氣相色譜法對藥品中殘留溶劑的檢測分析

藍明玉雅培眼力健 （杭州）制藥有限公司，浙江杭州 310018

氣相色譜法對藥品中殘留溶劑的檢測分析

藍明玉
雅培眼力健 （杭州）制藥有限公司，浙江杭州 310018

目的 探討苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑采用頂空氣相色譜法測定的應用價值。 方法 采用頂空氣相色譜法對苯磺酸氨氯地平中的殘留溶劑N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇進行測定。 結果N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇在考察范圍內線性良好，線性范圍分別為124.76～396.55mg/L、500.36～1500.55mg/L、50.32～150.17mg/L和500.54～1500.88mg/L；r分 別 為0.9987、0.9996、0.9998、0.9999；平均回收率分別為101.5%、102.9%、103.3%和102.1%；RSD分別為5.8%、5.1%、5.9%、5.4%；檢測限分別為12.9mg/L、10.6mg/L、6.41mg/L和19.8mg/L。 結論 采用頂空氣相色譜法測定苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑含量具有準確度好、靈敏度高、操作簡單、重現性好等優點，是苯磺酸氨氯地平實際生產中殘留溶劑含量測定的有效方法。

頂空氣相色譜法；苯磺酸氨氯地平；殘留溶劑；含量測定

苯磺酸氨氯地平是臨床常用的高血壓及心絞痛治療藥物，屬第三代二氫吡啶類鈣離子通道阻斷劑，具有吸收好（吸收不受飲食影響），口服生物利用度高，清除半衰期長（一次給藥可維持有效血藥濃度24h），不良反應少等優點[1-2]。在苯磺酸氨氯地平合成過程中會使用到N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇等二類和三類溶劑，如果這些溶劑殘留超標將會對使用人員的身體造成一定的損害，因此，根據2010版《中華人民共和國藥典》[3]，本研究旨在建立頂空氣相色譜法測定苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑含量的方法，為苯磺酸氨氯地平實際生產中殘留溶劑含量測定的提供借鑒和指導。

1　儀器與試劑

美國安捷倫7890A型氣相色譜儀、安捷倫7694E型頂空進樣器、瑞士梅特勒-托利多ME104E型電子天平、苯磺酸氨氯地平（北京賽科藥業有限責任公司，批號20141015、20141018、20141021）、N-甲基吡咯烷酮（色譜純，上海晶純試劑有限公司），乙酸乙酯、N，N-二甲基乙酰胺、異丙醇、甲苯（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）。

2　方法與結果

2.1N，N-二甲基乙酰胺的含量測定

2.1.1色譜條件的選擇 選擇DB-624（30m× 0.25mm，1.4μm）毛細管色譜柱作為氣相色譜柱，以氮氣為載氣，設置載氣流速為1mL/min；采取程序升溫的方式，設置起始溫度130℃，保持8min，之后以50℃/min快速升溫至230℃，保持5min；進樣口溫度設置為210℃，分流比設定為1∶8；設置氫火焰離子化檢測器（FID）溫度為250℃；頂空進樣平衡溫度設置為120℃，平衡30min，頂空進樣環溫度設定為150℃，體積1mL，傳輸線溫度150℃。

2.1.2配制溶液 供試溶液的配制：精密稱量苯磺酸氨氯地平1.0g，加入到20mL頂空瓶中，之后，精確量取N-甲基吡咯烷酮2mL加入到頂空瓶中，待密封妥善后搖勻，作為供試溶液Ⅰ。

標準儲備液的配制：精密稱量N，N-二甲基乙酰胺0.6266g，加入到25mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，充分振搖得標準儲備液Ⅰ。精密量取5mL標準儲備液Ⅰ，加入到10mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，充分振搖得標準儲備液Ⅱ。

對照溶液的配制：精密量取1mL標準儲備液Ⅱ，加入到50mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，充分振搖得對照溶液Ⅰ[4]，對照溶液濃度為250.64mg/L。

