痤瘡丙酸桿菌對米諾環素的敏感性研究

梅 嬛沈永年呂桂霞蔡 晴劉維達?

·論著·

痤瘡丙酸桿菌對米諾環素的敏感性研究

梅 嬛1沈永年1呂桂霞1蔡 晴2劉維達1?

目的: 明確痤瘡丙酸桿菌對米諾環素的敏感性。方法: 收集236例尋常性痤瘡患者并給予米諾環素口服。治療前采用需氧培養和厭氧培養的方法，對患者皮損進行病原菌分離。治療前后利用抗菌藥敏紙片對痤瘡丙酸桿菌進行藥物(米諾環素、四環素、羅紅霉素和替硝唑)耐藥性檢測。肉湯稀釋法測定米諾環素的最低抑菌濃度。結果: 病原菌分離結果示:前3位病原菌分別為痤瘡丙酸桿菌(32.45%)、金黃色葡萄球菌(19.95%)和表皮葡萄球菌(13.83%)；治療前痤瘡丙酸桿菌對米諾環素、四環素、羅紅霉素和替硝唑的耐藥率分別為0、20.93%、83.72%和98.8%，治療后為0、47.22%、86.11%和100%。米諾環素對痤瘡丙酸桿菌的MIC50和MIC90分別為0.125 μg/mL和0.25 μg/mL。結論: 痤瘡丙酸桿菌對米諾環素仍然敏感。

痤瘡丙酸桿菌； 米諾環素； 尋常性痤瘡； 體外藥物敏感試驗

尋常性痤瘡是一種常見的累及毛囊皮脂腺的慢性炎癥性疾病，1其發病機制較為復雜，目前研究表明主要與皮脂分泌過多、毛囊皮脂腺導管開口處角化過度、痤瘡丙酸桿菌的繁殖以及炎癥反應等因素有關。2研究表明，痤瘡丙酸桿菌(P.acnes)在痤瘡的多種致病機制中起核心作用。P.acnes可以誘導機體免疫反應和局部炎癥的發生，促進P.acnes和其他革蘭氏陽性細菌的繁殖，同時也參與了毛囊導管上皮的角化過度。3本研究擬分離236例面部尋常性痤瘡患者的致病菌，并針對檢出的致病菌進行體外藥敏分析，尤其是米諾環素(MNO)在治療前后對臨床分離的P.acnes的抑制作用，進而為臨床上治療尋常性痤瘡的抗生素選擇提供一定的參考依據。

1 實驗材料

1.1 病例來源 收集2012年1月至2013年1月中國醫學科學院皮膚病醫院、四川大學華西醫院、四川省人民醫院、第三軍醫大學西南醫院、重慶市第一人民醫院、上海長海醫院、山東省皮膚病醫院和廣西醫科大學第一附屬醫院的尋常性痤瘡患者共236例。

1.2 標準菌株 痤瘡丙酸桿菌ATCC6919，購自廣東省微生物菌種保藏中心。

1.3 試驗藥物 抗菌藥敏紙片米諾環素(minocycline，MNO)、四環素(tetracycline，TCY)、羅紅霉素(roxithromycin，ROX)和替硝唑(tinidazole，TIN)均購自北京天壇藥物生物技術開發公司。

2 實驗方法

2.1 病原菌的分離和鑒定 參考相關文獻，對分離細菌進行形態學和生理生化鑒定，具體操作流程，見圖1。4

2.2 藥物敏感試驗 采用瓊脂擴散法對檢出的P.acnes及其標準菌株進行藥物敏感試驗，結果判定參照2008年美國臨床實驗室標準化協會(Clinical and Labortatory Standards Institute，CLSI)文件規定的標準折點進行判定。

2.3 MNO體外抗菌活性檢測 采用肉湯稀釋法對MNO進行最低抑菌濃度(MIC，minimum inhibitory concentration)測定，其操作與判斷方法按照文獻要求進行。5將新鮮菌落在無菌生理鹽水中調至0.5個麥氏濁度，接種在按梯度稀釋的含藥(MNO)液體培養基中，設置MNO藥物濃度為4 μg/mL、2 μg/mL、1 μg/mL、0.5 μg/mL、0.25 μg/mL、0.125 μg/mL、0.06 μg/mL、0.03 μg/mL。并設置溶媒對照(1%DMSO)和空白對照。

圖1 病原菌的分離和鑒定操作流程

3 結果

3.1 病原菌分離鑒定結果 服用鹽酸MNO緩釋片前(V0期)檢測236例面部尋常性痤瘡患者樣本，其中服藥后(V1期)140例(96例失訪)。V0期檢出P. acnes 86株，V1期36株，見表1。檢出的病原菌見圖2。結果顯示，P.acnes V0期的檢出率大于V1期的檢出率，總檢出率為32.4%。在面部尋常性痤瘡患者中，檢出排在前3位的病原菌分別是P.acnes、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，占總體檢出病原菌的66.1%，除P.acnes外，病原細菌中革蘭氏陽性球菌感染率遠高于革蘭氏陰性桿菌檢出率(44.1%，8.2%)。

3.2 藥物敏感試驗結果 痤瘡丙酸桿菌對MNO最為敏感，無耐藥現象；對TCY次之，其中有87株為敏感，35株表現為耐藥；對TIN最為耐藥，122株中僅有1株敏感，其他均為耐藥；對ROX的耐藥率相對較高，122株中有103株耐藥。藥敏試驗結果詳見表2。由表2見，除MNO外其他3種藥物在受試后，P.acnes的耐藥性都有所提高，其中以TCY最為明顯，耐藥率由20.93%提高至47.22%。而MNO在受試前后均未有耐藥情況出現。

