加味芍藥甘草湯治療大鼠慢性萎縮性胃炎的實驗研究

李靜江

(北方學院附屬第三醫院內鏡室，河北張家口 075000)

作為臨床常見的慢性胃黏膜疾病，慢性萎縮性胃炎(CAG)具有病情復雜、病程長、反復發作的特點［1］。其主要病理改變，如:胃黏膜變薄、腺體萎縮等具有癌變傾向［2］。迄今為止，現代醫學對 CAG的治療效果尚不能令人滿意。芍藥甘草湯是中醫經典方劑，我院采用加味芍藥甘草湯方治療CAG取得了一定的效果，本研究在中醫傳統理論的指導下，為進一步闡明其藥效作用及其機制，觀察了加味芍藥甘草湯對慢性萎縮性胃炎模型大鼠的影響，現報道如下。

1 材料

1.1 藥物 白芍(批號:20130701)、甘草(批號:20130728)、香附(批號:20130912)，購自張垣中藥飲片有限公司，均由河北北方學院中醫學院趙恒成教授鑒定為正品;三九胃泰沖劑(批號:1307024N)，廣州三九集團生產;N-甲基-N＇-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)(批號:M1305)，日本東京株式會社;超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH-Px)、丙二醛(MDA)試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，其余試劑均為國產分析純，實驗用水為去離子水。

1.2 動物 健康清潔級SD大鼠，體質量180～200 g，雌雄兼用，由河北北方學院實驗動物中心提供，合格證號SCXK(京)2008-0006。

1.3 儀器 UV-2100紫外可見分光光度計，尤尼柯(上海)儀器有限公司;FSH-2組織勻漿機，金壇市天竟實驗儀器廠。

2 方法

2.1 三九胃泰陽性供試液的制備 取三九胃泰沖劑適量，溶于適量蒸餾水中，制備為每毫升含三九胃泰360 mg的陽性供試液。

2.2 加味芍藥甘草湯供試液的制備 按照處方比例(15∶31∶15)分別稱取芍藥、甘草、香附適量，混合后，粉碎為粗粉，加水適量，于50℃超聲輔助提取，每次30 min，提取2次，經濃縮后，制備為濃度分別為每毫升含藥材 274.5、549、1 098 mg的供試液。

2.3 MNNG 飲用液的配制［3］稱取MNNG適量，溶于去離子水，配制成濃度為12.5 g·L-1的貯備液，將容量瓶用錫紙包裹后，置于4℃冰箱避光保存，備用。整個配制過程均需避光操作。

2.4 慢性萎縮性胃炎模型的制備 造模方法參照文獻［4］。將MNNG貯備液于當日稀釋成濃度為180 mg·L-1的溶液，代替飲用水飼喂造模大鼠，共8周。均普通飼料飼養。

2.5 實驗分組及給藥方法 將大鼠隨機分為 6組，每組20只，分別是正常對照組、慢性萎縮性胃炎模型組、三九胃泰組、加味芍藥甘草湯高劑量組、中劑量組、低劑量組。于造模第9周開始，停止飲用MNNG溶液，各組大鼠開始灌胃給藥，每日1次，每次10 mL·kg-1體質量。加味芍藥甘草湯各組每天按加味芍藥甘草湯給高劑量組10.98 g· kg-1體質量、中劑量組5.49 g· kg-1體質量、低劑量組2.745 g· kg-1給藥，三九胃泰組按每天 3.6 g·kg-1體質量給藥，正常對照組和模型組大鼠均灌服生理鹽水，每日1次，每次10 mL·kg-1體質量，連續90 d。

2.6 觀察指標及檢測方法

2.6.1 一般狀態觀察 給藥91 d，觀察并比較各組大鼠被毛、活動情況、食量及形體。

2.6.2 胃黏膜損傷情況觀察 給藥91 d，每組取1只大鼠，參照文獻［5-7］，摘除鼠胃，制備病理切片，觀察胃黏膜萎縮情況。

2.6.3 胃黏膜血流量、SOD、GSH-PX 和 MDA 的測定 給藥91 d，每組取9只大鼠，參照文獻［8-9］，用中性紅清除法測胃黏膜血流量。其余大鼠禁食16 h，烏拉坦麻醉，常規解剖鼠胃，洗凈胃內容物，蒸餾水沖洗2次，濾紙吸干水分。小心刮取1/3全胃黏膜，稱重，加入適量蒸餾水勻漿，制成胃黏膜勻漿。GSH-Px、SOD和MDA的測定按南京建成生物研究所提供的試劑盒說明書步驟進行［10-11］。

