白細胞介素22在HBV相關性肝病中的表達及意義*

趙孝榮吳繼周

白細胞介素22在HBV相關性肝病中的表達及意義*

趙孝榮①吳繼周①

目的：探討白細胞介素22在HBV相關性肝病中的表達及意義。方法：酶聯免疫法檢測30例慢性乙型肝炎無癥狀攜帶者（ASC）、40例慢性乙型肝炎活動期（CHB）患者、45例慢性乙型肝炎后肝硬化（LC）患者、30例原發性肝癌（HCC）患者、25例健康對照者外周血清中IL-22水平。分析IL-22與腫瘤標志物AFP的相關性。結果：CHB組、LC組、HCC組外周血IL-22水平均高于對照組（P=0.010、0.003、0.000）。外周血清IL-22水平與AFP之間無相關性。結論：IL-22可能在肝臟慢性纖維化、肝癌發生方面可能起一定作用。

白介素-22； 乙型肝炎； 肝疾病

長期的慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是肝纖維化、肝硬化、肝功能失代償及肝癌的高危因素。HBV相關性肝病發病機制復雜，機體的免疫調節紊亂導致病毒不能有效清除，引起慢性炎癥。白細胞介素22（Interleukin-22，IL-22）可由輔助性T細胞17（T help cell 17，Th17）及Th22細胞、自然殺傷細胞等產生。IL-22與IL-19、IL-20、IL-24、IL-26、IL-28及IL-29同屬IL-10細胞因子家族，是Th22、Th17等活化后的重要效應分子[1]。既往已有諸多研究表明[2]，IL-22可能在多種炎癥性疾病或自身免疫性疾病中具有雙重作用。本研究針對HBV相關性慢性乙型肝炎無癥狀攜帶者（asymptomatic carrier， ASC）、慢性乙型病毒性肝炎活動期（CHB）、乙肝肝硬化（LC）、原發性肝癌（HCC）患者血清IL-22的變化以及甲胎蛋白（AFP）的指標進行初步研究，探討IL-22與乙肝病毒感染相關性肝病的表達及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012-2014年在本院門診就診及住院的乙肝表面抗原（HBsAg）陽性患者145例，其中ASC 30例，CHB 40例，LC 45例，HCC 30例。診斷標準符合《慢性乙型肝炎防治指南》（2010年）、《WHO消化系統腫瘤病理學和遺傳學》（2010 年）、《原發性肝癌診療規范》（2011年）。同時排除合并有自身免疫性疾病或HBV以外的其他病毒感染，且無慢性病史。排除6個月內接受抗病毒及免疫調節治療的患者。另外隨機抽取25例健康體檢者作為本次試驗的健康對照組（health control，HC）。各組研究對象的一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。

表1 各組研究對象的一般資料

1.2 方法

1.2.1 標本采集和處理 采集研究對象空腹外周靜脈血5 mL，于室溫放置2 h后予離心，并分裝血清置于-80 ℃低溫冰箱凍存，待集中檢測。同步留取血清標本測定AFP。

1.2.2 應用酶聯免疫法（ELISA）檢測血清中IL-22水平 采用ELISA試劑盒（武漢華美生物技術有限公司）檢測血清中IL-22水平，嚴格按照說明書要求操作，使用美國Themo Electron Corporation的Multiskan MK3全自動酶標儀監測檢測OD值，經Curve Expert軟件分析測得樣本水平。使用全自動生化儀檢測AFP。

1.3 統計學處理 應用SPSS 16.0軟件進行統計學分析，計量資料如呈正態，以（±s）表示，多組均數比較用單因素方差分析（one-way ANOVA），進一步進行組間比較，采用LSD-t檢驗法；相關分析采用spearman檢驗，計量資料如呈偏態分布，以中位數M（P25，P75）表示，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

各組外周血清IL-22水平及與腫瘤標記物AFP的相關性分析：（1）與正常對照組相比，HBV相關的不同肝病患者之間，IL-22水平比較差異有統計學意義（F=4.740，P=0.001）。組間比較發現CHB組、LC組、HCC組外周血IL-22水平均高于對照組（P=0.010、0.003、0.000），ASC組IL-22水平與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。（2）通過對各組患者IL22水平與腫瘤標記物AFP的相關性分析發現：外周血清IL-22水平與AFP之間均無相關性（P＞0.05），見表2。

表2 各組外周血清IL-22水平及AFP的比較（±s）

表2 各組外周血清IL-22水平及AFP的比較（±s）

注：r表示相關系數

組別IL-22（pg/mL）AFP（ng/mL）r值P值ASC組（n=30） 97.2±19.5 2.15±1.110.2150.376 CHB組（n=40）123.8±17.7 4.08±2.880.1070.684 LC組（n=45）130.4±21.5 5.17±5.370.3260.153 HCC組（n=30）161.7±23.0 10 867.30±6088.870.1480.500對照組（n=25） 62.2±15.9---

