反復(fù)凍融對兔肉氨基酸和脂肪酸的影響

夏楊毅，劉玉凌，李洪軍，尚永彪

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2.重慶市特色食品工程技術(shù)研究中心，重慶 400715）

反復(fù)凍融對兔肉氨基酸和脂肪酸的影響

夏楊毅1,2，劉玉凌1，李洪軍1,2，尚永彪1,2

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2.重慶市特色食品工程技術(shù)研究中心，重慶 400715）

以新鮮兔肉為原料，研究反復(fù)凍融對兔肉蛋白質(zhì)、氨基酸和脂肪酸含量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與新鮮兔肉相比，隨著反復(fù)凍融次數(shù)的增加，兔肉中蛋白質(zhì)含量顯著減少（P＜0.05），第4次凍融后，兔里脊、后腿蛋白質(zhì)含量較新鮮兔肉分別下降了5.91%、10.30%；呈味氨基酸總量沒有顯著變化（P＞0.05），但必需氨基酸和氨基酸總量顯著減少（P＜0.05），第4次凍融后的兔肉里脊部位賴氨酸含量比新鮮兔肉下降了16.42%；后腿部位的賴氨酸含量比新鮮兔肉下降了14.69%；脂肪酸總量、飽和脂肪酸含量、單不飽和脂肪酸含量和多不飽和脂肪酸含量均顯著減少（P＜0.05）。結(jié)果表明反復(fù)凍融破壞了兔肉的營養(yǎng)成分，嚴重影響了兔肉的食用品質(zhì)。

兔肉；反復(fù)凍融；蛋白質(zhì)；氨基酸；脂肪酸

兔肉營養(yǎng)豐富、肉質(zhì)細嫩、味道鮮美，具有“三高三低”，即“高蛋白、高賴氨酸、高消化率”和“低脂肪、低膽固醇、低熱量”的營養(yǎng)特點，既能滿足現(xiàn)代人的健康飲食需求，又是老年人、肥胖人群、高血壓及冠心病患者的理想動物性肉類食品[1-2]。

冷凍是畜禽肉常用的貯藏方法，也是低溫肉制品市場流通的主要形態(tài)，冷凍溫度[3]、冷凍速率[4]和凍藏時間[5]對冷凍肉的品質(zhì)影響較大。在實際生產(chǎn)流通過程中，由于冷鏈管理不完善，貯運轉(zhuǎn)移、售賣前再次修整包裝等環(huán)節(jié)的溫度波動可能產(chǎn)生冷凍肉反復(fù)凍融（冷凍-解凍），致使冰晶損傷肌肉細胞組織結(jié)構(gòu)，甚至導(dǎo)致肉中蛋白質(zhì)氧化變性、脂肪氧化、色澤變化等，嚴重影響產(chǎn)品質(zhì)量[6-7]。目前，反復(fù)凍融對肉類品質(zhì)的影響受到一些國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注，但主要集中在凍藏對豬肉[8]、牛肉[9]、羊肉[10]和雞肉[11]的感官品質(zhì)和微觀結(jié)構(gòu)變化[12]，對兔肉的研究主要集中在營養(yǎng)成分和加工方面[13]，對其在凍藏過程中營養(yǎng)物質(zhì)變化規(guī)律的研究還比較少。因此，本實驗選取優(yōu)質(zhì)兔肉，研究反復(fù)凍融對兔肉蛋白質(zhì)、氨基酸和脂肪酸等營養(yǎng)成分的影響，旨在為兔肉貯藏和速凍產(chǎn)品的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮的雄性獺兔，飼養(yǎng)周期3 個月，平均質(zhì)量約2 kg，購于西南大學(xué)兔場。

硫酸銅、硫酸（密度為1.84 g/L）、硼酸、甲基紅指示劑、溴甲酚綠指示劑、亞甲基藍指示劑、氫氧化鈉、95%乙醇、三氟醋酸、檸檬酸三鈉、硝酸鈉、氫氧化鉀、甲醇、三氟化硼、異辛烷（2,2,4-三甲基戊烷）、無水硫酸鈉、氯化鈉（均為分析純） 成都市科龍化工試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

