HPLC同時測定益腦膠囊中五味子醇甲和五味子乙素的含量

劉曉明雷 蓉,2劉永利王 璐

l.河北省藥品檢驗研究院，河北石家莊 050011；2.河北醫科大學藥學院，河北石家莊 050011

HPLC同時測定益腦膠囊中五味子醇甲和五味子乙素的含量

劉曉明1雷 蓉1,2劉永利1王 璐1

l.河北省藥品檢驗研究院，河北石家莊 050011；2.河北醫科大學藥學院，河北石家莊 050011

目的 建立使用高效液相色譜法同時測定益腦膠囊中五味子醇甲、五味子乙素的含量，完善、提高益腦膠囊的質量標準。 方法 Dikma RP-C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）；檢測波長：250nm；體積流量：1.0mL/min；柱溫：30℃。 結果 該方法的五味子醇甲線性范圍在0.01577～1.5768μg（r=0.9999），平均回收率為103.1%，RSD 為1.0%。五味子乙素線性范圍在0.004160～0.2080μg （r=0.9999），平均回收率為101.7%，RSD為1.2%。 結論 該方法可行、重復性好， 能有效控制益腦膠囊中五味子的質量。

益腦膠囊；五味子醇甲；五味子乙素；高效液相色譜

益腦膠囊現收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第五冊，標準號：WS3-B-1004-91，主要由龜甲膠、遠志、龍骨、靈芝、五味子、麥冬、石菖蒲、黨參、人參、茯苓10味藥組成。該品種具有補氣養陰，滋腎健腦，益智安神的功效[1-3]。用于神經衰弱，腦動脈硬化引起的體倦頭暈，失眠多夢，記憶力減退等屬于心肝腎不足，氣、陰兩虛患者[4-5]。本實驗使用HPLC法研究了處方中五味子藥材的兩種化學成分五味子醇甲、五味子乙素的含量測定方法[6-7]。

1　儀器與試藥

儀器：Agilent 1260 高效液相色譜儀，Ultimate 3000 高效液相色譜儀。對照品：五味子醇甲（批號：110857-201211），五味子乙素（批號：11065-200710）。試劑：乙腈為色譜純，水為去離子水，其它試劑均為分析純。樣品：石家莊科迪藥業有限公司14批樣品，陰性樣品自制。

2　方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Dikma RP- C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），按下表梯度洗脫；流速：1.0mL/min；檢測波長：250nm；進樣量：10μL，柱溫：30℃，分析周期：55min。在以上色譜條件下,對照品溶液與樣品溶液色譜圖見圖1，五味子醇甲、五味子乙素與其他成分分離度較好。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 分別取五味子醇甲對照品、五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL分別含15μg、2μg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品10粒內容物，研細，取約2g，精密稱定，精密加入甲醇20mL，稱定重量，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

表1　梯度洗脫時間表

2.2.3陰性溶液的制備 根據處方及生產工藝制備缺五味子的陰性樣品，按“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法，制成陰性樣品溶液。

2.3方法學考察

2.3.1專屬性試驗 取陰性樣品溶液、對照品溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下進行測定，結果顯示在與五味子醇甲、五味子乙素對照品色譜峰相應的位置無色譜峰，說明樣品中其他成分對五味子醇甲、五味子乙素的測定無干擾。對照品、供試品及陰性樣品色譜圖。見圖1。

圖1　 色譜圖

2.3.2線性關系考察 取五味子醇甲、五味子乙素對照品適量，分別配成濃度約為150μg/mL和20μg/mL的溶液作為母液。取配好的母液分別稀釋至其初始濃度的0.01、0.05、0.1、0.15、0.3倍，同母液共同作為標準溶液。在上述色譜條件下,吸取上述標準溶液各10μL,注人高效液相色譜儀中進行測定。以進樣量為橫坐標X（μg），峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線，結果表明五味子醇甲在0.01577～1.5768μg的范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為Y=33508119.95；X=1709.09，r=0.9999；五味子乙素在0.004160～0.2080μg的范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為Y=28430848.52，X=8796.98，r=0.9999。

2.3.3重復性試驗 取同一批樣品9份，取樣量分別為1.6g、2.0g、2.4g，各3份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別測定含量，結果五味子醇甲平均含量為0.3066mg/g，RSD值0.5%（n=9）五味子乙素平均含量為0.1820mg/g，RSD值1.1%（n=9）。

2.3.4穩定性試驗 取同一供試品溶液，于0開始測定，以后間隔一定時間測定1次，記錄峰面積，結果五味子醇甲RSD為0.6%（n=5），五味子乙素RSD為0.7%（n=5），表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.3.5回收率試驗

