大棗多糖對慢性疲勞綜合癥大鼠的作用效果

邵長專，唐 剛

（上海海事大學體育部，上海 201306）

大棗多糖對慢性疲勞綜合癥大鼠的作用效果

邵長專，唐 剛

（上海海事大學體育部，上海 201306）

目的：揭示大棗多糖（jujube polysaccharide，JP）對慢性疲勞綜合癥（chronic fatigue syndrome，CFS）的預防作用。方法：采用水提醇沉法對JP進行制備，同時建立大鼠CFS模型，通過服用不同劑量的JP，對大鼠的行為學方面進行檢測，測定血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性，丙二醛（malonaldehyde，MDA）水平以及脾臟指數、胸腺指數、T淋巴細胞轉化情況。結果：J P能夠顯著提高脾臟指數，降低血清MDA含量，改善T淋巴細胞的轉化能力。結論：JP對于CFS的預防效果與其調節機體的免疫能力及改善抗氧化能力有關。

大棗多糖；慢性疲勞；免疫；抗氧化

慢性疲勞綜合癥（chronic fatigue syndrome，CFS）是一種伴隨多種癥狀的綜合性病癥[1]，多由于身體疲勞與心理疲勞的積累而致病。CFS患者往往伴隨免疫力低下[2]及抗氧化能力下降[3]的現象。CFS患者除了應當針對性地進行自身生活習慣的調整之外，還可以選擇中藥調養，目前已有研究人員證實中藥調養是治療CFS的重要手段[4]。大棗是常用于治療CFS的中藥材之一[5-6]。近年來，研究發現大棗多糖（jujube polysaccharide，JP）能夠刺激免疫功能，提高抗氧化活性[7]，提示JP可能是作為治療CFS的主要活性成分之一。為了證實這一點，本實驗通過水提醇沉法制備JP，同時建立大鼠CFS模型，通過給大鼠灌胃JP檢測其作用效果，以揭示JP與CFS的關系以及治療功效。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠，6～8 周，體質量180～220 g，購自上海醫科大學實驗動物飼養中心。

大棗購自山東臨沂農貿市場，粉碎后備用。

三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA） 北京化學試劑公司；二甲基亞砜、RPMI-1640培養基、刀豆素（s word bean，ConA）、Hank’s液、噻唑藍（3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT）、透析袋（MW10 000） 北京鼎國生物技術有限責任公司；超氧化 物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxid ase，GSH-Px）試劑盒、丙二醛（malonaldehyde，MDA）試劑盒 南京建成生物制劑公司；其他試劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

752B型分光光度計 上海第三分析儀器廠；旋轉蒸發器 上海亞榮生化儀器廠；Christ Alpha1-4冷凍干燥機 德國Christ公司；Tensor27紅外光譜儀 德國布魯克公司。

1.3 方法

1.3.1 JP的制備

JP的制備過程如圖1所示，每1 000 g大棗提取獲得29.82 g粗JP，提取率為2.98%。

圖1 JP的提取過程Fig.1 Flowchart of JP extraction

1.3.2 JP成分測定

多糖含量測定：采用蒽酮-硫酸法[8]；糖醛酸含量測定：采用硫酸-咔唑法[9]；蛋白質含量測定：采用雙縮脲法[10]。紅外光譜采集：稱取JP 3 mg，與適量干燥的溴化鉀（KBr）混勻，在瑪瑙研缽中研磨壓片，在紅外光譜儀上測定4 000～400 cm－1波數范圍內的紅外光譜。

