紫錐菊復(fù)方對(duì)豬呼吸繁殖障礙綜合征疫苗免疫效果的影響

馬少朋，李婷婷，姚維平，高桂生，史秋梅* ，張艷英，高光平(．河北省辛集市畜牧局，河北辛集 0560;．河北省灤南縣畜牧服務(wù)中心，河北灤南 06500;．河北省撫寧縣畜牧水產(chǎn)局，河北撫寧 06600;．河北科技師范學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北昌黎 066600)

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)紫錐菊多糖和黃芪多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠提高機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能，它能提高淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率、提高機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力［1－4］。根據(jù)2種多糖能增強(qiáng)小鼠和雞等動(dòng)物免疫功能的研究報(bào)道［5－8］，針對(duì)仔豬消化吸收能力差、抗病力低、易腹瀉等特點(diǎn)，筆者制備了2種中藥組成的方劑——紫錐菊復(fù)方，用不同劑量的紫錐菊復(fù)方飼喂仔豬后，檢測(cè)仔豬外周血淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率以及豬呼吸繁殖障礙綜合征疫苗的抗體水平，來(lái)探討紫錐菊復(fù)方對(duì)仔豬的免疫功能的影響，以期為其今后臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 中草藥與試驗(yàn)試劑 紫錐菊、黃芪等均購(gòu)自秦皇島市百草堂大藥房。上海快靈牌膠體金試紙條，用于豬繁殖呼吸障礙綜合征抗體效價(jià)測(cè)定。

1．2 試驗(yàn)動(dòng)物 80頭杜×長(zhǎng)×大三元雜交仔豬，由秦皇島市某種豬場(chǎng)提供。

1．3 復(fù)方中藥制劑的制備 清洗除去雜質(zhì)，篩選出不合格的或混入的非中藥成分，除去灰塵，濕潤(rùn)中藥原料。藥物浸泡3 h，水提3次(每次10倍量水，煎煮1 h)，經(jīng)過(guò)濾過(guò)－濃縮－噴霧干燥－分裝的流程制成顆粒狀制劑(1 g生藥提取中藥制劑 0．24 g)。

1．4 試驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 選取臨床檢查健康的15日齡左右杜長(zhǎng)大三元雜交仔豬80頭，按照性別和體重隨機(jī)分為4組(對(duì)照組、1．5%復(fù)方中藥制劑組、1．0%復(fù)方中藥制劑組和0．5%復(fù)方中藥制劑組)，每組20頭。

1．5 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)采用形態(tài)學(xué)檢查法，應(yīng)用非特異性有絲分裂原植物血凝素(PHA)作為刺激物，具體操作參照何昭陽(yáng)等［9］方法進(jìn)行。

1．6 豬繁殖呼吸障礙綜合征抗體水平的測(cè)定 健康仔豬在20日齡、50日齡免疫豬呼吸繁殖障礙綜合征疫苗，分別在20、30、40、50、60、70、80 日齡每組隨機(jī)選取10 頭仔豬，于前腔靜脈采集全血3 ml，3 000 r/min離心15 min，分離血清，－20℃冰箱中保存，使用膠體金試紙條按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1．7 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS 11．3GLM程序?qū)υ囼?yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2．1 對(duì)仔豬T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響 由表1可知，在20、30日齡，4組斷奶仔豬T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異均不顯著(P＞0．05);在40、50日齡，與對(duì)照組相比，0．5%復(fù)方中藥制劑組仔豬T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率分別提高20．48%和19．19%(P＜0．01)，1．0% 復(fù)方中藥制劑組分別提高 13．34% 和 20．19%(P ＜ 0．01)，1．5% 復(fù)方中藥制劑組分別提高 16．79% 和18．47%(P＜0．01);80日齡，與對(duì)照組相比1．5%復(fù)方中藥 制劑組仔豬T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率提高13．36%(P＜0．01)。

表1 紫錐菊復(fù)方對(duì)仔豬T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

2．2 豬繁殖呼吸障礙綜合征抗體效價(jià) 從表2可以看出，免疫合格豬所占比例在60日齡(二免)以后開(kāi)始升高，達(dá)到合格水平(1∶16)，因此新生仔豬20日齡免疫1次后，應(yīng)至少在45～50日齡加強(qiáng)免疫1次，二免后仔豬抗體水平均能達(dá)到合格以上，在免疫前后飼料中添加紫錐菊復(fù)方效果較好，以1%復(fù)方中藥制劑組能促進(jìn)其產(chǎn)生較好免疫力，70～90日齡以后，中和抗體效價(jià)與對(duì)照組比能提高2．0～2．1 log2。

該試驗(yàn)結(jié)果表明，豬繁殖呼吸障礙綜合征疫苗接種后，1．5%復(fù)方中藥制劑組添加紫錐菊復(fù)方混飲給藥，可以顯著提高疫苗免疫的中和抗體水平，與對(duì)照組差異顯著(P＜0．05)。試驗(yàn)組抗體產(chǎn)生快，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，說(shuō)明紫錐菊復(fù)方對(duì)豬繁殖呼吸障礙綜合征抗體產(chǎn)生具有明顯的促進(jìn)作用，可有效地提高豬的體液免疫作用。