JT1001N普通天平 上海精天電子儀器有限公司；DF8517超低溫冰箱 韓國Ilshin公司；DW-25W518冰箱青島海爾電器有限公司；FA2004分析天平 上海精密科學(xué)儀器有限公司；K-360凱氏定氮儀、R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀瑞士Büchi公司；LC-8A高效液相色譜儀 美國貝克曼庫爾特公司；DGG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海東麓儀器設(shè)備有限公司；7890A氣相色譜儀 美國安捷倫科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

按常規(guī)方法屠宰兔子，宰殺后45 min內(nèi)轉(zhuǎn)移到實驗室，取里脊、后腿部位的肌肉樣品，去掉結(jié)締組織，取一部分新鮮樣作為對照組，進行各指標(biāo)的測定，其余部分切成3 cm×3 cm×3 cm肉塊，放入托盤中，分別按以下方式完成一次凍融處理：1） 用保鮮膜覆蓋并做好標(biāo)記放入4 ℃的冰箱里預(yù)冷12 h后；放入－23 ℃低溫冰箱凍藏；2） 3 d后取出連同保鮮膜托盤一起放入4 ℃的冰箱里水浴解凍12 h后，完成一次凍融。然后按照上述方法完成反復(fù)凍融2、3、4 次，共完成5 次取樣測定分析，每組取樣設(shè)3 個平行。

1.3.2 指標(biāo)測定

蛋白質(zhì)含量測定：參照GB/T 5009.5—2010《食品中蛋白質(zhì)的測定》[14]的凱氏定氮法；氨基酸含量測定：參照任一平等[15]的方法，采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）柱后鄰苯二甲醛（ortho-phthalaldehyde，OPA）衍生法測定游離氨基酸含量；脂肪酸含量測定：參照GB/T 9695.2—2008《肉與肉制品脂肪酸測定》[16]，采用氣相色譜法。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 20軟件進行相關(guān)數(shù)據(jù)的方差分析和顯著性檢驗，每組實驗數(shù)據(jù)重復(fù)測定3 次，實驗數(shù)據(jù)以±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 反復(fù)凍融對兔肉蛋白質(zhì)含量的影響

表1 反復(fù)凍融對兔肉蛋白質(zhì)含量的影響Table1 Effect of freeze-thaw cycles on the protein content of rabbit meat

表2 反復(fù)凍融對兔肉氨基酸含量的影響Table2 Effect of freeze-thaw cycles on the amino acid content of rabbit meat

表3 反復(fù)凍融對兔肉脂肪酸含量的影響Table3 Effect of freeze-thaw cycles on fatty acid content of rabbit meat

由表1可知，新鮮兔肉里脊蛋白質(zhì)含量為23.67%、后腿部位蛋白質(zhì)含量為22.63%，明顯高于豬肉蛋白質(zhì)含量12.41%[17]，與張春園等[18]測定出兔肉蛋白質(zhì)含量為23.97%的研究結(jié)果基本一致，表明兔肉具有高蛋白特點。

由表1可以看出，隨著反復(fù)凍融次數(shù)增加，兔肉蛋白質(zhì)含量呈逐漸下降趨勢。其中，里脊部位兔肉蛋白質(zhì)含量在第2、3、4次反復(fù)凍融后呈顯著性下降（P＜0.05），與新鮮兔肉相比分別下降了3.38%、5.37%、5.91%；后腿部位兔肉蛋白質(zhì)含量在第2次、第3次和第4次反復(fù)凍融后呈顯著性下降（P＜0.05），與新鮮肉相比分別下降了2.47%、6.19%和10.30%。原因可能是反復(fù)凍融導(dǎo)致兔肉蛋白質(zhì)發(fā)生一定程度的降解[19]，特別是使肌動球蛋白分離，導(dǎo)致總蛋白溶解度降低，使蛋白含量減少[20]；另外，反復(fù)凍融可能改變了蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)分子間作用力增強，導(dǎo)致蛋白質(zhì)與水分子間作用力減弱，從而影響蛋白質(zhì)的功能特性，且凍融次數(shù)越多，蛋白質(zhì)表面疏水性增加越多，溶解性下降越明顯[21]。

