高效液相色譜法測定科安乳膏中6-姜辣素含量

高效液相色譜法測定科安乳膏中6-姜辣素含量

鄭峙云1，桂雙英1，龍子江1，周緒天2

(1.安徽中醫藥大學安徽省中藥制劑工程技術研究中心安徽省中醫藥科學院藥物制劑研究所，

安徽 合肥230012；2.安慶鎮痛消瘤研究所，安徽 安慶246001)

[摘要]目的采用高效液相色譜法建立科安乳膏中6-姜辣素含量的測定方法。方法色譜柱為C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水(70∶30)，檢測波長為280 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃，進樣量為20 μL。結果6-姜辣素濃度在1.02～20.4 μg/mL范圍內與峰面積的線性關系良好(r=0.999 9)；平均加樣回收率為98.83%，RSD為1.08%(n=6)。結論所建立的高效液相色譜法簡便、準確、可靠，可用于科安乳膏的含量測定。

[關鍵詞]高效液相色譜法；6-姜辣素；科安乳膏；含量測定

[中圖分類號]R284；R927.2[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.05.025

基金項目：安徽省科技攻關項目(09010302039)

作者簡介：鄭峙云(1970-)，女，實驗師

收稿日期：(2014-10-30；編輯：張倩)

科安乳膏是由生姜、雄黃與適宜的基質制成的復方乳膏，臨床用于腫瘤治療，效果顯著。現代藥理研究表明，科安乳膏具有明顯的抑制腫瘤作用[1-2]。生姜是科安乳膏主要藥物之一，具有解表散寒、溫中止嘔、化痰止咳、解魚蟹毒等功效。近年來，實驗研究發現生姜的提取物有很好的抑瘤效果[3]。姜辣素是生姜中主要活性成分，包括6-姜辣素、8-姜辣素、10-姜辣素、12-姜辣素等10余種成分，以6-姜辣素含量最高，其生物活性也最強。因此，6-姜辣素可作為生姜及含生姜制劑的質量評價指標。目前，6-姜辣素的含量測定方法多為紫外分光光度法和高效液相色譜法[4-5]，但前者專屬性和靈敏度不理想。為有效控制科安乳膏質量，本研究旨在建立該制劑中6-姜辣素的高效液相色譜測定方法。

1　儀器與試藥

1.1儀器日本島津LC-20A高效液相色譜儀(SPD-M20A紫外檢測器，LC-20AB泵，LC-solution色譜工作站)；HH-S恒溫水浴鍋：江蘇國勝實驗儀器廠；超聲清洗器AS3120：天津奧特賽恩斯儀器有限公司；色譜柱：phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.2試藥6-姜辣素對照品：成都恩曼斯特生物技術有限公司(批號 20100412)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，科安乳膏為自制品(批號分別為131205、131207、131209)。

通信作者：桂雙英，guishy0520@126.com

2　方法與結果

2.1試藥的制備

2.1.16-姜辣素對照品溶液的制備精密稱取6-姜辣素標準品10.2 mg，置10 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，定容至刻度。精密吸取1.0 mL置10 mL量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，即得對照品貯備液。

2.1.2供試品溶液的制備精密稱取本品乳膏約4.8 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，稱質量。加熱回流30 min，放冷，加甲醇補足質量，搖勻，過濾，取續濾液，即得。

2.1.3陰性對照溶液的制備精密稱取缺干姜乳膏4.8 g，按“2.1.2”項下制備方法，得陰性對照品溶液。

2.2色譜條件色譜柱:phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(70∶30)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.3系統適用性試驗分別精密吸取6-姜辣素對照品、科安乳膏樣品、陰性對照溶液各20 μL，進樣測定。結果表明，陰性樣品無干擾。見圖1。

2.4線性關系考察分別精密吸取對照品貯備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0 mL，置于10 mL容量瓶中，以甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。按“2.2”項下色譜條件各進樣20 μL，每樣進兩次，記錄色譜，取平均值，并以濃度(c)為橫坐標、峰面積積分值(A)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為A=11 691c-8 962.9(r=0.999 9)。結果表明，6-姜辣素檢測濃度在1.02～20.4 μg/mL范圍內與峰面積的線性關系良好。

2.5精密度試驗精密吸取6-姜辣素對照品溶液(8.16 μg/mL)，按“2.2”項下色譜條件連續進樣6次，結果峰面積RSD為0.92%(n=6)，表明該方法精密度良好。

圖16-姜辣素對照品(A)、科安乳膏樣品(B)和陰性對照品(C)的高效液相色譜圖

2.6重復性試驗取同一批科安乳膏，按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液6份，按“2.2”項下色譜條件進樣測定6次。結果，6-姜辣素含量的RSD為1.51%。表明本方法重復性較好。

2.7穩定性試驗取同一供試品溶液，依法每隔2 h測定1次，共考察12 h，結果，峰面積積分值的RSD為0.99%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.8加樣回收率試驗精密吸取已知含量的科安乳膏6份，每份約2.4 g，精密稱定，分別精密加入6-姜辣素對照品儲備液0.4 mL(102 μg/mL)，按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液，依法測定，計算回收率，結果平均回收率為98.83%，RSD為1.08%，表明該方法準確度好，結果見表1。

表1　加樣回收率實驗結果

2.9樣品含量測定取批號分別為131205、131207、131209的3批樣品，按上述方法制備樣品溶液，分別精密量取樣品溶液和對照品溶液各20 μL注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算含量。結果測得6-姜辣素含量分別為35.22、33.55、33.40 μg/mg，RSD分別為1.21%、0.98%和1.64%。

3　討論

參考文獻高效液相色譜法測定6-姜辣素含量的流動相優化時，分別[5-7]考察了甲醇-水體系、乙腈-水體系和乙腈-甲醇-水體系，結果乙腈-甲醇-水體系效果最優，甲醇-水和乙腈-水體系均次之。研究結果表明，甲醇-水比例為70∶30時能達到有效分離，考慮到甲醇-水體系成本低、操作簡單，故采用甲醇-水作為流動相。

3批科安乳膏中6-姜辣素含量測定結果在33.40～35.22 μg/mg，但因檢測的樣品有限，制劑中6-姜辣素含量限度還有待增加原料批次和成品批次而定。同時，雄黃也是本制劑的重要組成成分之一，課題組正在進一步制定制劑中雄黃的含量幅度，從而有效控制制劑質量。

參考文獻：

[1]魏成晨,龍子江,周緒天,等.科安乳膏對S180荷瘤小鼠抗腫瘤作用及機制研究[J].中藥材，2013，36(11)：1827-1829.

[2]趙奇紅,張穎,劉赟,等.科安乳膏抗癌作用機理的初步研究[J].中國科學技術大學學報,2009,39(4):351-356.

[3]王緒平,章建民,張文娟，等.生姜提取物抑瘤降脂作用研究[J].現代醫院,2011,11(1):11-12.

[4]郭曉斐,杜愛琴,杜愛玲.生姜中姜辣素含量的測定[J].山東化工,2007,36(4):34-36,40.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010：93.

[6]王維皓，王智民，高慧敏,等.干姜炮制品的質量研究[J].中國中藥雜志,2009,34(5):564-566.

[7]單婷婷，曹紅，邢俊波,等.高效液相色譜法測定參姜搽劑中6-姜辣素的含量[J].解放軍藥學學報，2011，27(6)：509-510.