2.1.3系統適用性試驗 取供試溶液Ⅰ和對照溶液Ⅰ，按照“2.1.1”中設定的色譜條件對供試溶液Ⅰ和對照溶液Ⅰ進樣分析，，記錄色譜圖，見圖1。結果顯示，N，N-二甲基乙酰胺峰形良好，分離度＞1.5，理論塔板數＞45000。

圖1　對照溶液I（A），空白溶液I（B）和供試溶液I（C）的氣相色譜圖

2.1.4線性考察 精密量取標準儲備液Ⅱ0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL，分別加入到50mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，充分振搖得5個梯度的標準溶液，S1～S5。分別取2mL的標準溶液加入到頂空瓶中[5]，按照“2.1.1”中描述的色譜條件對5個梯度的標準溶液進樣分析。選擇溶液質量濃度（ρ）為橫坐標，另選峰面積（A）為縱坐標，線性擬合得到A=3.146×10-2ρ+1.135（r=0.9987），即為N，N-二甲基乙酰胺的回歸方程，其線性范圍為124.76～396.55mg/L。

2.1.5精密度實驗 精密量取2mL對照溶液Ⅰ，共5個樣本，分別加入到頂空進樣瓶中，按照“2.1.1”中描述的色譜條件進樣分析，結果顯示，N，N-二甲基乙酰胺峰面積的RSD為5.1%，說明儀器精密度良好。

取20141015批苯磺酸氨氯地平，按照“2.1.2”中供試溶液的配制方法配制供試溶液Ⅰ，共配制6個樣本[6]，之后按照“2.1.1”中描述的色譜條件進樣分析，結果顯示，未檢出N，N-二甲基乙酰胺。

2.1.6加樣回收試驗 精密稱取1.0g未檢出N，N-二甲基乙酰胺的20141015批苯磺酸氨氯地平，共9個樣本，分別加入到20mL頂空瓶中，分別精密加入2.0mL“2.1.4”中標準溶液S2～S4，每個標準溶液3份，密封后充分振搖[7]。按照“2.1.1”中描述的色譜條件進樣分析，計算其平均回收率為101.5%，RSD為5.8%。

2.1.7檢測限與定量限 對于定量限與檢測限試驗可參考文獻[8]，采取逐步稀釋法進行試驗，最終得到N，N-二甲基乙酰胺的定量限為43.4mg/L，檢測限為12.9mg/L。

2.1.8樣品含量測定 按照“2.1.2”中操作條件及“2.1.1”描述的色譜條件分別對20141015、20141018、20141021共3批苯磺酸氨氯地平樣品進樣分析，結果顯示N，N-二甲基乙酰胺未檢出。

2.2乙酸乙酯、異丙醇、甲苯的含量測定

2.2.1色譜條件的選擇 氣相色譜柱選擇DBWAX毛細管柱（30m×0.32mm，0.25μm）；以氮氣為載氣，設置載氣流速為1mL/min；采取程序升溫的方式，設置起始溫度60℃，保持5min，之后以50℃/min的速度升溫至220℃，維持3min；設置進樣口溫度為210℃，分流比為6∶1；設置氫火焰離子化檢測器（FID）溫度為250℃；頂空進樣平衡溫度設置為90℃，平衡30min，頂空進樣環溫度設定為120℃，體積1mL，傳輸線溫度100℃。

2.2.2配制溶液 供試溶液的配制：精密稱量苯磺酸氨氯地平0.4g，加入到20mL頂空瓶中，精確加入2mL N，N-二甲基甲酰胺，密封后充分振搖溶解，作為供試溶液Ⅱ。

標準儲備液的配制：精密稱量乙酸乙酯5.0016g，甲苯0.50013g，異丙醇5.0025g，一起加入到25mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，充分振搖得標準儲備液Ⅲ。精密量取5mL標準儲備液Ⅲ，加入到10mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，充分振搖得標準儲備液Ⅳ。