2.2 反復(fù)凍融對兔肉氨基酸含量的影響

由表2可知，新鮮兔肉含量較高的氨基酸分別為谷氨酸、賴氨酸、亮氨酸、精氨酸和天冬氨酸等，其中里脊和后腿部位的賴氨酸含量分別為2.101%、1.974%，與朱洪強等[22]測定的野豬肉和家豬肉賴氨酸含量分別為0.92%和1.44%、以及劉海珍[23]測定的青海牦牛和藏羊肉賴氨酸含量分別為2.14%和1.81%相比，兔肉明顯具有高賴氨酸特點。

由表2可以看出，隨著反復(fù)凍融次數(shù)增加，兔肉呈味氨基酸總量減少不顯著（P＞0.05），但必需氨基酸總量和總氨基酸含量變化顯著（P＜0.05），兔肉里脊部位的必需氨基酸和總氨基酸含量在第4次凍融后分別比新鮮兔肉降低了11.38%、13.84%，其中賴氨酸含量較新鮮兔肉下降了16.42%；兔肉后腿部位分別比新鮮兔肉降低了10.12%、10.39%，其中賴氨酸含量較新鮮兔肉下降了14.69%。原因可能是兔肉在反復(fù)凍融過程中蛋白質(zhì)含量的下降必然導(dǎo)致氨基酸含量減少；另外，反復(fù)凍融過程中肉樣產(chǎn)生的冰晶對細胞和組織產(chǎn)生機械損傷導(dǎo)致解凍時汁液的流失[24]，也會造成氨基酸含量的下降。

2.3 反復(fù)凍融對兔肉脂肪酸含量的影響

由表3可知，新鮮兔肉里脊和后腿部位的脂肪酸總量分別為0.683%、0.689%，比牛肉（3.84%）、羊肉（4.73%）和豬肉（2.26%）的含量低[25]，這與Pla等[26]的研究結(jié)果（兔肉脂肪酸含量低于牛肉、羊肉、豬肉）一致。表明兔肉具有低脂肪的特點。另外，新鮮兔肉脂肪酸含量較高的是棕櫚酸、油酸、亞油酸，這與Ramíreza等[27]的研究結(jié)果一致。

由表3可以看出，在反復(fù)凍融條件下，兔肉的棕櫚酸、α-亞麻酸和花生四烯酸并未發(fā)生顯著性降低（P＞0.05），這與Karlsdottir等[28]對凍藏鱈魚棕櫚酸在凍藏過程中無顯著變化（P＜0.05）結(jié)果一致。隨著反復(fù)凍融次數(shù)的增加，兔肉脂肪酸總量、飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸含量均顯著減少（P＜0.05）。且在第4次凍融后，里脊部位這3個指標(biāo)分別比新鮮兔肉下降了72.77%、73.93%、74.33%；后腿部位分別比新鮮兔肉下降了61.10%、67.02%、44.51%。原因可能是反復(fù)凍融過程中冰晶的再次生長造成兔肉細胞結(jié)構(gòu)破壞，汁液流失、脂肪氧化致使脂肪酸含量的變化[19]。

3 結(jié) 論

兔肉里脊、后腿部位蛋白質(zhì)含量為23.67%、22.63%，賴氨酸含量分別為2.101%、1.974%，脂肪酸總含量分別為0.683%、0.689%，表明兔肉具有“高蛋白、高賴氨酸、低脂肪”的特點。

與新鮮兔肉相比，隨著反復(fù)凍融次數(shù)增加，兔肉蛋白質(zhì)含量呈顯著下降（P＜0.05）；呈味氨基酸總量沒有顯著變化（P＞0.05），但必需氨基酸總量和總氨基酸含量變化顯著（P＜0.05）；棕櫚酸、α-亞麻酸和花生四烯酸并未發(fā)生顯著性降低（P＞0.05），但脂肪酸總量、飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸含量均顯著減少（P＜0.05）。

