混其勒-7抗炎鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制初探

陳曉北 葉冬梅

（赤峰學(xué)院醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

混其勒-7抗炎鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制初探

陳曉北 葉冬梅

（赤峰學(xué)院醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

目的研究蒙藥混其勒-7對小鼠的抗炎鎮(zhèn)痛作用，初步探討其作用機(jī)制。方法采用耳廓炎癥腫脹實(shí)驗(yàn)測定其抗炎作用，熱板痛閾和醋酸扭體實(shí)驗(yàn)測定其鎮(zhèn)痛作用，ELISA法測定小鼠血清中腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的表達(dá)情況。結(jié)果中劑量混其勒-7可提高小鼠痛閾，減少扭體次數(shù)，并且改善二甲苯引發(fā)的炎癥表現(xiàn)，其抗炎作用可能與TNF-α有關(guān)，而鎮(zhèn)痛作用與TNF-α無關(guān)。結(jié)論混其勒-7具有抗炎鎮(zhèn)痛作用，其抗炎作用可能與TNF-α有關(guān)。

混其勒-7；抗炎鎮(zhèn)痛；TNF-α

蒙藥混其勒-7，又名行氣止痛丸，是由制馬錢子、木香、沉香、紅花、石膏、訶子和楓香脂組成的丸劑。收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊》（1998年版）[1]，具有開郁行氣，活血止痛功能，主治胸悶、氣短、胸脅刺痛、“巴木病”。目前研究資料顯示，馬錢子中的馬錢子生物堿具有抗炎鎮(zhèn)痛作用[2-3]，木香中的醇提物及倍半萜類有抗炎作用，其機(jī)制是因?yàn)樗鼈兗瓤梢种平遣娌四z、弗氏佐劑引起的大鼠足跖腫脹和炎性細(xì)胞的積累，又可抑制脂多糖誘導(dǎo)的白細(xì)胞介素-8、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）所致[4-5]。紅花中長鏈6,8-雙醇化合物及紅花黃色素均有抗炎活性，其機(jī)制可能與該藥可抑制炎癥過程及肉芽增生有關(guān)[6]。雖然關(guān)于楓香脂及訶子無抗炎鎮(zhèn)痛作用的報道，但它們常可以與其他蒙藥配伍用于風(fēng)濕、類風(fēng)濕性疾病的治療[7]。

TNF-α是單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的強(qiáng)有力的促炎性反應(yīng)的細(xì)胞因子，是機(jī)體炎性反應(yīng)與免疫應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子，還能刺激滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞合成并釋放前列腺素E2、膠原酶等多種炎性介質(zhì)，提高破骨細(xì)胞的活性和/或延長破骨細(xì)胞的存活期，導(dǎo)致關(guān)節(jié)局部滑膜炎癥和軟骨組織破壞，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎局灶性骨侵蝕的發(fā)病機(jī)制中起重要作用[8]。在本研究中，通過耳廓炎癥腫脹實(shí)驗(yàn)、熱板痛閾法和醋酸扭體實(shí)驗(yàn)及小鼠血清中TNF-α的表達(dá)情況，對混其勒-7的抗炎鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制進(jìn)行了初步探討。

1 對象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料。儀器：電子分析天平，熱板儀，酶標(biāo)儀。藥品及試劑：混其勒-7（由內(nèi)蒙古赤峰市紅山區(qū)中醫(yī)院提供，分別配成濃度為25、12.5、6.3 mg/L的溶液）；復(fù)方乙酰水楊酸片（赤峰維康生化制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H15020844，批號：130416，配成濃度為10 g/L的溶液）；冰醋酸、二甲苯（AR，汕頭西隴化工廠，批號：0901051）；小鼠TNF-αELISA試劑盒（Rapidbio，美國，購自上海研輝生物科技有限公司）。

1.2 研究對象：昆明種雄性小白鼠，體質(zhì)量18～22 g，由北京大學(xué)（醫(yī)學(xué)部）提供。

1.3 測定方法

1.3.1 熱板痛閾實(shí)驗(yàn)測定鎮(zhèn)痛作用：取小鼠若干，置于熱板上（55± 0.5） ℃，預(yù)選痛閾范圍為10～25 s內(nèi)的小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白對照組（生理鹽水）、乙酰水楊酸組（復(fù)方乙酰水楊酸溶液），低、中、高劑量組（濃度分別為6.3、12.5、25 mg/L的混其勒-7溶液），每組灌胃給藥劑量為200 mL/kg，給藥前禁食不禁水12 h，給藥1 h后測痛閾，以（給藥后痛閾值 - 給藥前痛閾值）/給藥前痛閾值，計算鎮(zhèn)痛百分率。

