率逐漸減弱，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 四組產婦胎盤組織vWF-cp表達強度比較（±s）

表2 四組產婦胎盤組織vWF-cp表達強度比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與輕度子癇前期組比較，#P＜0.05

組別 n ±s F P正常妊娠組 30 155.19±28.56妊娠期高血壓組 30 135.12±25.36* 305.88 ＜0.05輕度子癇前期組 30 101.01±26.46*#重度子癇前期組 30 84.50±21.71*#

2.2 vWF表達強度

與正常妊娠組比較，妊娠高血壓組，輕度子癇前期組，重度子癇前期組vWF陽性表達強度呈現逐漸遞增趨勢，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 四組產婦胎盤組織vWF表達強度比較（±s）

表3 四組產婦胎盤組織vWF表達強度比較（±s）

注：與正常組比較，* P＜0.05；與輕度子癇前期組比較，#P＜0.05

組別 n ±s F P正常妊娠組 30 84.53±8.27妊娠期高血壓組 30 141.34±24.95* 351.29 ＜0.05輕度子癇前期組 30 151.21±21.51*#重度子癇前期組 30 160.68±27.13*#

3 討 論

3.1 vWF和vWF-cp的生物學功能

vWF是一種具有粘附功能的血漿糖蛋白，由巨核細胞和內皮細胞生成。持續升高則可見于妊娠、甲亢，糖尿病、腎功能不全、肝病、動脈粥樣硬化、炎癥和腫瘤。vWF多聚體的大小與功能關系密切：其分子量越大，與血小板結合能力越強，更能促進血小板聚集、血栓形成與微血管病性溶血[4-5]。vWF-cp為具有Ⅰ型凝血酶敏感蛋白去整合素樣和金屬蛋白酶家族的成員，又名為ADAMTS13。是降解血漿中vWF多聚體的主要蛋白酶。在生理狀態之下，血漿中的vWF能夠被vWF-cp水解為小分子肽段，調控vWF與內皮下膠原和血小板的粘附能力，也是通過其降解血漿中vWF的分子的大小來實現的。

3.2 vWF和vWF-cp與妊娠期高血壓疾病的關系

Deng[6]等研究提示子癇及子癇前期孕婦血漿vwF異常增高，血管內皮細胞損傷程度及凝血亢進傾向較正常孕婦更嚴重。近年來，國內有研究[7]分析高血壓疾病患者vWF-cp活性水平，結果發現高血壓病患者血漿vWF-cp活性水平顯著低于健康人。同時有研究表明[8]，在血漿檢測中，除輕度外，中、重度HDCP血漿vWF-cp活性顯著低于正常妊娠婦女。徐愛群，盛霞玲等的實驗結果表明，罹患妊娠期高血壓疾病時，由于各種致病因子影響，使得血管重鑄、子宮螺旋動脈重建失敗，致使胎盤種植變淺、胎盤組織中血液灌注下降、釋放一系列細胞毒性因子、血管內皮細胞受損，加之血管活性物質釋放，造成血管痙攣性收縮，血壓上升，導致了HDCP的一系列病理變化。

本實驗結果顯示，與正常孕婦組比較，妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組胎盤組織中vWF表達強度有增高趨勢，差異有統計學意義（P＜0.05），這提示：vWF在滋養層細胞、血管內皮細胞和絨毛間質的表達明顯增加，可能影響滋養細胞的分化及侵入，造成滋養細胞侵入缺陷，滋養細胞侵入變淺，僅達到蛻膜層，同時vWF可使螺旋動脈失去正常的生理變化，造成胎盤灌注不足[9]，加重血管內皮細胞的損傷。而vWF-cp表達強度有降低趨勢，且各組間差異顯著，這提示：vWF-cp在滋養層細胞、血管內皮細胞和絨毛間質的表達明顯減少，使從而vWF活性增加，導致HDCP的一系列病理改變。

綜上所述，通過對HDCP患者胎盤中vWF和vWF-cp異常表達研究發現，vWF和vWF-cp共同參與HDCP的病理過程，可能與二者表達失衡導致HDCP胎盤滋養層細胞的分化異常、侵入較淺和螺旋動脈重鑄障礙、子宮和胎盤血管中血液灌注較少有關。對vWF和vWF-cp在HDCP中詳細的作用機制和具體的因果關系還未能完全的闡明，仍舊需要更進一步的研究和實驗。

[1] 謝 幸,荀文麗.婦產科學[M].第8版.北京;人民衛生出版社,2014:92.

[2] 徐愛群,夏 敏,王 威,等.妊娠高血壓綜合征胎盤細胞凋亡現象及凋亡相關基因表達的研究[J].中華圍產醫學雜志,2002,5(3):213-214.

[3] 盛霞玲.妊娠高血壓綜合征患者胰島素樣生長因子與胎兒發育的關系[J].中國醫藥導報,2009,6(19):15-16.

[4] 阮長耿.血小板與血栓性疾病[J].醫學研究通訊,2004, 33(7):7-10.

[5] 黃細蓮,陳方平,杜建偉,等.血栓性疾病患者血小板相關組織因子水平及活性改變的意義[J].中華內科雜志,2005,8:11.

[6] Deng L,Bremme K,Hansson LO etal.Plasma levels of von willenrad factor and fibronectin as markers of persisting endothetial damage in preeclampsia [J].Obstct Gynecol,2004,84:941-944.

[7] 王維紅.羊水過少對產后新生兒不良結局分析[J].長治醫學院學報,2007,21(4):294-296.

[8] 曾志羽,劉 倩,鄭慧蕾,等.高血壓病患者血漿血管性血友病因子及其裂解酶的變化[J].廣西醫科大學學報,2009,(3):346-348.

[9] 貿同強,趙三純.子癇前期臨床發病相關因素研究進展[J].實用婦產科雜志,2012,28(10):823-826.

The expression and significance of hypertensive disorders in pregnancy,placenta derived vWF and vWF-cp

LI Yuan1,ZHANG Yan-li2
(1 master class 10 of grade 2012 in Shanxi Medical University,Shanxi Taiyuan 030001,China；2 Department of Obstetrics and Gynecology,first clinical medical college of Shanxi Medical University,Shanxi Taiyuan 030001,China)

Objective Study of vWF and vWF-cp expression and significance in placental of hypertensive disorder in pregnancy.Methods Detection of 90 cases of gestational hypertension group by munohistochemical method (30 cases of gestational hypertension; 30 cases of mild preeclampsia; 30 cases of severe preeclampsia) and 30 cases of normal pregnancy the expression of vWF and vWF-cp in the placenta. Results Gestational hypertension; 30 cases of mild preeclampsia; 30 cases of severe preeclampsia compared with normal pregnancy group, the expression intensity of vWF in placenta in significantly increased (P＜0.05), with a statistically significant difference between the groups; the expression intensity of vWF-cp in placenta tissue was significantly lower (P＜0.05), with a statistically significant difference between the groups.Conclusion The expression levels of vWF and vWF-cp in gestational hypertension disease in patients with damaged vascular endothelial cells in the placenta, the placenta is small, resulting in the pathogenesis of vascular endothelial cell loss hypertension induced apoptosis of placenta derived cells and pregnancy related disease.

vWF;vWF-cp;The source of placenta in preeclampsia;Hypertensive disorders complicating pregnancy;Immunohistochemistry

R587.1

B

ISSN.2095-6681.2015.009.081.03