對照溶液的配制：取標準儲備液Ⅳ1mL，精密量取，加入到50mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，充分振搖得對照溶液Ⅱ，最終得到的乙酸乙酯、異丙醇、甲苯3種對照溶液濃度依次為1000.26、1000.29、100.36mg/L。

2.2.3系統適用性試驗 取供試溶液Ⅱ和對照溶液Ⅱ，按照“2.2.1”中色譜條件對供試溶液Ⅱ和對照溶液Ⅱ進樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結果顯示，乙酸乙酯、異丙醇和甲苯峰形良好，分離度＞1.5，理論塔板數＞45000。

圖2　對照溶液Ⅱ（A），空白溶液Ⅱ（B）和供試溶液Ⅱ（C）的氣相色譜圖

2.2.4線性考察 精密量取標準儲備液Ⅳ0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL，分別加入到50mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，充分振搖得5個梯度的標準溶液，S6～S10。分別取2mL的標準溶液加入到頂空瓶中，按照“2.2.1”中色譜條件對5個梯度的標準溶液進樣分析。選擇溶液質量濃度（ρ）為橫坐標，另選峰面積（A）為縱坐標，線性擬合得到A=9.387×10-2ρ-1.602（r=0.9996），即為乙酸乙酯的回歸方程，其線性范圍為500.36～1500.55mg/L；異丙醇的回歸方程為A=4.925×10-2ρ-0.556（r=0.9999），線性范圍為500.54～1500.88mg/L；甲苯的回歸方程為A=0.112×10-2ρ-7.786（r=0.9998），線性范圍為50.32～150.17mg/L。

2.2.5精密度實驗 精密量取2mL對照溶液Ⅱ，共5個樣本，分別加入到頂空進樣瓶中，按照“2.2.1”中色譜條件對5個樣本進樣分析，分析結果顯示，乙酸乙酯、異丙醇、甲苯峰面積的RSD分別為3.3%、3.4%、3.5%，說明儀器精密度良好。

取20141018批苯磺酸氨氯地平，按照“2.2.2”中供試溶液的配制方法配制供試溶液Ⅱ，共配制6個樣本，之后按照“2.2.1”中色譜條件對供試溶液Ⅱ 6個樣本分別進行進樣分析，結果未檢出乙酸乙酯和異丙醇，檢出樣品中甲苯含量低于定量限。

2.2.6加樣回收試驗 精密稱取0.4g 20141018批苯磺酸氨氯地平，共9個樣本，分別加入到20mL頂空瓶中，分別精密加入2.0mL“2.2.4”中標準溶液S7～S9，每個標準溶液3份，密封后充分振搖。按照“2.2.1”中描述的色譜條件進樣分析，乙酸乙酯、甲苯、異丙醇的平均回收率分別為102.9%、103.3%和102.1%，RSD分別為5.1%、5.9%、5.4%。

2.2.7檢測限與定量限 采取逐步稀釋法進行定量限與檢測限試驗，得到乙酸乙酯、甲苯、異丙醇的定量限分別為3.48、1.88和5.97mg/L，檢測限分別為10.6、6.41和19.8mg/L。

2.2.8樣品含量測定 按照“2.2.2”中操作條件及“2.2.1”中色譜條件分別對20141015、20141018、20141021共3批苯磺酸氨氯地平樣品進樣分析，結果未檢出乙酸乙酯和異丙醇，檢出三批樣品中均含有甲苯，但甲苯含量均低于定量限。

3　討論

頂空氣相色譜法具有靈敏、準確度高、重現性好、簡單、自動化程度高等優點，在藥品實際生產中可用于殘留有機溶劑的質量控制。臨床常用的高血壓及心絞痛治療藥物苯磺酸氨氯地平合成過程中會使用到N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇等二類和三類溶劑，這些溶劑如果殘留超標將會對患者的身體造成一定的損害，影響患者的治療和健康，因此，可采用頂空氣相色譜法對苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑含量進行測定，保證藥品的質量安全。