1.3.3 CFS模型建立

將大鼠隨機分為5 組（每組10 只）：空白組，CFS對照組，JP低（100 mg/（kg?d））、中（200 mg/（kg?d））、高（400 mg/（kg?d））劑量組。參照文獻[11-12]采用電擊法、限制法和冷水游泳法誘導CFS對照組，JP低、中、高劑量組4 組大鼠形成CFS癥狀。4 周建模期，每周周日休息。操作細節如下：電擊法：在大鼠飼養籠下方中間放置用銅絲纏繞成排狀的電路板（20 cm×30 cm），每天兩次喂食的期間通電，大鼠要去覓食和飲水就必須踩踏通電銅絲后才能到達放置食物的另一端。限制法：將大鼠放置在一根自制的聚氯乙烯管（長20.0 cm，直徑5.0 cm）中，頭部一側封閉并留有呼吸用的小洞，尾部一側用膠帶封閉，每隔一天進行一次，每次2 h。冷水游泳法：將大鼠放置在21 ℃的水中游泳，每天1 次，每次30 min。4 周的建模期間，每天上午給JP各劑量組大鼠灌胃相應劑量的JP水溶液，空白組和CFS對照組灌胃等體積的生理鹽水。

1.3.4 血清抗氧化指標與免疫器官指數的測定

4 周造模期結束后，立刻對大鼠麻醉采血，少量血液制備血清，使用試劑盒測定血清SOD、GSH-Px活性和MDA含量。大鼠處死后，立刻取脾臟和胸腺組織，按照下式計算免疫器官指數。

1.3.5 脾臟T淋巴細胞轉化能力測定

將脾臟置于預冷的RPMI-1640培養基中，洗滌后剪碎，針拴研磨，經200 目篩網過濾，分離脾臟淋巴細胞，Hank’s液洗滌若干次，1 000 r/min離心10 min，取上清液，臺盼藍染色計數，活細胞需多于95%，調整細胞密度為2×106個/mL，置于96 孔培養板中，每孔加入細胞懸液1 mL，平行2 孔，一孔加入50 μL ConA，另一孔作為對照。置于培養箱（37 ℃，5% CO2）中培養72 h。培養終止前4 h，每孔吸出上清液0.7 mL，加入0.7 mL RPMI-1640完全培養基，同時加入5 mg/mL MTT溶液50 μL，振蕩混勻，培養箱中繼續培養4 h后取出，每孔加入1 mL酸性異丙醇，振蕩靜置，1 500 r/min離心5 min取上清液，測定光密度值OD570nm。

1.4 數據處理

2 結果與分析

2.1 JP的組成分析

經檢測，JP多糖含量為61.16%，糖醛酸含量為8.27%，蛋白質含量為12.49%。紅外光譜圖（圖2）顯示：JP為典型的多糖結構，在894.32、840.21 cm－1波數處的弱吸收峰表明其含有少量α-D-吡喃糖和β-D-吡喃糖。

圖2 JP的紅外光譜圖Fig.2 Infrared spectrum of JP

2.2 免疫器官指數測定結果

免疫器官指數在一定程度上反映機體免疫狀況。由表1可知，與空白組相比，CFS對照組大鼠脾臟指數與胸腺指數顯著下降，表明CFS模型對大鼠造成影響，使得大鼠免疫器官指數降低，進而影響機體免疫能力。補充JP后，只有JP中、高劑量組大鼠的脾臟指數較CFS對照組顯著增加，而對胸腺指數的影響無統計學意義。

表1 各組大鼠免疫器官指數對比 (x ±s, , n = 8)Table 1 Comparison of spleen index and thymus index in rats from different groups (x ±s, , n = 8)

2.3 脾臟T淋巴細胞轉化實驗結果

表2 大鼠T淋巴細胞轉化實驗結果 (x ±s, , n = 8)Table 2 Effect of JP on T lymohocyte transformation (x ±s, , n = 8)

由表2可知，與空白組相比，CFS對照組大鼠T淋巴細胞轉化實驗測定的OD570nm值顯著下降，表明CFS模型對大鼠的淋巴細胞活性造成影響。補充JP后，只有JP高劑量組大鼠的OD570nm值較CFS對照組顯著增加，且與空白組相比無顯著差異。

2.4 各組大鼠血清SOD、GSH-Px活性及MDA含量

表3 JP對大鼠血清抗氧化指標的影響 (x ±s, , n = 8)Table 3 Effects of JP on the antioxidant status of CFS rats (x ±s, , n = 8)

