復(fù)合型中藥免疫增強(qiáng)劑制備工藝研究

復(fù)合型中藥免疫增強(qiáng)劑制備工藝研究

丁振鐸桑詠梅呂文博李大亮

(黑龍江生態(tài)工程職業(yè)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150025)

摘要：對以復(fù)合植物多糖為主藥制備的混懸乳劑生產(chǎn)工藝及穩(wěn)定性進(jìn)行考察。采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)對處方中輔料及工藝進(jìn)行優(yōu)化，通過高壓勻質(zhì)方法將油相、水相混勻乳化，用濕熱滅菌方法考察制劑滅菌效果。最終確定最佳配方和工藝為注射用大豆油10%、乳化劑1.2%、勻質(zhì)7次、105℃45min濕熱滅菌。經(jīng)過驗(yàn)證，復(fù)合型中藥免疫增強(qiáng)劑工藝合理、制品質(zhì)量穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞：復(fù)合多糖；混懸型乳劑；免疫增強(qiáng)劑

doi:10.3969/j.issn.1674-6341.2015.05.012

中圖分類號：R943文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

收稿日期：2015-08-19

基金項(xiàng)目：黑龍江省教育廳2012年度科研項(xiàng)目“動物用復(fù)合型中藥免疫增強(qiáng)劑生產(chǎn)工藝與應(yīng)用研究”(項(xiàng)目編號：12535113)第一作者簡介：丁振鐸(1966—)，男，黑龍江拜泉人，碩士，教授。研究方向：中藥制藥。

隨著一些新疾病的出現(xiàn)，人們發(fā)現(xiàn)了在人類記憶史上未曾記載的菌毒類型。面對這些疾病，人們往往無及時應(yīng)對方案，危及人與動物的生命安全。人類對新藥物研制的進(jìn)度遠(yuǎn)不及新型菌毒種產(chǎn)生的速度，抗生素及化學(xué)藥品的耐藥性、毒副作用、藥物殘留等嚴(yán)重問題[1]已被全社會關(guān)注，臨床與藥物研究工作者再次把目光投向了傳統(tǒng)醫(yī)藥領(lǐng)域。中藥的免疫調(diào)節(jié)作用為某些疑難疾病破解和藥物的聯(lián)合使用開啟了閘門。中草藥中的多糖類、苷類、生物堿類、揮發(fā)油類等成分均具有一定的免疫增強(qiáng)作用[2]，以其資源廣泛、較好應(yīng)用效果、不易產(chǎn)生耐藥性、無殘留等而被越來越多地研究和應(yīng)用。在多年中藥多糖制劑的研制與應(yīng)用的基礎(chǔ)上，對復(fù)合型中藥免疫增強(qiáng)劑工藝開展進(jìn)一步研究。

1材料與方法

1.1儀器

SHP-60-60高壓均質(zhì)機(jī)(上海科學(xué)技術(shù)大學(xué)機(jī)電廠)，BA200光學(xué)顯微鏡(廈門市麥克奧迪有限公司)，GL-21M高速冷凍離心機(jī)(上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，F(xiàn)J-200高速分散均質(zhì)機(jī)(上海標(biāo)本模型廠)，旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)(上海魅宇儀器設(shè)備有限公司)，數(shù)顯酸度計(jì)(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司)，壓力滅菌柜(山東華康醫(yī)療器械股份有限公司)。

1.2材料

復(fù)合植物多糖(自制)，維生素E(西南合成制藥股份有限公司)，注射用大豆油(鐵嶺北亞藥用油有限公司)，蛋黃卵磷脂(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號20141014)，甘油(南昌白云藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號20150314)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

(1)處方組成篩選及因素考察。植物多糖類屬于高分子物質(zhì)，分子量大，水溶性較差[3]，不便于制成溶液型制劑；維生素E為油性物質(zhì)，其生產(chǎn)劑型多為油乳劑，因此本藥物劑型以設(shè)計(jì)成混懸型乳劑較為適宜。處方主藥劑量經(jīng)臨床使用已經(jīng)確定，故在文獻(xiàn)資料和預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，對輔料注射用大豆油、乳化劑等用量進(jìn)行考察。

(2)制備工藝。取復(fù)合多糖、甘油、蛋黃卵磷脂加入注射用水，作為水相，加熱至70℃；取維生素E加入注射用大豆油中,加熱至70℃，混勻，作為油相。將油相緩慢加入到水相中，補(bǔ)充注射用水至規(guī)定量，在70℃條件下，15 000r/min混勻分散約5min制成初乳。用高壓勻質(zhì)機(jī)，在一定壓力下反復(fù)勻質(zhì)，濾過，分裝，滅菌，即得。

(3)因素水平設(shè)計(jì)。根據(jù)工藝路線，按L9(34)正交表安排試驗(yàn)，以注射用大豆油質(zhì)量分?jǐn)?shù)、乳化劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)、均質(zhì)次數(shù)等為考察因素，以穩(wěn)定常數(shù)Ke為考察指標(biāo)，對三因素中三水平進(jìn)行考察，正交設(shè)計(jì)見表1。

表1正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素和水平表

水平因 素注射用大豆油質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)A乳化劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)B均質(zhì)次數(shù)C150.672101.2103151.613