1.3.2 醋酸扭體實(shí)驗(yàn)測定鎮(zhèn)痛作用：取雄性小鼠50只，按2.1項(xiàng)分組給藥，給藥30 min后，每只小鼠腹腔注射0.7%冰醋酸溶液0.2 mL，觀察并記錄注射冰醋酸后5～15 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)。

1.3.3 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)測定抗炎作用：取雄性小鼠50只，按2.1項(xiàng)分組給藥，給藥30 min后，用微量進(jìn)樣器將20 μL二甲苯均勻涂布于小鼠右耳致炎，左耳不處理作對照。致炎20 min后將小鼠處死，沿耳廓對稱剪下兩耳，用8 mm耳腫打耳器在兩耳同一部位打孔，取下耳片，用電子天平稱重并計算腫脹度及腫脹抑制率。公式：腫脹度（mg）=右耳重量-左耳重量。抑腫率（%）=（A-B）/A×100%（式中A：空白對照組平均腫脹度，B：用藥組平均腫脹度）。

1.3.4 ELISA法測小鼠血清TNF-α濃度：將上述所有小鼠處死后立即經(jīng)腹主動脈采血，放置2 h以后，3000轉(zhuǎn)離心10 min，分離血清，-20 ℃凍存。最后按說明書的操作步驟測定小鼠血清TNF-α濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：數(shù)據(jù)資料采用（d）表示，各組間比較采用單因素方差分析。數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0軟件行統(tǒng)計學(xué)處理。

2 結(jié) 果

2.1 熱板痛閾法測定藥物鎮(zhèn)痛作用的結(jié)果：見表1。

表1 藥物對熱刺激小鼠痛閾值的影響（，d，n=10）

表1 藥物對熱刺激小鼠痛閾值的影響（，d，n=10）

注：*P＜0.05，與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義

組別 劑量 鎮(zhèn)痛率(%)空白對照組 200.00(mL/kg) 16.42±4.33乙酰水楊酸組 200.00(mg/kg) 21.94±6.34*低劑量組 12.50(mg/kg) 17.68±3.21中劑量組 25.00(mg/kg) 21.63±5.49*高劑量組 50.00(mg/kg) 19.86±4.67

如表1所示，在給藥1 h后測定各組小鼠痛閾，發(fā)現(xiàn)中劑量混其勒-7組和復(fù)方乙酰水楊酸組的鎮(zhèn)痛率較對照組增高，P＜0.05，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義，而其余各給藥組與對照組比較無顯著性差異，說明中劑量混其勒-7有抑制熱板刺激所致疼痛反應(yīng)的作用。因?yàn)橹袆┝炕炱淅?7組與復(fù)方乙酰水楊酸組的鎮(zhèn)痛率比較，P＞0.05，說明二者的作用強(qiáng)度相似。

2.2 醋酸扭體法測定藥物鎮(zhèn)痛作用的結(jié)果：見表2。

表2 藥物對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響（，d，n=10）

表2 藥物對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響（，d，n=10）

注：*P＜0.05，與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義；△P＜0.05，與乙酰水楊酸組比較有統(tǒng)計學(xué)意義

組別 劑量 扭體次數(shù)(次)空白對照組 200.00(mL/kg) 32.14±5.67乙酰水楊酸組 200.00(mg/kg) 7.94±3.34*低劑量組 12.50(mg/kg) 28.68±4.65中劑量組 25.00(mg/kg) 19.85±6.67*△高劑量組 50.00(mg/kg) 31.53±6.29

從表2中可知，中劑量混其勒-7組和復(fù)方乙酰水楊酸組的小鼠扭體次數(shù)較對照組明顯減少，P＜0.05，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義，但較復(fù)方乙酰水楊酸組扭體次數(shù)增多，并且P＜0.05，說明中劑量混其勒-7對醋酸所致的小鼠疼痛有抑制作用，但不如復(fù)方乙酰水楊酸的作用強(qiáng)。