表1 痤瘡丙酸桿菌檢出率

圖2 面部尋常性痤瘡檢出病原菌種類及數量

表2 122株痤瘡丙酸桿菌對4種抗菌藥物耐藥率

3.3 MNO的體外抗菌活性檢測結果 根據藥物敏感試驗結果顯示，P.acnes對MNO的最低抑菌濃度檢測(MIC)范圍在0.06 μg/mL～4 μg/mL之間，見表3。根據表3可見 MIC50為0.125 μg/mL，MIC90為0.25 μg/mL。

表3 MNO對122株痤瘡丙酸桿菌的MIC值范圍

4 討論

針對痤瘡病原菌的抗菌藥物的使用已成為痤瘡治療的重要手段，6因此關于痤瘡患者進行表皮病原菌的分離和藥敏檢測具有重要的臨床參考價值。本次試驗對236例面部尋常性痤瘡患者進行了感染病原菌的檢測，其中P.acnes檢出占比最高為32.4%，可見P.acnes是尋常性痤瘡的主要病原菌；同時革蘭氏陽性球菌的分離檢出率遠高于革蘭氏陰性桿菌，其中葡萄球菌屬中的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌等仍然是僅次于P.acnes的病原菌，而大腸埃希菌是革蘭氏陰性桿菌中檢出率最高的細菌，這與以往文獻基本一致。7，8這些條件致病菌或共生細菌在表皮微生態環境被改變的條件下，會過量繁殖從而造成感染，導致疾病的發生。通過橫向比較發現，在所選的4種藥物當中，TIN和ROX的耐藥率較高，而四環素類藥物的抑菌效果相對較好，其中MNO敏感性最佳，達到100%；縱向對比顯示，經過鹽酸MNO緩釋片治療后，P.acnes的檢出率有所降低，說明MNO對尋常性痤瘡具有一定的抑菌殺菌作用；同時經藥敏試驗分析，盡管使用了鹽酸MNO緩釋片治療，但除MNO之外，用藥后相比用藥前檢出的P.acnes對TCY、ROX以及TIN的耐藥性都有所升高，反而MNO未因其為受試藥而有耐藥現象的發生，由此可見，MNO為一種相對安全的抗生素；在耐藥率升高方面，TCY的變化最為顯著，推測可能是由于TCY和MNO同屬于四環素類藥物，而ROX和TIN因不同類而未產生明顯升高。另外，結合本次試驗的體外抗菌活性檢測顯示MIC50和MIC90分別為0.125 μg/mL和0.25 μg/mL，與之前文獻報道的針對P.acnes的其他多種抗菌藥物比較有較好的體外抗菌活性。9

1張學軍.皮膚性病學.5版.北京:人民衛生出版社，2001.144.

2 Layton AM.Optinal management of acne to prevent scarring and psychological sequelae.Am J Clin Dematol，2001，2(3):135.

3 Jappe U.Pathological mechanisms of acne with special enphasis on Prolonib－acterlumacnes and related therapy.Acta Derm Venereol，2003，83(4):241.

4陳東科，孫長貴.實用臨床微生物學檢驗與圖譜.北京:人民衛生出版社，2011.514.

5葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程.3版.南京:東南大學出版社，2006.896.

6龐勤，涂穎，何黎.含青刺果油及馬齒莧提取物護膚品輔助治療尋常型痤瘡臨床觀察.臨床皮膚科雜志，2012，41(6):380.

7 Duckney P，Wong HK，Serrano J，et al.The role of the skin barrier in modulating the effects of common skin microbial species on the inflammation，differentiation and proliferation status of epidermal keratinocytes.BMC Research Notes，2013，6:474.

8 Christensen GJ，Brüggemann H.Bacterial skin commensals and their role as host guardians.Beneficial Microbes，2014，5(2): 201.

9徐修禮，劉家云，高天文，等.痤瘡丙酸桿菌對抗菌藥物的體外抗菌活性分析.解放軍醫學雜志，2010，35(7):881.

(收稿:2014－11－14 修回:2014－11－25)

Sensitivity of Propionibacterium acnes to minocycline

MEI Huan，SHEN Yong-nian，LV Gui-xia，et al.Institute of Dermatology，Chinese Academy of Medical Sciences，Nanjing，210042

Objective:To determine the sensitivity of Propionibacterium acnes(P.acnes)to minocycline (MNO).Methods:Two hundred and thirty－six patients with acne vulgaris were treated with MNO.Pathogens from the patients were isolated and identified through the method of aerobic and anaerobic cultivation before the treatment.The drug－resistance of P.acnes to minocycline(MNO)，tetracycline(TCY)，roxithromycin (ROX)and tinidazole(TIN)was tested by disk agar diffusion method before and after the treatment.The minimum inhibiting concentration(MIC)of MNO to P.acnes was detected by broth dilution method.Results: The main pathogens were P.acnes(32.45%)，Staphylococcus aureus(19.95%)and Staphylococcus epidermidis(13.83%).The drug－resistance of P.acnes to MNO，TCY，ROX and TIN before the treatment was 0，20.93%，83.72%and 98.8%and after the treatment was 0，47.22%，86.11%and 100%.The MIC50and MIC90of MNO to P.acnes were 0.125 μg/mL and 0.25 μg/mL.Conclusion:P.acnes still remain sensitivity to MNO.

Propionibacterium acnes；minocycline；acne vulgaris；drug sensitive test in vitro

1中國醫學科學院皮膚病醫院，南京，210042 2上海市皮膚病醫院，200050

?通信作者