2.3.5.1五味子醇甲回收率 精密稱取已知含量的益腦膠囊樣品（五味子醇甲的含量306.6μg/g）1.0g置具塞錐形瓶中，共稱取9份，分別精密加入濃度為52.51μg/mL的五味子醇甲對照品溶液4、6、10mL，每種濃度各處理三份樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率，結果五味子醇甲的平均回收率為103.1%，RSD值1.0%（n=9）。

2.3.5.2五味子乙素回收率 精密稱取已知含量的益腦膠囊樣品（五味子乙素的含量18.20μg/g）1.0g置具塞錐形瓶中，共稱取9份，分別精密加入濃度為5.2μg/mL的五味子乙素對照品溶液3、4、5mL，每種濃度各處理三份樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率，結果五味子乙素的平均回收率101.7%，RSD值1.2%（n=9）。

2.4樣品的測定

共計測定10批樣品，精密吸取適當濃度的樣品溶液10μL連續進樣2次，測定峰面積，計算樣品中五味子醇甲、五味子乙素的含量，測定結果見表2。

表2　樣品含量測定實驗結果

3　討論

3.1提取方法的選擇

在實驗中比較了超聲提取和加熱回流提取的方法，結果顯示兩種提取方法所測含量的RD值＜2%，而超聲處理方法操作簡單且節省能源，故本實驗選擇使用超聲作為樣品提取方法。實驗中首先選用了70%甲醇作為溶劑對樣品進行提取，然后將70%甲醇提取液直接進行分析，結果五味子醇甲和五味子乙素在梯度洗脫中分離度良好。于是實驗中又進一步考察了用不同濃度的甲醇溶液提取對樣品含量的影響。實驗對同一批樣品，分別考察了用甲醇、70%甲醇、50%甲醇超聲提取的樣品進行分析，實驗結果表明三種提取溶劑中以甲醇提取的樣品中五味子醇甲和五味子乙素的含量最高，故選擇甲醇作為樣品的提取溶劑[8-10]。在對樣品提取溶劑考察的同時本實驗又對超聲提取時間進行了考察，在選用同一種提取溶劑的情況下分別考察了30、40、60min的提取時間對含量的影響，結果三個時間所得含量無明顯差異，為節省能源和提取時間，所以選擇超聲提取時間為30min。

3.2檢測波長的選取

取五味子醇甲對照品、五味子乙素對照品，按正文方法制備對照品溶液，按正文色譜條件測定，使用二極管陣列檢測器在200～400nm范圍內掃描光譜，結果顯示在250nm波長處兩個化合物均有最大吸收，且中國藥典和文獻報道中五味子醇甲和五味子乙素的含量測定多選擇250nm，因此以250nm作為測定波長[11-12]。

[1]原衛生部.衛生部藥品標準[S].二部第五冊，1992，141.

[2] 陳明江，江維克.HPLC法測定益腦膠囊中五味子醇甲的含量[J].中國藥師，2010，13 （2）：291-292.

[3] 金陽.益腦膠囊質量標準的改進[J].華西藥學雜志，2006．21（6）：599-601.

[4] 江維克，周濤，郭培果，等.益腦片的質量標準研究[J].中成藥，2008，30（11）：1642-1645.

[5] 黃艷君，袁鐵流，劉建存，等.益腦膠囊中遠志及人參的質量控制方法[J].中國醫院藥學雜志，2008，28（14）：1223-1224.

[6] 秦建平，吳建雄，畢宇安，等.HPLC同時測定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹參酮ⅡA的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（2）：77-80.

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Determination of schisandrin and γ-Schizandrin in Yinao capsules by HPLC

LIU Xiaoming LEI Rong LIU Yongli WANG Lu
1.Hebei Institute for Drug Control,Shijiazhuang 050011,China;2.School of Pharmacology,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050011,China

Objective To establish a HPLC method for the determination of schisandrin,γ-Schizandrin in Yinao Capsule. Methods The determination was performed by HPLC on Dikma RP-C18(250mm×4.6mm,5μm) column. The mobile phase consisted of acetonitrile (A)-0.1% phosphoric acid solution (B) with gradient elution at a flow rate of 1.0mL/min.The detection wavelength was 250nm. Results The linear range of schisandrin was 0.01577-1.5768μg, r=0.9999.The average recovery was 103.1%,RSD=1.0%.The linear range of γ-Schizandrin was 0.004160-0.2080μg, r=0.9999.The average recovery was 101.7%,RSD=1.2%. Conclusion The method is convenient,sensitive and accurate.It can be a method for quality control in production of Yinao capsule.

Yinao Capsule;Schisandrin;γ-Schizandrin;HPLC

R284.111,211

B

2095-0616（2015）09-52-03

（2015-02-15）