食品中蘇丹紅應用新型分離技術與高效液相色譜聯合測定的新方法分析

◎孫 偉

（江蘇省食品藥品檢驗所,江蘇 南京 210000）

食品中蘇丹紅應用新型分離技術與高效液相色譜聯合測定的新方法分析

◎孫 偉

（江蘇省食品藥品檢驗所,江蘇 南京 210000）

本文通過試驗的方式,研究以濁點萃取法為前處理技術,聯合高效液相色譜技術,對食品樣本中蘇丹紅染料進行分離與測定的方法,收到了良好的效果。

蘇丹紅；分離技術；高效液相色譜技術

目前可用于液相色譜測定前樣品處理的技術主要有3種，分別為液液萃取法、固相萃取法及濁點萃取法。相較于前兩種處理方法，濁點萃取法反應過程中無需使用有毒性的揮發性溶劑。有關研究指出，濁點萃取技術最大的優勢即綠色環保，在生物大分子分離與純化領域中有著非常高的應用價值。

1 試驗方法

1.1 試驗儀器

研究中所涉及到的試驗儀器與設備包括：超聲波清洗機，恒溫水浴鍋，離心處理儀，0.22μ m單位有機濾膜，高效液相色譜儀，紫外分光光度計，色譜柱，容量瓶，0.1m g感量分析天平，注射器。

1.2 試驗試劑

研究中涉及到的試劑包括：蘇丹紅A標準溶液，純度為97%；蘇丹紅B標準溶液，純度為97%；色譜純乙腈；分析純正己烷；色譜純甲醇；分析純氯化鈉；分析純碳酸鈉；分析純磷酸鈉；分析純T rito n x-114。

1.3 試驗方法

分別取蘇丹紅A、蘇丹紅B標準系列溶液濃度分別為0.16、0.32、0.64、1.28μ g/m L、及2.56μ g/ m L的標準溶液，置入10.0m L劑量離心管中，一次性加入濃度為1%的T rito n x-114溶液3.0m L及濃度為10%的碳酸鈉溶液2.0m L，用二次水定容至10.0m L。離心管置入恒溫水浴鍋中進行水浴加熱，溫度為45℃，反應時間為20.00m in，取出后按照4000r/m in條件進行離心處理，反應時間為10.00m in。待溶液分離為完全透明兩相后（下層相為水相，上層相為表面活性劑富集相），用注射器吸出下層水相。上層表面活性富集相中加入一定量正己烷-水溶液（兩者按照7∶3比例配置），體積定容至0.5m L。溶液過0.22μ m有機濾膜處理，最后進入高效液相色譜儀中進行測定。

1.4 觀察指標

按照標準方法分別應用液液萃取法、固相萃取法進行食品樣本中蘇丹紅含量分析。對3種不同方法的回收率結果進行對比。同時，觀察在濁點萃取法下表面活性劑濃度對濁點萃取的影響，平衡時間對濁點萃取的影響，以及樣本中蘇丹紅染料測定結果。

2 實驗結果

2.1 三種不同處理方法回收率分析

液液萃取法、固相萃取法及濁點萃取法對樣品中蘇丹紅的回收率試驗結果如表1所示。

結合以上結果可知：應用濁點萃取法進行前處理后的回收率，與液液萃取法、固相萃取法的回收率對比基本相當，加之濁點萃取法兼具綠色環保、操作簡便的優勢，故具有確切的應用價值。

表1 三種不同處理方法回收率對比表

2.2 表面活性劑濃度對濁點萃取的影響分析

圖1 表面活性劑濃度對濁點萃取的影響結果示意圖

濁點萃取以T rito n x-114為主，其濁點溫度較低，在22℃左右。濁點萃取效果將直接受反應過程中所使用表面活性劑用量、濃度的影響。因此，在萃取反應中，為充分提取目標分析物體，必須對表面活性劑濃度進行優化。一方面，當濃度過小時，表面活性劑難以定量自體系中萃取所需要的分析物；另一方面，當濃度過大時，表面活性劑會在離心管內壁產生吸附反應，對數據分析產生影響。因此，為提高食品中對蘇丹紅的萃取率，必須在確保萃取徹底的前提下，盡可能減小相比。具體試驗結果見圖1。