3.1色譜條件的選擇

3.1.1色譜柱的選擇 苯磺酸氨氯地平中N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇均為極性溶劑，根據相似相溶原理，分別對DB-1、DB-624、DB-1701以及DB-WAX[8]進行考察，發現DB-624對N，N-二甲基乙酰胺的分離效果最好，DB-WAX對乙酸乙酯、甲苯、異丙醇的分離效果較好。

3.1.2 進樣方式的選擇 由于采用溶液直接進樣時氨氯地平的峰會對溶劑峰產生干擾，且會在色譜柱上出現死吸附，對色譜柱造成很大的傷害，因此，采取自動靜態頂空進樣，不僅可以避免藥物的影響，而且還能夠保護色譜柱，效果較好[9]。

3.1.3頂空平衡溫度的選擇 分別考察N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇的60～120℃下的色譜響應值[10]，最終選擇120℃和90℃。此外，由于DMF為高沸點組分，應適當提高取樣針與傳輸線的溫度，避免DMF在傳輸過程中冷凝，因此選擇150℃。

3.1.4頂空平衡時間的選擇 分別考察N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇4種溶劑在平衡時間10、20、30、40、60min時的色譜響應值，得到最佳平衡時間為30min。實驗結果表明:平衡時間＞30min時，各組分峰面積基本不再增加，這說明各組分在30min時已在氣液兩相間達到平衡，故選擇平衡時間為30min。

3.1.5稀釋劑的選擇 頂空氣相色譜法測定殘留溶劑的一個關鍵是選擇合適的稀釋劑，嘗試選擇二甲基亞砜，N，N-二甲基甲酰胺、水、正丁醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮做稀釋劑，但二甲基亞砜，水、正丁醇、乙二醇分離效果均不好，而采用N-甲基吡咯烷酮和N，N-二甲基甲酰胺作為稀釋劑具有溶解能力強、沸點高干干擾含量測定、毒性小等優點，而且還有助于提高頂空進樣的靈敏度[11-12]。

3.2實驗結果的討論

本研究中，N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇在考察范圍內線性良好，r為0.9987～0.9999；平均回收率為101.5%～103.3%，RSD分別為5.1%～5.9%，檢測限分別為12.9、10.6、6.41和19.8mg/L。

綜上所述，采用頂空氣相色譜法測定苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑含量具有準確度好、靈敏度高、操作簡單、重現性好等優點，是苯磺酸氨氯地平實際生產中殘留溶劑含量測定的有效方法。

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Detection and analysis of residual solvents in pharmaceuticals by gas chromatography

LAN Mingyu
Yapei Yanlijian (Hangzhou) Pharmaceutical Co.,LTD,Hangzhou 310018,China

Objective To explore application value of headspace gas chromatography in determination of amlodipine besylate residual solvents. Methods Amlodipine besylate residual solvents N, N-dimethylacetamide,ethyl acetate,toluene,isopropanol were determinated by headspace gas chromatography. Results N,N-dimethylacetamide,ethyl acetate,toluene and isopropanol were all in good linearity in the scope of the study and the linear ranges were 124.76-396.55mg/L,500.36-1500.55mg/L,50.32-150.17mg/L and 500.54-1500.88mg/L respectively;r were 0.9987,0.9996,0.9998 and 0.9999 respectively.Average recoveries were 101.5%,102.9%,103.3% and 102.1% respectively.RSD were 5.8%,5.1%,5.9% and 5.4 % respectively.The detection limits were 12.9mg/L,10.6mg/L, 6.41mg/L and 19.8mg/L respectively. Conclusion Headspace gas chromatography in determination of amlodipine besylate residual solvents has some advantages including good accuracy,high sensitivity,simple operation and good reproducibility etc.And it is an effective method of the determination of amlodipine besylate residual solvents in actual production.

Headspace gas chromatography;Amlodipine besylate;Residual solvent;Determination

R927

A

2095-0616（2015）11-38-04

（2015-03-23）