由表3可知，與空白組相比，CFS對照組大鼠血清SOD、GSH-Px活性變化不明顯，但MDA含量極顯著性升高（P＜0.01）；補充JP后，大鼠血清SOD、GSH-Px活性與CFS對照組和空白組相比，變化都無顯著差異，只有JP高劑量組大鼠的MDA含量比CFS對照組顯著降低。

3 結論與討論

在大棗多糖提取的過程中，雖然對游離蛋白質進行了去除，但用雙縮脲法依然檢測到其含有蛋白質，說明大棗多糖是一種蛋白多糖。紅外光譜檢測的結果顯示JP屬于典型的多糖結構，并含有少量α-D-吡喃糖和β-D-吡喃糖。

CFS是人體由于長期處于身體與精神雙重壓力下而導致身體出現多種癥狀的一種疾病。為了更好地研究篩選CFS的治療藥物及作用效果，一般采用如精神刺激、強迫運動、藥物以及限制活動等方式建立CFS動物模型[12-14]，造模時間不少于2 周[15]。本實驗采用電擊法、限制法和冷水游泳法3 種方式建立CFS模型，為期4 周。有研究報道CFS患者一般會伴隨免疫能力低下及機體抗氧化能力下降的現象，如自然殺傷細胞活性降低、T淋巴細胞轉化能力降低、脂質過氧化程度增加等[16-19]。本實驗通過測定大鼠脾臟指數、胸腺指數、T淋巴細胞轉化程度、血清抗氧化酶活性以及脂質過氧化產物含量等指標，結果顯示CFS對照組脾臟指數、胸腺指數和T淋巴細胞轉化程度顯著降低，血液脂質過氧化產物MDA含量顯著升高，說明CFS模型建立較為成功，酶活性、部分免疫學指標和氧化損傷指標符合CFS患者的一般特征。

許多植物多糖能夠提高機體免疫能力[20-22]，一些研究認為多糖提高免疫能力與其提供給免疫細胞能量有關[23]，而關于抗氧化方面的研究報道則認為多糖本身具有一定的抗氧化功能[24-26]。大棗是傳統中藥治療CFS的常用藥材，大棗多糖可能是其中的主要活性成分之一。本實驗結果表明一定劑量的大棗多糖對CFS模型大鼠的脾臟指數、胸腺指數、T淋巴細胞轉化程度、血液脂質過氧化產物含量等指標都有一定程度的改善作用，這可能與其免疫調節活性及抗氧化性有關，這也正是大棗治療CFS的機理之一。

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Preventive Effect of Jujube Polysaccharide on Chronic Fatigue Syndrome in Rats

SHAO Changzhuan, TANG Gang
(Department of Sport, Shanghai Maritime University, Shanghai 201306, China)

Objective: To reveal the preventive effect of jujube polysaccharides (JP) on chronic fatigue syndrome (CFS). Methods: JP were prepared from jujube fruits by water extraction and ethanol precipitation and their physicochemical properties were determined. A four-week old rat CFS model was established. The rats were orally administrated with JP and the b ehavior experiments were conducted after induction of CFS. The activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px), and the levels of malondialdehyde (MDA) in rat serum were eassayed. Spleen index, thymus index and T lymohocyte transformation were analyzed. Results: JP markedly decreased MDA levels in serum, and increased spleen index and T lymohocyte transformation. Conclusions: The preventive effects of JP on CFS are closely related to their immune-regulating function and antioxidant activity.

jujube polysaccharide; chronic fatigue; immune; antioxidant

G804.7

A

1002-6630（2015）01-0205-04

10.7506/spkx1002-6630-201501039

2014-07-01

教育部博士點基金聯合資助項目（20123121120004）；上海海事大學科研基金項目（20130474）

邵長專（1971—），男，副教授，碩士，研究方向為體育教育與健康。E-mail：scz1971@126.com