表2 紫錐菊復(fù)方對(duì)豬繁殖呼吸障礙綜合征疫苗抗體效價(jià)的影響

3 討論

T淋巴細(xì)胞在細(xì)胞免疫中起主要作用，當(dāng)其受到PHA等刺激后，可轉(zhuǎn)化為體積較大的淋巴母細(xì)胞，可釋放多種細(xì)胞因子，參與細(xì)胞免疫反應(yīng)。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果表明，仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)各組與對(duì)照組差異均不顯著;40日齡，1．0%復(fù)方中藥制劑和1．5%復(fù)方中藥制劑組顯著和極顯著高于對(duì)照組，0．5%復(fù)方中藥制劑組與對(duì)照組差異不顯著;在50日齡，1．0%復(fù)方中藥制劑組和1．5%復(fù)方中藥制劑組顯著高于對(duì)照組，0．5%復(fù)方中藥制劑組與對(duì)照組差異不顯著。這表明一定劑量的紫錐菊復(fù)方能提高仔豬淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)仔豬的細(xì)胞免疫功能。對(duì)豬繁殖呼吸障礙綜合征疫苗接種后抗體水平檢測(cè)結(jié)果表明，在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)各組仔豬抗體水平差異不顯著，50和70日齡各試驗(yàn)組豬繁殖呼吸障礙綜合征抗體水平均極顯著高于對(duì)照組。在相同日齡條件下，各試驗(yàn)組抗體水平均隨紫錐菊復(fù)方應(yīng)用劑量的增加而呈上升趨勢(shì)。由此可見(jiàn)，應(yīng)用一定劑量的紫錐菊復(fù)方能夠提高豬繁殖呼吸障礙綜合征疫苗的抗體水平，表明紫錐菊復(fù)方對(duì)仔豬的體液免疫功能具有一定的促進(jìn)作用。江和基等［10］飼料中添加玉屏風(fēng)散提高仔豬免疫球蛋白含量和免疫細(xì)胞中CD4(T輔助細(xì)胞)和CD8(T抑制細(xì)胞)的比例，增加血清的補(bǔ)體、IL-2、γ-干擾素等成分，在一定程度上提高豬體內(nèi)非特異性免疫水平，增強(qiáng)豬體的抵抗力，有利于斷奶仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育。劉建成等［11］和馬玉芳等［12］也證實(shí)了在仔豬、生長(zhǎng)肥育豬的飼料中添加一定量的中藥添加劑，具有改善豬的生長(zhǎng)性能和提高機(jī)體免疫功能的作用。這表明在飼料中添加一定量的中草藥添加劑對(duì)豬的生產(chǎn)性能和免疫功能有改善作用。

筆者通過(guò)對(duì)仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、豬繁殖呼吸障礙綜合征抗體水平等免疫指標(biāo)的檢測(cè)，初步探討了紫錐菊復(fù)方對(duì)仔豬非特異性免疫功能、體液免疫功能的影響，為進(jìn)一步研究紫錐菊復(fù)方對(duì)豬免疫功能的影響奠定了基礎(chǔ)。

［1］付海寧，鐘英杰，郝衛(wèi)剛，等．紫錐菊提取物增強(qiáng)雞新城疫疫苗免疫效果的研究［J］．中國(guó)家禽，2014，36(24):13 －17．

［2］宋紅衛(wèi)，李秀菊，岳立．紫錐菊提取物對(duì)肉仔雞免疫功能的影響［J］．飼料博覽，2014(6):7－9．

［3］李宏全，段縣平．黃芪多糖對(duì)雞新城疫和傳染性腔上囊病疫苗免疫力的影響［J］．中國(guó)獸醫(yī)醫(yī)學(xué)雜志，2001，31(9):12 －14．

［4］張艷．黃芪多糖對(duì)燒傷小鼠細(xì)胞免疫功能的作用［J］．中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1995，11(2):136 －138．

［5］易先國(guó)，雷咸波，何書海，等．紫芪顆粒對(duì)小鼠免疫功能的影響［J］．中國(guó)獸醫(yī)雜志，2012，48(1):43 －45．

［6］代雪立，石達(dá)友，莫桂芬，等．紫錐菊復(fù)方對(duì)高溫條件下蛋雞生產(chǎn)性能及血液生化指標(biāo)的影響［J］．中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2011，38(9):15 －18．

［7］李樹鵬，郝艷霜，歐陽(yáng)五慶．黃芪多糖與紫錐菊提取物納米乳的制備及免疫佐劑效應(yīng)研究［J］．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2011，39(10):10 －16．

［8］任強(qiáng)，岑國(guó)棟，高永翔，等．地奧紫黃精片對(duì)小鼠免疫功能的影響［J］．中藥藥理與臨床，2009，25(2):109 －110．

［9］何昭陽(yáng)，胡桂學(xué)，王春鳳，等．動(dòng)物免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)［M］．長(zhǎng)春:吉林科學(xué)技術(shù)出版社，2002:156 －157．

［10］江和基，黃志堅(jiān)，謝紅兵，等．精制玉屏風(fēng)散對(duì)仔豬免疫功能和生長(zhǎng)性能的影響［J］．福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2006，35(6):640－643．

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［12］馬玉芳，劉建成，黃一帆，等．中藥飼料添加劑對(duì)仔豬生產(chǎn)性能和免疫功能的影響［J］．福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2003，32(4):496－499．