大鼠高位結(jié)腸透析方法的初步建立及療效探析

姚輝潔，黃銀蘭，李洋洋，呂楊，洪權(quán)，杜婧，3

1.寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，寧夏銀川 750004；2.中國人民解放軍總醫(yī)院腎臟病國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100853；3.中國人民解放軍總醫(yī)院老年腎臟病科,北京 100853

高位結(jié)腸透析是在傳統(tǒng)中藥灌腸的基礎(chǔ)上逐漸發(fā)展起來的一種治療方法，由于該方法操作簡單、費(fèi)用低、無明顯不良反應(yīng),已被臨床上用于急、慢性腎功能衰竭、重癥肝病、高尿酸血癥等疾病的治療[1-4]。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，該研究發(fā)現(xiàn)關(guān)于結(jié)腸透析的臨床觀察很多，但尚未見到通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究結(jié)腸透析的文章。我們嘗試建立大鼠高位結(jié)腸透析方法，期望能夠?yàn)楹笃趯?shí)驗(yàn)中高位結(jié)腸透析的方法改進(jìn)和機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年5—10月，健康雄性SD 大鼠15 只(300±25)g，隨機(jī)分為正常組、模型組和治療組（各5 只），動(dòng)物室保持12 h 晝夜循環(huán),室溫控制在19~29℃,濕度40%~70%,大鼠自由攝取水和食物，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，甘油誘導(dǎo)建立大鼠急性腎衰竭模型，以觀察大鼠高位結(jié)腸透析的治療效果。方法如下： 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物限水不限食24 h,模型組和治療組用50%甘油雙下肢肌肉注射（8 mL/kg）誘導(dǎo)急性腎衰竭模型，正常組注射同等劑量的生理鹽水。治療組于造模前2 d 開始給予大鼠高位結(jié)腸透析治療，1 次/d, 1 次1 h ，共5 次。

1.2 方法

1.2.1 配置透析液 實(shí)驗(yàn)用透析液為按比例配制而成的碳酸氫鹽透析液,排毒固腎湯由中國人民解放軍總醫(yī)院中藥房一批購進(jìn)大黃等中藥，按需制成中藥湯劑。

1.2.2 簡易手動(dòng)的結(jié)腸透析裝置 大鼠體型小，沒有合適的結(jié)腸透析機(jī)，我們選擇帶有刻度的一次性注射器制作簡易手動(dòng)的結(jié)腸透析裝置，定量灌注透析液。醫(yī)用管路采用一次性靜脈輸液針的軟管作為單腔管路（約15 cm），先將針頭剪掉并把軟管一端修整圓鈍，防止在操作過程中劃傷大鼠，再將針托和注射器連接，制成簡易手動(dòng)的結(jié)腸透析裝置。

1.2.3 大鼠高位結(jié)腸透析治療及取材 選擇長度約20 cm、 直徑5~6 cm、口徑2~3 cm 的瓶子，去掉瓶蓋作為透氣孔，在瓶子底部上2~3 cm 處將瓶子分成兩截，前半部分作為固定器的主筒，后半部分作為后蓋，后蓋上挖直徑3~4 cm 的孔，以充分暴露大鼠臀部，待大鼠鉆進(jìn)主筒后，將后蓋蓋上并固定，尾巴露出在固定器外，輕拉大鼠尾巴充分暴露臀部，①腸道清洗：將簡易結(jié)腸透析裝置的單腔管路由肛門緩慢插入到結(jié)腸中下段 （距離肛門約10 cm），邊插邊注入生理鹽水，重復(fù)注入直至大鼠無糞便排出。②結(jié)腸透析：一次性灌注碳酸氫鹽透析液5 mL，每隔一分鐘補(bǔ)充灌注一次，一次1 mL，重復(fù)操作1 h。③中藥保留灌腸：一次性灌注排毒固腎湯5 mL，保留30 min。高位結(jié)腸透析治療于造模前2 d 開始，造模后第3 天結(jié)束，1 次/d，共5 次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)戊巴比妥鈉40 mg/kg 腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，放于促凝管中，顛倒混勻。

1.3 觀察指標(biāo)

血液采集后室溫靜置40~120 min，3000 r/min 離心10 min。分離上層血清，送中國人民解放軍總醫(yī)院生化科，全自動(dòng)生化分析儀檢測血肌酐、尿素氮值。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

