高效液相色譜法測定布洛芬脂肪乳劑中藥物含量

劉振波

布洛芬為芳基烷酸類非選擇性非甾體抗炎藥，布洛芬難溶于水，易溶于乙醇、乙腈、丙酮等有機溶劑。布洛芬能通過抑制環氧化物酶（COX－2），抑制前列腺素的合成與釋放，具有解熱，鎮痛，抗炎作用［1－3］。 目前臨床現有制劑多為口服制劑，但是布洛芬及其他非選擇性非甾體抗炎藥口服常常會引起嚴重的胃腸道炎癥、出血潰瘍等胃腸道反應［4］。同時對一些不方便口服給藥的患者，如手術患者和兒童而言注射劑型也是不可或缺的。2009年6月坎伯蘭公司（Cumberland）研制的布洛芬注射液在美國獲FDA批準上市，這是首個由美國FDA批準的布洛芬注射藥物。布洛芬注射液目前在臨床上主要用于治療術后疼痛，可減少嗎啡等阿片類鎮痛藥的使用量［5］。該布洛芬注射液由摩爾比為0.92∶1的精氨酸和布洛芬以及適量的pH調節劑氫氧化鈉組成，臨床上使用的規格為4 ml/400 mg或8 ml/800 mg。臨床使用時使用生理鹽水或5%的葡萄糖注射液稀釋至藥物濃度不高于4 mg/ml［6］。但是該布洛芬注射液使用精氨酸作為增溶劑，臨床用藥時使用生理鹽水及葡萄糖注射液稀釋后布洛芬容易析出，且該布洛芬注射液體內代謝迅速，血漿藥物清除速度快，藥物半衰期短，需要大量給藥，為此研制新型布洛芬注射制劑十分必要。脂肪乳劑具有明顯的淋巴系統和單核－巨噬細胞系統（MPS）靶向性［7］，對炎癥治療具有被動靶向性。同時脂肪乳劑具有安全性好，生產工藝簡單，完全能夠工業化生產的特點，為此本研究制備了布洛芬脂肪乳劑（簡稱為IBU－LE），本文主要對自制IBU－LE中的藥物含量的高效液相測定方法進行研究。

1 儀器與材料

Agilent1100型高效液相色譜儀 （美國Agilent公司）；BS124S型電子分析天平（德國Sartorius公司）；布洛芬標準品（中國藥品生物制品檢定所，純度≥99.9%）；布洛芬原料藥（山東新華制藥有限公司）；IBU－LE （自制，2 mg/ml， 批號20130725、201130726、20130727）；甲醇，乙腈（德國默克公司，色譜純）；其他所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 空白溶液 精密量取1 ml自制10%空白脂肪乳劑置于10 ml量瓶中，異丙醇溶解并定容至刻度，得到乳劑空白溶液。

2.1.2 對照品溶液 精密稱取15 mg的布洛芬對照品，置于25 ml量瓶中，異丙醇溶解并定容至刻度，得 600 μg/ml的對照品儲備液。

2.1.3 供試品溶液 精密量取1 ml自制IBU－LE， 置于10 ml量瓶中，異丙醇溶解并定容至刻度，得IBU－LE供試品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱：Ultimate XB－C18柱（250mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－水（含 0.1%磷酸；70∶30，V/V）；流速：1.0 ml/mim；檢測波長：220 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μl。 分別取空白溶液，對照品溶液，供試品溶液適量進樣，考察乳劑中其他成分是否干擾布洛芬的含量測定。色譜圖見圖1，布洛芬的保留時間約為7.0 min，其他成分不干擾布洛芬的測定。

圖1 布洛芬高效液相色譜圖

2.3 標準曲線和線性范圍 精密量取對照品儲備液適量，用異丙醇稀釋成濃度為 35、70、140、280、560 μg/ml的布洛芬系列標準溶液，取20 μl標準溶液注入液相色譜儀進行分析，以標準溶液的峰面積（Y）對相應的標準溶液濃度（X）進行線性回歸， 其回歸方程為 Y＝44.675X－112.5，r＝0.9998，線性范圍為 35～560 μg/ml。