3 討論

IL-22，一開始被命名為IL-10相關的T細胞來源的誘導因子（IL-10-related T cell derived inducible factor， IL-TIF）。IL-10R2與IL-22R1組成的異源二聚體受體復合物，IL-22與之結合，進一步激活下游信號傳導通路，從而完成信號系統的傳導[3]。當前，IL-22在肝臟各類疾病中的作用已在動物模型中得到廣泛研究，有多篇研究證明，IL-22在肝損傷中具有直接的保護及協助再生作用，并且IL-22受體在肝臟中高表達，提示肝細胞是IL-22的重要效應細胞[4-5]。多項實驗研究表明，IL-22在急性乙型病毒性肝炎（acute hepatitis B）和慢性乙型病毒性肝炎患者的肝內表達是增高的[6-7]。楊智等[8]發現肝硬化患者外周血清IL-22的表達水平升高，推測其原因是IL-22升高從而導致患者清除病毒的能力下降，從而使病情進入慢性遷延期。在體外試驗中，IL-22可以促進肝細胞分泌能夠啟動、促進肝細胞再生的細胞因子IL-6及TNF-α[9]。而IL-22的保護作用，考慮與抗氧化、抗炎以及誘導肝細抗凋亡有關，其機制可能包括上調表達紅素氧合酶1、氧化還原因子1以及顯著增強STAT3（轉錄活化蛋白）的激活[10]。本研究中ASC組IL-22水平與健康對照組比較，差異并無統計學意義（P＞0.05），原因可能為機體尚處于免疫耐受期，不發生免疫應答有關；HBV相關性肝病中，CHB患者、LC患者、HCC患者外周血IL-22表達水平依次增加，HCC患者最高，與健康對照組相比，差異具有統計學意義（P=0.001）。這表明在慢性HBV感染時IL-22參與了肝臟的免疫及病理過程，考慮到動物模型中IL-22中的護肝作用，本研究推測CHB患者體內血清IL-22含量升高可能具有一定的保護作用。由于IL-22能夠間接促進肝細胞的修復及再生，促進損傷肝細胞的存活，從而起到保護肝臟的作用， 但是IL-22的長期刺激有可能促進肝炎向前發展，LC患者體內血清IL-22含量升高則在肝臟慢性纖維化方面可能起一定作用。另有動物研究顯示，注射IL-22致使細胞周期蛋白D1的升高從而造成肝細胞再生能力的增強，對二乙基亞硝胺（DEN）誘導HCC的易感性增加，而IL-22基因敲除小鼠形成HCC的易感性明顯降低，那些在炎癥損傷過程中存活的肝細胞則有可能成為原發性肝癌的前體細胞[6，11-12]。本研究通過檢測外周血血清IL-22水平，發現HCC組外周血中IL-22水平確實高于正常對照組。同時也提示在肝癌患者體內IL-22參與了腫瘤免疫機制的調節。

有研究發現在人類肝臟癌細胞株中，IL-22能誘導急性期蛋白質的表達，參與體內炎性反應[13]。進一步在動物細胞體外培養研究中發現，IL-22能上調Bcl-2、Bcl-xL和細胞周期蛋白D等促進小鼠肝干細胞系BMOL的增殖并抑制其凋亡[14]。但有學者發現IL-22可調節腫瘤細胞周期，使其細胞周期停滯在G2/ M期，抑制腫瘤細胞增殖[15-18]。故IL-22在肝癌中的作用具體機制仍待進一步研究。因HCC組外周血中IL-22水平高于健康對照組，且IL-22對肝癌發生發展可能起一定作用，故本研究將HBV相關性肝病各組腫瘤標志物AFP與外周血IL-22水平進行相關性分析，得出IL-22與AFP無相關性的結果。但由于本研究中各組樣本量較少，仍需要搜集大量樣本進行深入研究。這些研究提示，IL-22參與HBV感染及病程進展的各個過程中發揮重要作用，LC、HCC患者IL-22含量升高可能在肝臟慢性纖維化、肝癌發生方面可能起一定作用，其機制尚需進一步研究。IL-22有可能成為治療HBV相關性疾病的一個新靶點。

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Expression and Significance of Interleukin-22 in HBV Related Liver Diseases/

ZHAO Xiao-rong，WU J izhou.//Medical Innovation of China，2015，12（12）：001-003

Objective：To explore the expression and significance of IL-22 in HBV related liver diseases. Method：Whole vein blood was obtained from healthy control（HC）（n=25）and experimental groups including the patients with asymptomatic carrier（ASC）（n=30），chronic hepatitis B（CHB）（n=40），liver cirrhosis（LC）（n=45），hepatocellular carcinoma（HCC）（n=30）.The level of serum IL-22 were analysed by ELISA.Statistical analysis of the relevance of IL-22 levels and AFP was performed.Result：IL-22 level in the CHB group，LC group， and the HCC group were higher than that in the healthy control （P=0.010，0.003，0.000）.IL-22 levels had no correlation with AFP. Conclusion：IL-22 may contributed to the occurrence and the development of liver fibrosis and hepatocellular carcinoma.

Interleukin-22； Hepatitis B； Liver diseases

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.12.001

2015-01-03） （本文編輯：蔡元元）

國家自然科學基金（30960170）；廣西教育廳重點課題基金項目（桂教201202ZD021）

①廣西醫科大學第一附屬醫院 廣西 南寧 530021

吳繼周

First-author’s address：The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，China