氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮HPLC測定

申 安 程 偉

1.河南省焦作市食品藥品檢驗所，河南焦作454150 ； 2.河南省三門峽市公安局，河南三門峽 472000

氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮HPLC測定

申 安1程 偉2▲

1.河南省焦作市食品藥品檢驗所，河南焦作454150 ； 2.河南省三門峽市公安局，河南三門峽 472000

目的 建立氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮含量的HPLC測定方法。 方法 按如下方法設定色譜條件。色譜柱：CAPCELL PAK C18柱；流動相：磷酸二氫鉀溶液-甲醇（90∶10） ；磷酸二氫鉀溶液的配制：將10.0g磷酸二氫鉀﹑1.1g己烷磺酸鈉加水溶解并稀釋至1000mL，然后用磷酸調節溶液pH值到2.1；流速：1.0mL/min；檢測波長：210nm；進樣量：10μL；柱溫：30℃。 結果 α-吡咯烷酮的含量在0.4～4.9μg/mL 范圍內時，線性關系好，r= 0.9997,平均回收率達99.97%( RSD =0.48%，n=10）。 結論 HPLC法用于氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮含量測定，操作簡單﹑便捷，結果準確。

氨酪酸；注射液；α-吡咯烷酮；HPLC

氨酪酸是一種廣泛應用于臨床治療的一種中樞興奮藥，可用于多種疾病的治療，如腦血管疾病后遺癥﹑頭部外傷導致的記憶障礙﹑安眠藥及一氧化碳中毒導致的昏迷等[1-4]。目前，主要有氨酪酸片和氨酪酸氯化鈉注射液兩種劑型，在臨床治療中，氨酪酸氯化鈉注射液應用最為廣泛[5-7]。對氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮含量進行定量分析，可以控制藥品質量，降低不良反應發生率。

1 儀器與化學試劑

1.1 儀器

島津LC10A-TVP型高效液相色譜儀：由LC-10ATvp輸液泵﹑SPD-10Avp（UV-VIS）檢測器﹑SIL-10ADvp自動進樣器﹑CTO-10ACvp柱溫箱﹑CLASSVP工作站及C-R7A/C-R8A數據處理機等組成。

1.2 化學試劑

氨酪酸氯化鈉注射液（江蘇天禾迪賽諾制藥有限公司，H20060220）；α-吡咯烷酮（上海弘順生物科技有限公司）；水（娃哈哈純凈水）；磷酸﹑磷酸二氫鉀﹑己烷磺酸鈉采用分析純；甲醇采用色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18柱；流動相：磷酸二氫鉀溶液-甲醇（ 90∶10） （磷酸二氫鉀溶液的配置：將10.0g磷酸二氫鉀﹑1.1g己烷磺酸鈉加水溶解并稀釋至1000mL，然后用磷酸調節溶液pH值至2.1）； 流速：1.0mL/min；檢測波長： 210 nm；進樣量： 10μL；柱溫： 30 ℃。

2.2 溶液制備

空白對照溶液：移取5.0mL 0.9%氯化鈉注射液至25mL容量瓶，蒸餾水稀釋至刻度，定容，混勻

對照品溶液：取適量的α-吡咯烷酮對照品，配置濃度為32.0μg/mL的溶液，梯度稀釋至16.0﹑8.0﹑4.0﹑2.0﹑1.0μg/mL。

供試品溶液：移取5.0mL 氨酪酸氯化鈉注射液至 25mL 的量瓶內，蒸餾水稀釋至刻度，定容，混勻。

2.3 記錄色譜圖

在設定的色譜條件下，將空白對照溶液﹑對照品溶液﹑供試品溶液分別進樣，記錄對應的色譜圖。如圖1所示。

圖1 三種溶液的高效液相色譜圖

2.4 檢測精密度試驗

取0.4μg/mL的對照品溶液，連續進樣 6 次，記錄每次進樣后的色譜圖，按照主峰面積計算RSD，RSD=0.85%。

2.5 供試品溶液穩定性試驗

在溶液配制后的第0，1，4，12，24小時進行供試品溶液中α-吡咯烷酮的含量測定，計算峰面積的RSD，RSD=0.34%，氨酪酸氯化鈉溶液在24h內穩定。

2.6 線性關系試驗

分別取濃度為1.0﹑2.0﹑4.0﹑﹑8.0﹑16.0﹑32.0μg/mL的α- 吡咯烷酮對照品溶液進樣，記錄相應色譜圖。然后以α- 吡咯烷酮濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，作圖，然后進行線性回歸分析，r=0.9997，進一步對數據分析發現，當α-吡咯烷酮溶液的濃度在0.40～0.49μg/mL范圍內時，線性關系好。