在實際生產(chǎn)中，兔肉凍藏期間溫度的波動會造成冰晶的再次生長，導(dǎo)致細胞破裂，解凍汁液流失,也會造成蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸含量的下降，嚴重影響兔肉的營養(yǎng)價值。因此，應(yīng)當(dāng)避免或者盡量減少兔肉的反復(fù)凍融，同時應(yīng)完善運輸、貯藏過程中的冷鏈體系，控制溫度的波動，降低反復(fù)凍融對兔肉營養(yǎng)品質(zhì)的影響。

[1] 谷子林, 秦應(yīng)和, 任克良. 中國養(yǎng)兔學(xué)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2013: 558-560.

[2] ZOTTE A D, SZENDR? Z. The role of rabbit meat as functional food[J]. Meat Science, 2011, 88(3): 319-331.

[3] MORTENSEN M, ANDERSEN H J, ENGELSEN S B, et al. Effect of freezing temperature, thawing and cooking rate on water distribution in two pork qualities[J]. Meat Science, 2006, 72(1): 34-42.

[4] NGAPO T M, BABARE I H, REYNOLDS J, et al. Freezing and thawing rate effects on drip loss from samples of pork[J]. Meat Science, 1999, 53(3): 149-158.

[5] BERTRAM H C, ANDERSEN R H, ANDERSEN H J. Development in myofibrillar water distribution of two pork qualities during 10-month freezer storage[J]. Meat Science, 2007, 75(1): 128-133.

[6] XIA Xiufang, KONG Baohua, LIU Jing, et al. Infl uence of different thawing methods on physicochemical changes and protein oxidation of porcine longissimus muscle[J]. LWT-Food Science and Technology, 2012, 46(1): 280-286.

[7] BOONSUMREJ S, CHAIWANICHSIRI S, TANTRATIAN S, et al. Effects of freezing and thawing on the quality changes of tiger shrimp (Penaeus monodon) frozen by air-blast and cryogenic freezing[J]. Journal of Food Engineering, 2007, 80(1): 292-299.

[8] 夏秀芳, 孔保華, 郭園園, 等. 反復(fù)冷凍-解凍對豬肉品質(zhì)特性和微觀結(jié)構(gòu)的影響[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 42(3): 982-988.

[9] 阿依木古麗, 蔡勇, 陳士恩, 等. 反復(fù)冷凍-解凍對牛肉品質(zhì)及組織結(jié)構(gòu)的影響[J]. 食品科學(xué), 2011, 32(7): 109-112.

[10] MUELA E, SA?UDO C, CAMPO M M, et al. Effect of freezing method and frozen storage duration on lamb sensory quality[J]. Meat Science, 2012, 90(1): 209-215.

[11] 李玫, 李苗云, 趙改名, 等. 凍融循環(huán)下雞肉品質(zhì)變化的低場核磁共振研究[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(11): 58-61.

[12] ANESE M, MANZOCCO L, PANOZZO A, et al. Effect of radiofrequency assisted freezing on meat microstructure and quality[J]. Food Research International, 2012, 46(1): 50-54.

[13] 李洪軍, 賀稚非, 薛山, 等. 國內(nèi)外兔肉營養(yǎng)與加工研究的比較分析[J].中國養(yǎng)兔, 2013, 4(1): 30-34.

[14] GB/T 5009.5—2010 食品中蛋白質(zhì)的測定[S].

[15] 任一平, 黃百芬, 高宗裕, 等. 應(yīng)用HPLC柱后OPA衍生法測定黃酒年中的游離氨基酸[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 1992, 18(3): 67-71.

[16] GB/T 9695.2—2008 肉與肉制品脂肪酸測定[S].

[17] 劉魁武, 成芳, 林宏建, 等. 可見/近紅外光譜檢測冷鮮豬肉中的脂肪、蛋白質(zhì)和水分含量[J]. 光譜學(xué)與光譜分析, 2009, 29(1): 102-105.