2.3 二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見表3。

從表3中可見，中劑量混其勒-7組和復(fù)方乙酰水楊酸組的小鼠耳腫脹度較對照組明顯減輕，P＜0.05，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義，而兩組之間無顯著性差異，說明中劑量混其勒-7和復(fù)方乙酰水楊酸可以抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹的炎性反應(yīng)，并且強(qiáng)度相似。

2.4 TNF-α表達(dá)的結(jié)果：見表4。

表3 藥物對二甲苯所致小鼠耳腫的抑制作用（，d，n=10）

表3 藥物對二甲苯所致小鼠耳腫的抑制作用（，d，n=10）

注：*P＜0.05，與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義

組別 劑量 腫脹度(mg) 抑腫率(%)空白對照組 200.00(mL/kg) 24.82±5.68 -乙酰水楊酸組 200.00(mg/kg) 19.32±5.31* 23.40±3.87低劑量組 12.50(mg/kg) 22.54±4.36 9.19±2.64中劑量組 25.00(mg/kg) 17.22±4.18* 30.63±4.39高劑量組 50.00(mg/kg) 21.82±3.44 10.36±3.46

表4 各組小鼠血清TNF-α表達(dá)結(jié)果（ng/L，，d，n=10）

表4 各組小鼠血清TNF-α表達(dá)結(jié)果（ng/L，，d，n=10）

注：*P＜0.05，與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義

組別 熱板痛閾法 醋酸扭體法 二甲苯耳廓腫脹法空白對照組 112.51±2.78 112.11±2.45 111.03±2.18乙酰水楊酸組 120.37±2.04 115.56±2.66 99.87±3.12低劑量組 114.66±2.17 107.03±1.80 103.47±3.44中劑量組 115.84±2.52 118.47±2.42 96.42±1.99*高劑量組 114.34±2.34 113.34±2.20 100.11±2.60 F值 6.72 11.72 7.52

如表4所示，在二甲苯耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)中，中劑量混其勒-7組小鼠血清TNF-α值較對照組降低，P＜0.05，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義，而其余各組之間比較均無顯著性差異，說明混其勒-7的抗炎作用可能與TNF-α有關(guān)，而鎮(zhèn)痛作用與TNF-α無關(guān)。在其余兩個實(shí)驗(yàn)中，各組小鼠之間TNF-α表達(dá)無顯著性差異。

3 討 論

上述實(shí)驗(yàn)表明，混其勒-7可以提高小鼠對熱刺激和化學(xué)物質(zhì)引起的疼痛的耐受性，因此有一定的鎮(zhèn)痛作用，對二甲苯引起的滲出性炎癥有一定的改善作用。該藥的抗炎作用可能與其降低TNF-α表達(dá)有關(guān)，而鎮(zhèn)痛作用與TNF-α無關(guān)，但其抗炎鎮(zhèn)痛的具體機(jī)制尚有待于進(jìn)一步探討。由于混其勒-7是由多種藥物混合而成的，其質(zhì)量難于控制，故其毒性成了限制其在臨床應(yīng)用的最大障礙，如在本研究中就發(fā)現(xiàn)，混其勒-7的安全范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于理論值。因此，盡管混其勒-7有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，但是要想擴(kuò)大其臨床應(yīng)用還有待于進(jìn)一步深入研究。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(蒙藥分冊)[S].北京.中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員編印,1998:90.

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Hunqilu-7 Inflammatory and Analgesic Effect and Mechanism of Exploration

CHEN Xiao-bei, YE Dong-mei
(Chifeng University Medical College, Chifeng 024000, China)

ObjectiveTo study the Mongolian Hunqile-7 anti-inflammatory and analgesic effect in mice, a preliminary explore its action mechanism.MethodsUsing auricle inflammation swelling experiments show its anti-inflammatory action, hot plate pain threshold and acetic acid twisting experiment measure its analgesic action, ELISA method for determination of mice serum tumor necrosis factor alpha(tumor necrosis factor-α, TNF-α)expression.ResultsDose mixed in the Hunqile-7 can increase the pain threshold of mice, decrease the times of twisting the body and improve inflammation caused by xylene, its anti-inflammatory effects may be associated with the TNF-a, and analgesic action has nothing to do with the TNF-α.ConclusionMix the antiinflammatory and analgesic effects of Hunqile-7, its anti-inflammatory effects may be associated with the TNF-α.

Hunqile-7; Anti-inflammatory and analgesic; Tumor necrosis factor-α(TNF-α)

R971.1

B

1671-8194（2015）01-0022-02