2.4 精密度 分別取低、中、高（35、140、560 μg/ml）3 個濃度的對照品溶液進行精密度考察，按上述色譜條件于1 d之內連續進樣5次，根據標準曲線計算其濃度，其日內RSD值分別為 1.75%，1.29%，0.75%。按上述色譜條件取上述 3 個濃度的供試品溶液連續5 d分別進樣，記錄峰面積，由標準曲線得布洛芬濃度，其日間 RSD值分別為 1.89%，1.31%，0.77%。表明該方法日內和日間精密度良好。

2.5 重復性考察 取同一批次的供試品溶液6份，20 μl進樣，測定供試品中布洛芬含量，計算其RSD值。RSD值為1.04%。表明測定方法的重復性良好。

2.6 穩定性考察 取同一批制備的供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24 h 進樣 20 μl，測定峰面積，計算布洛芬含量及RSD值。RSD值為1.42%。表明供試品在24 h內穩定。

2.7 加樣回收率 精密量取已知濃度的供試品溶液9份，分為3組，分別精密加入低、中、高3個濃度的對照品溶液，測定各組藥物含量。計算加樣回收率和RSD值。結果如表1所示，回收率均在95%～105%范圍內，RSD值均＜5%，符合要求。

2.8 布洛芬脂肪乳含量測定 取上述3個批號的自制IBULE按含量測定方法進行測定，含量測定結果如表2所示。

3 討 論

在載藥脂肪乳劑藥物含量測定中由于藥物包裹在油相中，如何破乳使藥物釋放出來是測定載藥脂肪乳劑藥物含量必須解決的問題。實驗發現使用常用的有機溶劑如甲醇、乙醇、乙腈等都不能很好地破乳，而在使用異丙醇、四氫呋喃等破乳效果良好，本實驗采用異丙醇破乳制備供試品溶液。

表1 IBU－LE供試品溶液加樣回收率

表2 IBU－LE含量測定結果

在布洛芬的高效液相測定條件的選擇上，由于布洛芬紫外吸收不強，本研究沒有選擇2010版中國藥典中布洛芬高效液相測定所選擇的波長258 nm，在參考相關文獻及美國藥典的實驗方法后選擇布洛芬紫外吸收相對較強的220 nm作為測定波長［8］。對于流動相的選擇本研究參考美國藥典并適當調整選擇含 0.1%磷酸的乙腈－水溶液（70∶30，V/V）作為流動相，所測得保留時間，分離度，拖尾因子等符合高效液相測定要求。

［1］ Antonio Ortega－álvaro，Esther Berrocoso，et al.Comparison of the antinociceptive effects of ibuprofen arginate and ibuprofen in rat models of inflammatory and neuropathic pain ［J］.Life Sciences，2012，90（1）：13－20.

［2］ Wenwen Chen，Xiaohui Hu，Yanzhun Hong，et al.Ibuprofen nanoparticles prepared by a PGSSTM－based method［J］.Powder Technology，2013，245（2）：241－250.

［3］王潤玲，劉印忠，高建華，等.布洛芬精氨酸鹽解熱鎮痛及抗炎作用的研究［J］.中國藥師，1999，2（1）：8－10.

［4］路長飛，田月潔，謝彥軍，等.布洛芬口服制劑致不良反應/事件監測數據分析［J］.藥學研究，2013，32（10）：618－620.

［5］彭東明，王福東，盧茂芳，等.HPLC測定精氨酸布洛芬注射液的含量及有關物質［J］.華西藥學雜志，2013，28（2）：195－196.

［6］吳暢烜，吳 軍，施存元.布洛芬注射液與臨床常用輸液配伍穩定性考察［J］.中國醫院藥學雜志，2013，33（14）：1201－1202.

［7］何 軍，張 兵，陳艷華.脂質乳劑釋藥機制及其靶向性的研究進展［J］.中國醫藥工業雜志，2008，39（1）：56－60.

［8］郝玲花，戚 燕，楊慶云，等.HPLC法和旋光光度法測定布洛芬注射液中精氨酸含量的方法比較［J］.沈陽藥科大學學報，2013，30（6）：442－443.