[18] 張春園, 楊富民. 美系獺兔肉質(zhì)特性及營養(yǎng)成分分析[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2011, 46(5): 128-131.

[19] 孫金輝. 凍藏、反復(fù)凍融及解凍方式對兔肉品質(zhì)的影響[D]. 重慶:西南大學(xué), 2013: 6.

[20] CHAN J T Y, OMANA D A, BETTI M. Effect of ultimate pH and freezing on the biochemical properties of proteins in turkey breast meat[J]. Food Chemistry, 2011, 127(1): 109-117.

[21] 孔保華, 夏秀芳, 熊幼翎. 反復(fù)凍融對肌原纖維蛋白結(jié)構(gòu)和功能特性的影響[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(增刊1): 1-7.

[22] 朱洪強, 王全凱, 殷樹鵬. 野豬肉與家豬肉營養(yǎng)成分的比較分析[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2007, 16(3): 54-56.

[23] 劉海珍. 青海牦牛、藏羊的肉品之特性研究[D]. 蘭州: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005: 12.

[24] FARAG K W, LYNG J G, MORGAN D J, et al. Effect of low temperatures (-18 to +5 ℃) on the texture of beef lean[J]. Meat Science, 2009, 81(1): 249-254.

[25] ENSER M, HALLETT K, HEWITT B, et al. Fatty acid content and composition of English beef, lamb and pork at retail[J]. Meat Science, 1996, 42(4): 443-456.

[26] PLA M, HERNáNDEZ P, ARI?O B, et al. Prediction of fatty acid content in rabbit meat and discrimination between conventional and organic production systems by NIRS methodology[J]. Food Chemistry, 2007, 100(1): 165-170.

[27] RAMíREZA J A, DíAZA I, PLAB M, et al. Fatty acid composition of leg meat and perirenal fat of rabbits selected by growth rate[J]. Food Chemistry, 2005, 90(1): 251-256.

[28] KARLSDOTTIR M G, SVEINSDOTTIR K, KRISTINSSON H G, et al. Effects of temperature during frozen storage on lipid deterioration of saithe (Pollachius virens) and hoki (Macruronus novaezelandiae) muscles[J]. Food Chemistry, 2014, 156(1): 234-242.

Effect of Freeze-Thaw Cycles on Amino Acids and Fatty Acids in Rabbit Meat

XIA Yangyi1,2, LIU Yuling1, LI Hongjun1,2, SHANG Yongbiao1,2
(1. College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400715, China; 2. Chongqing Special Food Programme and Technology Research Center, Chongqing 400715, China)

The effect of freeze-thaw cycles on the contents of proteins, amino acids, fatty acids in rex rabbit meat was investigated during frozen storage. It was found that the increased number of freeze-thaw cycles could result in an obvious decrease in the content of proteins in rabbit meat (P ＜ 0.05). Compared with fresh rabbit meat, the protein contents in frozen loin and hind leg decreased by 5.91% and 10.30% after the forth freeze-thaw cycle. Although delicious amino acids did not significantly decrease (P ＞ 0.05), essential amino acids and total amino acids exhibited a significant decrease (P ＜ 0.05). The content of lysine in rabbit loin fell by 16.42% and fell by 14.69% in hind leg meat compared with fresh rabbit meat. The contents of total fatty acids, saturated fatty acids, monounsaturated fatty acids and polyunsaturated fatty acids decreased obviously (P ＜ 0.05). In a conclusion, the number of freeze-thaw cycles had a detrimental effect on the quality of rabbit meat.

rabbit meat; freeze-thaw cycles; protein; amino acid; fatty acid

TS251.54

A

1002-6630（2015）04-0237-04

10.7506/spkx1002-6630-201504047

2014-05-04

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項（201303082-7）；西南大學(xué)博士基金項目（SWU113103）

夏楊毅（1970—），男，副教授，博士，研究方向為食品加工過程質(zhì)量與安全控制。E-mail：xyy7009@aliyun.com