2.7 統計學方法 使用SPSS17.0統計軟件進行試驗資料分析。觀測數據主要為計量資料，以(±s)表示，均通過正態性檢驗。多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較則為HSD-q檢驗。檢驗水準 α =0.05。

3 結果

3.1 一般狀態觀察 模型組大鼠被毛蓬松，形體瘦小，活動減少，行動遲緩，食量少。三九胃泰組及加味芍藥甘草湯低劑量組大鼠被毛比較潔凈，略微散亂、體重稍低。加味芍藥甘草湯高、中劑量組大鼠活動靈活，食量較大，體質量中等。

3.2 病理觀察結果 正常對照組，大鼠胃黏膜上皮細胞排列整齊，胃黏膜完整，腺體排列規則;模型組，胃黏膜萎縮，胃竇黏膜腺體排列序亂，腺細胞和腺體減少，且體積縮小，黏膜肌層增厚;三九胃泰組、加味芍藥甘草湯高、中劑量組，均可見胃黏膜厚度適中，腺體排列緊密、規則，腺體萎縮顯著好轉。病理學圖片見圖1。

3.3 各組大鼠胃黏膜血流量的測定結果 各組大鼠胃黏膜血流量的測定結果見表1。多組間整體分析(單因素方差分析)有顯著性統計學意義。兩兩比較并結合數據來看:與正常對照組比較，模型組大鼠胃黏膜血流量顯著減少(P＜0.01)。與模型組大鼠比較，三九胃泰組、加味芍藥甘草湯低、中、高劑量組大鼠胃黏膜血流量均顯著增加(P＜0.05，P ＜0.01)，其中，加味芍藥甘草湯中、高劑量組大鼠胃黏膜血流量與正常對照組大鼠差異無顯著性(P＞0.05)。與三九胃泰組比較，加味芍藥甘草湯中、高劑量組大鼠胃黏膜血流量均顯著增加(P＜0.05)。

表1 大鼠胃黏膜血流量比較(±s，n=9)

表1 大鼠胃黏膜血流量比較(±s，n=9)

注:與正常對照組比較△△P＜0.01;與模型照組比較▲P＜0.05，▲▲P ＜0.01;與三九胃泰組比較#P ＜0.05。

組別 劑量/mg·kg-1·d-1胃黏膜血流量/mL·kg-1·h -1正常對照組 —25.69 ±5.24模型組 — 10.36±1.43△△三九胃泰組 3 600 17.40 ±4.67▲加味芍藥甘草湯低劑量組 2 745 14.57 ±2.40▲加味芍藥甘草湯中劑量組 5 490 23.31 ±5.10▲▲#加味芍藥甘草湯高劑量組 10 980 25.12 ±4.61▲▲#

3.4 各組大鼠胃黏膜組織 GSH-PX、SOD活性及MDA含量測定結果 各組大鼠胃黏膜組織 GSHPx、SOD活性及MDA含量測定結果見表2。多組間單因素方差分析為差異顯著。再經兩兩組間比較知:與正常對照組比較，模型組大鼠胃黏膜組織SOD、GSH-Px活性降低，MDA含量水平升高，差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。與模型對照組比較，加味芍藥甘草湯低、中、高劑量組大鼠胃黏膜中SOD、GSH-Px活性顯著升高(P ＜0.05，P ＜0.01)，MDA含量顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)。與三九胃泰組比較，加味芍藥甘草湯中、高劑量組大鼠潰瘍組織中SOD、GSH-Px活性顯著升高(P＜0.05)，MDA含量顯著降低(P＜0.05)。

表2 各組大鼠胃黏膜組織 GSH-Px、SOD、MDA含量(±s，n=10)

表2 各組大鼠胃黏膜組織 GSH-Px、SOD、MDA含量(±s，n=10)

注:與正常對照組比較△P ＜0.05，△△P ＜0.01;與模型照組比較▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01;與三九胃泰組比較#P ＜0.05。

組別 劑量/mg·kg-1·d-1 GSP-Px/mg·g prot-1 SOD/U·mL-1 MDA/mmol·L -1正常對照組 —56.39 ±6.22 369.44 ±10.26 4.36 ±0.86模型組 — 32.15 ±4.27△ 253.18±8.13△△ 8.63 ±1.53△△三九胃泰組 3600 45.24±5.71▲ 336.65±1.34▲ 5.72±0.97▲加味芍藥甘草湯低劑量組 2745 46.33±5.26▲ 332.90±9.35▲ 2.54±0.25▲加味芍藥甘草湯中劑量組 5490 55.20±6.20▲▲ 372.51±10.62▲▲ 3.7±0.38▲▲加味芍藥甘草湯高劑量組 10980 55.78 ±7.25▲▲# 382.35 ±9.23▲▲# 3.88 ±0.25▲▲#