結合圖1數據可知：當T rito n x-114濃度＜0.30%時，食品樣本中蘇丹紅提取效率呈顯著上升的趨勢，當T rito n x-114濃度在0.30%～0.35%時，蘇丹紅的提取速度開始減慢，而當T rito n x-114濃度＞0.35%時，蘇丹紅提取效率基本保持不變（或也可能伴隨T rito n x-114濃度的繼續上升而有一定的下降趨勢）。同時，考慮到蘇丹紅為疏水性化合物，可知用T rito n x-114對蘇丹紅燃料進行提取的原理是基于蘇丹紅染料與疏水性膠束在水溶液中的疏水作用差異。換言之，隨著T rito n x-114濃度的提高，水溶液中疏水性膠束的數量有所增加，同步會使T rito n x-114對蘇丹紅染料的提取能力提高。但當T rito n x-114提高至表面活性劑富集相最終體積時，預濃縮因子將有所下降，導致隨著T rito n x-114濃度的增加，分析信號反而變差。因此，結合實驗數據可知：在對食品樣本中蘇丹紅染料進行提取時，T rito n x-114濃度以0.30%為理想狀態。

2.3 平衡時間對濁點萃取的影響分析

本研究中分析在10.00～25.00m in這一時間范圍內，因平衡時間變化而對濁點萃取蘇丹紅A、B溶液萃取效率產生的影響。實驗結果見圖2。在樣品溶液靜置于溫度45℃水浴環境中，保持20.00m in后，基本能夠實現徹底的萃?。煌瑫r，在20.00m in后，繼續增加水浴反應的時間對萃取效率的影響并不顯著。故結合實驗數據可知：在對食品樣本中蘇丹紅染料進行提取時，平衡時間以20.00m in為理想狀態。

圖2 平衡時間對濁點萃取的影響結果示意圖

2.4 樣本中蘇丹紅染料測定結果分析

用高效液相色譜法對蘇丹紅染料標準溶液進行測定，結果顯示：兩種蘇丹紅染料標準溶液均可在10.00m in內取得滿意的分離效果，且反應過程中最高峰互不干涉，其中A標準溶液保留時間為5.35m in，B標準溶液保留時間為6.45m in。

在樣本溶液中加標濃度為0.32μ g/m L的蘇丹紅標準溶液，按照上述試驗方法中的濁點萃取前處理過程，表面活性劑富集相用正己烷-水溶液稀釋處理后，過0.22μ m有機濾膜并進樣，可得高效液相色譜-紫外檢測色譜圖（見圖3）。

如圖2所示，有2個峰分別與A、B兩個蘇丹紅標準溶液相對應，其他強度較高峰則出現在色譜圖開始部分，應為樣品中的其他物質所致，后續色譜圖基線相對清晰與平穩，故處理得到不受零散峰干擾的峰。經過濁點萃取程序處理后，高效液相色譜圖提示樣品中未檢出蘇丹紅A、B號染料峰，故表明該分析樣品中未含蘇丹紅染料，食品安全。

3 結語

本文以濁點萃取法為前處理技術，聯合高效液相色譜技術，對食品樣本中蘇丹紅染料進行分離與測定，基于對試驗結果的分析，得出以下結論：1）應用濁點萃取法進行前處理后的回收率與液液萃取法、固相萃取法下回收率對比基本相當，加之濁點萃取法兼具綠色環保、操作簡便的優勢，故具有確切的應用價值；2）在對食品樣本中蘇丹紅染料進行提取時，T rito n x-114濃度以0.30%為理想狀態；3）在對食品樣本中蘇丹紅染料進行提取時，平衡時間以20.00m in為理想狀態；4）高效液相色譜圖提示樣品中未檢出蘇丹紅A、B號染料峰，故表明該分析樣品中未含蘇丹紅染料，食品安全。

[1]陳靜，劉召金，安寶超，等.全自動在線固相萃取-二維高效液相色譜與質譜聯用測定辣椒油中蘇丹紅[J].分析化學，2013，41（9）：1418-1422.

[2]朱成晶，朱鴨梅，高宏，等.黑色糧谷類食品中蘇丹黑B和蘇丹紅B檢測方法研究[C].第六屆華東地區色譜質譜學術報告會論文集，2014：1-7.

A New Method for the Analysis of the Joint Determination of Tonyred Application of New Separation Technology with High Performance Liquid Chromatography in Food

Sun Wei
（Jiangsu Institute for Food and Drug Control, Jiangsu Nanjing 210000, China）

Through the experiment, this paper studied on pretreatment technology with cloud point extraction method, combined with high performance liquid chromatography method for separation and determination of tonyred dyes in food samples, received good results.

Tonyred; Separation technology; High performance liquid chromatography

TS207.3；O657.72

孫偉（1982-），男，漢族，江蘇南通人，助理工程師，主要研究方向：食品質量檢測。