1.4質(zhì)量考察

(1)沉降體積比試驗(yàn)[4]。取三批自制乳劑，按藥典法，用具塞量筒量取混懸乳劑50ml，密塞，用力振搖1min，記下乳劑混懸物高度H0，靜置3h，記下乳劑混懸物最終高度H。按下式計(jì)算：

沉降體積比=H/H0

(2)pH值。取三批自制乳劑，用精密pH計(jì)測定。

(3)粘度測定[4]。取三批自制乳劑，按非牛頓流體用旋轉(zhuǎn)式粘度計(jì)測定動力粘度，按η=K·(T/w)計(jì)算。

(4)粒度分布測定[5]。用光學(xué)顯微鏡對混懸乳劑的粒徑進(jìn)行測定，考察分散相球粒的形狀、粒徑大小和分布。

1.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

(1)滅菌試驗(yàn)[6]。將混懸乳劑分裝于100ml玻璃瓶中，至刻度，分別于100℃、45min，115℃、30min，120℃、15min三種條件下進(jìn)行濕熱滅菌，進(jìn)行微生物檢查及外觀分層、pH值、油圈等項(xiàng)目考察。

(2)保存期試驗(yàn)。在室溫條件下，將無菌混懸乳劑分別陳放10d、30d、100d、180d、360d，對樣品外觀色澤、pH值、粒徑等項(xiàng)目進(jìn)行考察。

2結(jié)果與分析

2.1正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)

根據(jù)L9(34)正交表安排試驗(yàn)，對表2中樣品測定結(jié)果的直觀分析和表3方差分析可知，3個因素對混懸乳劑質(zhì)量影響大小順序依次為乳化劑>注射用大豆油>均質(zhì)次數(shù)，最佳的實(shí)驗(yàn)條件為A2B3C1，但綜合比較物料成本，確定最優(yōu)處方為注射用大豆油10%、乳化劑1.2%、均質(zhì)次數(shù)7次。依據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)論進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果完全符合。

表2正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果表

試驗(yàn)號因 素評價指標(biāo)ABCDKe×1001111151.12122254.33133360.14212350.55223161.26231262.37313247.48321350.69332151.5k155.1749.6754.6754.60k258.0055.3752.1054.67k349.8357.9756.2353.73R8.178.304.130.94

表3方差分析表

方差來源離均差平方和自由度F值P值A(chǔ)103.17263.41<0.05B108.14266.47<0.05C26.13216.06>0.05Se1.632

F0.05(2.2)=19F0.01(2.2)=99

2.2沉降體積比試驗(yàn)與pH值測定結(jié)果

對三批自制混懸乳劑沉降體積比檢測結(jié)果全部為100%；pH值測定結(jié)果為6.5±1。

2.3粘度檢測結(jié)果

通過對混懸乳劑三個平行樣品測定，其測定結(jié)果平均值為19.7mPa·s，符合混懸乳劑粘度允許范圍。

2.4粒度分布測定結(jié)果

對三批自制混懸乳劑進(jìn)行測定，其平均粒徑為0.93μm，粒徑大小均勻，呈正態(tài)分布，符合藥典要求。

2.5滅菌試驗(yàn)結(jié)果

表4微生物及物理性狀評價

實(shí)驗(yàn)條件微生物檢查外觀分層pH值油圈1.100℃、45min--6.51-2.115℃、30min-+6.46+3.120℃、15min-+6.41+

注：“+”表示陽性，“-”表示陰性。

由表4可見，滅菌溫度過高會影響混懸乳劑的外觀性狀，100℃、45min是較佳滅菌選擇。

2.6保存期試驗(yàn)結(jié)果

表5保存期試驗(yàn)結(jié)果

保存時間外觀色澤pH值粒徑(μm)0d淡乳黃6.500.9310d淡乳黃6.470.9430d乳黃6.420.97100d乳黃6.350.96180d深乳黃6.221.02360d近棕乳黃6.161.19

從表5中可以看出，經(jīng)過不同時間陳放，混懸乳劑色澤隨時間延長逐漸加深，pH值略有下降，粒徑稍有增大，但物理性狀未見油水分層、破乳現(xiàn)象。

3結(jié)論與討論

經(jīng)過研制，得到最佳輔料配比處方為注射用油質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%、乳化劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.2%，確認(rèn)了工藝流程中的勻質(zhì)次數(shù)為7次，滅菌條件為100℃、45min等關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)；對成品微生物檢查和保存期亦有明確結(jié)論，因此該制劑的生產(chǎn)工藝可以確立，只需在大生產(chǎn)中進(jìn)一步驗(yàn)證。由于植物多糖性質(zhì)比較穩(wěn)定，未將其列入考察指標(biāo)，但多糖在混懸乳劑中的含量測定方法考察留待下一步完成。

從中藥材中提取植物多糖應(yīng)用于增強(qiáng)動物免疫功能，提高機(jī)體對外界刺激的應(yīng)激能力，已被越來越多的研究者和臨床應(yīng)用者重視。本方中以植物多糖為主藥，意在提高動物免疫力和作為疫苗的免疫佐劑使用。但植物多糖為高分子物質(zhì)，水溶性差，難于制成溶液型制劑，將其制成混懸乳劑是對該類成分劑型制備的一個良好選擇，在制劑中其自身又起到助懸劑和穩(wěn)定劑的作用。混懸乳劑解決了多糖在水溶液制劑中陳化問題，同時起到緩釋、長效的作用[7]。

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責(zé)任編輯：桑詠梅