4 討論

慢性萎縮性胃炎屬于中醫“胃脘痛”、“胃痞”等范疇。本病大多病程較長，病機往往虛實夾雜。本實驗用加味芍藥甘草湯進行干預和治療，取得良好的效果。

從本實驗結果可知，加味芍藥甘草湯可通過逆轉胃黏膜萎縮，達到修復胃黏膜的目的。加味芍藥甘草湯由白芍、甘草、香附組成。《內經》曰:“肝苦急、急食甘以緩之。”芍藥酸苦微寒，瀉肝火、和脾血;甘草甘平，緩急補中;香附是血中氣藥，行氣止痛，三藥相合則能扶土抑木，故用治陰血不足、肝脾失調之胃痛具有較好療效。CAG的形成過程與脂質過氧化作用關系密切［12-13］。本實驗結果表明，加味芍藥甘草湯能顯著降低胃黏膜內MDA含量，提高SOD、GSH-Px活力，從而減弱脂質過氧化，起到保護胃黏膜及修復損傷胃黏膜的作用。CAG的發生與GMBF的減少有密切關系［5］，胃黏膜良好的血液循環，能夠保證胃黏膜獲得必要的營養和去除有害代謝產物，從而以利于胃黏膜保持其完整性。本實驗表明，加味芍藥甘草湯可顯著增加CAG大鼠GMBF，使其恢復到接近正常水平。

本實驗研究了加味芍藥甘草湯對慢性萎縮性胃炎模型大鼠的治療作用，證實其治療慢性萎縮性胃炎的機制與其抗脂質過氧化作用及改善胃黏膜血流量作用有關，為加味芍藥甘草湯在臨床上的應用提供了理論和實驗基礎。

［1］李 瓊，劉 晏，吳堅炯.慢性萎縮性胃炎的治療進展［J］.中醫學報，2013，28(1):114-116.

［2］舒 勁.制萎扶胃丸防治慢性萎縮性胃炎作用機制［J］.西部中醫藥，2014，27(7):131-134.

［3］唐梅文，王 偉，李桂賢，等.加味七方胃痛顆粒對慢性萎縮性胃炎大鼠胃蛋白酶含量及HSP 70蛋白表達的影響［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，22(1):69-72.

［4］張秋霞，郭淑杰.四逆陷胸湯合方治療慢性萎縮性胃炎的實驗研究-對實驗大鼠慢性萎縮性胃炎血清胃泌素、胃黏膜PGE2的影響［J］.北京中醫，2001，20(1):37-38.

［5］李曉斌，夏 天.張仲海中藥消萎靈對大鼠慢性萎縮性胃炎胃黏膜血流量和血漿胃動素的影響［J］.第四軍醫大學學報，2002，23(9):772-775.

［6］馬方勵，沈雪梅，時 軍.黨參多糖對實驗動物胃腸道功能的影響［J］.安徽醫藥，2014，18(9):1626-1630.

［7］劉曉雯.胃炎飲對膽汁反流性胃炎大鼠胃腸肽的影響［D］.石家莊:河北醫科大學，2008.

［8］彭貴祖.改良中性紅清除法應用于大鼠胃黏膜血流測定［J］.江西醫藥，2002，37(1):10-12.

［9］詹茂程，張建福，欽倫秀.中性紅清除法測定大鼠胃黏膜血流量實驗觀察［J］.徐州醫學院學報，1991，11(1):68-70.

［10］李萬義，段永強，朱立鳴，等.治萎防變膠囊對慢性萎縮性胃炎模型大鼠SOD、GSH-Px活 性及MDA、LPO含量的影響［J］.中國老年學雜志，2010，30(17):2463-2465.

［11］李園園.白藜蘆醇對SOD1-G93A小鼠腰髓和運動皮層LC3B的影響［D］.石家莊:河北醫科大學，2014.

［12］阮氏秋賢.基于粘膜保護機制探討胃痞消對CAG大鼠干預研究［D］.廣州:廣州中醫藥大學，2013.

［13］成映霞，段永強，朱立鳴，等.治萎防變膠囊對CAG模型大鼠血漿ET-1含量和胃組織氧自由基域的影響［J］.中國中醫基礎醫學雜志，2011，17(2):174-176.