模型組大鼠反應(yīng)遲鈍,精神萎靡,雙下肢局部疼痛，行動(dòng)受限，1-4 h 可見肉眼血尿，進(jìn)食進(jìn)水量減少；治療組大鼠反應(yīng)和精神狀態(tài)較模型組有所改善，進(jìn)食進(jìn)水量亦有增加；正常對照組反應(yīng)靈敏，精神良好，進(jìn)食進(jìn)水正常，尿液顏色正常。模型組血肌酐、尿素氮較正常組明顯增加（P<0.05）； 和模型組相比，治療組大鼠的血肌酐水平有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），尿素氮水平也有所降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 急性腎衰竭大鼠的血肌酐、尿素氮改變（±s）

表1 急性腎衰竭大鼠的血肌酐、尿素氮改變（±s）

注：*與模型組比較，P<0.05；#與正常組比較，P<0.05。

正常組模型組治療組分組24.05±2.20（317.90±77.63）#（230.98±95.51）#*4.10±1.01（52.53±21.5）#（35.00±11.93）#肌酐（μmol/L） 尿素氮（mmol/L）

3 討論

該研究嘗試建立大鼠高位結(jié)腸透析方法，并觀察該方法在大鼠急性腎功能衰竭模型中的治療效果。在實(shí)驗(yàn)中，該研究采用從大鼠肛門反復(fù)灌注生理鹽水，刺激腸蠕動(dòng)，對腸道進(jìn)行較徹底的清洗，減少了結(jié)腸粘膜對有毒物質(zhì)的吸收和腎臟的負(fù)擔(dān)，同時(shí)可以增大結(jié)腸粘膜的可灌洗面積、 促進(jìn)毒素排出體外。另一方面，該研究采用一次性注射器和靜脈輸液針的軟管制作簡易手動(dòng)的結(jié)腸透析裝置，可以使透析液深入到大鼠的降結(jié)腸甚至橫結(jié)腸，從而增加了結(jié)腸黏膜的吸收面積，促進(jìn)毒物排出體外。此外，在研究中利用大鼠固定器對大鼠進(jìn)行固定，避免多次藥物麻醉對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生理功能、機(jī)體狀況造成較大影響，減少實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾因素。該研究結(jié)果表明，經(jīng)高位結(jié)腸透析治療后，治療組的血肌酐值（230.98±95.51）μmol/L 較模型組（317.90±77.63）μmol/L 明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；同時(shí)，治療組血尿素氮水平（35.00±11.93）mmol/L 較模型組（52.53±21.5）mmol/L 也有明顯降低趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），考慮可能與治療時(shí)間較短、樣本量較小有關(guān)。這說明該研究中建立的大鼠高位結(jié)腸透析方法對急性腎功能衰竭大鼠的腎功能改善有明顯效果。

近年來，結(jié)腸透析已經(jīng)被用于腎功能衰竭患者的治療中。結(jié)腸粘膜具有半透膜特性，具有選擇性吸收和分泌功能。利用這種半透膜特性，可以將結(jié)腸黏膜當(dāng)做透析膜，在透析液持續(xù)灌入結(jié)腸后,由于結(jié)腸黏膜毛細(xì)血管與透析液之間存在不同的溶質(zhì)濃度梯度和滲透壓梯度,通過彌散和滲透的作用,體內(nèi)的毒素和水分可以進(jìn)入到透析液中,同時(shí)透析液中對人體有用的物質(zhì)被吸收入血。相關(guān)研究表明，高位結(jié)腸透析可以改善急、慢性腎功能衰竭患者的臨床癥狀、延緩腎功能惡化，改善患者的生存質(zhì)量，且無明顯的副反應(yīng)，有廣闊的發(fā)展前景[5-6]。張少泉等[7]利用高位結(jié)腸透析聯(lián)合中藥灌腸治療慢性腎臟病（3~4 期），治療后患者的血肌酐、尿素氮、尿酸等都有所下降，患者的腎功能得到明顯改善。黃新艷等[8]亦證明通腑降濁方結(jié)腸透析聯(lián)合基礎(chǔ)治療慢性腎功能衰竭有較好的療效。該研究結(jié)果表明大鼠高位結(jié)腸透析治療急性腎功能衰竭可以有效改善大鼠的腎功能，這一研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)相吻合。

綜上，該研究初步建立了大鼠結(jié)腸透析治療方法，可以排除體內(nèi)積聚的毒素、延緩腎功能惡化。但是，大鼠結(jié)腸透析方法只是初步建立，樣本量較少，在后續(xù)的研究中還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)對高位結(jié)腸透析的作用機(jī)理進(jìn)一步深入研究探討，并觀察該方法的長期的療效。

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