2.7 樣品回收率試驗

于25mL容量瓶配制α-吡咯烷酮含量確定的氨酪酸氯化鈉溶液10份，5mL/份，分別加入20.112μg/mL的α- 吡咯烷酮溶液10mL，用0.9%氯化鈉溶液稀釋定容至刻度，然后分別進樣，記錄色譜圖，計算樣品回收率和RSD。平均回收率達99.97%。見表1。

表1 樣品回收率試驗結果

2.8 確定樣品檢出限

取濃度為0.1μg/mL的α-吡咯烷酮進行不同倍數的稀釋，按照色譜條件進行HPLC分析，確定α-吡咯烷酮的檢出限，試驗結果為0.5ng。

2.9 含量測定試驗

取同批次的氨酪酸氯化鈉溶液供試品5份，分別配制為供試品溶液，依次進樣，計算α-吡咯烷酮含量，含量測定結果分別是0.140%﹑0.139%﹑0.143%﹑0.142%﹑0.141%，α-吡咯烷酮平均含量為0.141%，RSD=0.16%。

3 討論

近年來，為減少藥品不良反應，國家藥典下發了相應的文件，要求加強氨酪酸氯化鈉注射液中有關物質的檢查。筆者通過查閱資料發現，氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮的含量測定標準并不統一，因此，結合相關資料，給出了用高效液相色譜法測定氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮含量的具體方法。

氨酪酸的合成通常采用吡咯烷酮在高溫﹑堿性條件下水解開環的化學合成方法，不可避免的，氨酪酸原料藥中會含有一定量的α-吡咯烷酮[8]。α-吡咯烷酮是一種毒性比較大的化學雜質，如果其在氨酪酸氯化鈉注射液中的含量較高，必然會提高藥品不良反應發生率，威脅患者的用藥安全[9]。因此，必須建立氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮的含量測定方法。

高效液相色譜法（HPLC）作為色譜法的一種，是藥物分析中的一種重要分析方法，有著明顯優勢[9-17]。（1）應用范圍廣，大多數有機化合物都可以采用HPLC進行檢測分析；（2）分離效能高，具有很高的理論塔板數，分離效果好；（3）分析速度快，目前的高效液相色譜儀可以實現20min內對樣品的分析，有的樣品的分析時間不超過5min。（4）靈敏度高，HPLC的進樣量可以是幾μL，可以實現對微量物質的檢測。（5）樣品可回收，高校液相色譜儀在工作過程中，并不會破壞檢測物質結構，因此，樣品可以回收。本次研究中將色譜條件中的檢測波長設定為210nm，主要原因是，在該波長下α-吡咯烷酮才有吸收，而且，空白對照溶液在此波長下沒有紫外吸收，不會干擾試驗進行；另外，流動相選擇磷酸二氫鉀溶液-甲醇（90∶10），可以確保理想的分離度。

研究結果表明，利用HPLC對氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮的含量進行測定，具有很好的分離度，峰面積與α-吡咯烷酮之間的線性關系以及樣品回收率均獲得比較滿意的試驗結果。

綜上所述，HPLC法用于氨酪酸氯化鈉注射液中的α-吡咯烷酮含量測定，操作簡單﹑便捷，結果準確可靠，值得在氨酪酸氯化鈉注射液有關物質檢查的藥物分析中使用該方法。

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Determination of α-pyrrolidone in aminobutyric acid sodium chloride injection by HPLC

SHEN An1CHENG Wei2
1.Jiaozuo Institute for Food and Drug Control, Jiaozuo 454150, China; 2.Public Security Bureau of Sanemenxia City He'nan Province, Sanemenxia 472000, China

Objective To establish a HPLC method for the content of α-pyrolidone in aminobu-tyric acid sodium chloride injection. Methods Set chromatographic conditions as follows. Chromatographic column: CAPCELL PAK C18column; Mobile phase: potassium dihydrogen phosphate solution - methanol (90∶ 10); the preparation of the potassium dihydrogen phosphate solution: potassium dihydrogen phosphate 10.0 g and 10.0 g hexane sulfonic acid sodium is dissolved with water and diluted to 1000 mL, then adjustment the pH of the solution with phosphoric acid to 2.1; Flow rate: 1.0 mL/min; Detection wavelength : 210 nm ; Sample quantity: 10 μL; Column temperature: 30℃. Results The content of α-pyrolidon within the scope of 0.4 to 4.9 μg/L, good linear relation, r=0.9997, the average recovery is 99.97% (RSD=0.48%, n=10). Conclusion The HPLC method should be used in the determination of α-pyrolidone's content in aminobu-tyric acid sodium chloride injection, the operation is simple and convenient and the result is accurate.

Aminobutyric acid; Injection; α-pyrrolidone; HPLC

R927.1

A

2095-0616（2015）16-48-03

2015-06-24）

▲通訊作者