一次沙門氏菌檢測能力驗證結(jié)果分析

仝偉建，楊曉楠，段 鵬，李羽翡,傅 雷

(甘肅省食品檢驗研究院，甘肅蘭州 730030)

一次沙門氏菌檢測能力驗證結(jié)果分析

仝偉建，楊曉楠，段 鵬，李羽翡,傅 雷

(甘肅省食品檢驗研究院，甘肅蘭州 730030)

摘要[目的]考察實驗室對沙門氏菌的檢測能力。[方法] 按照GB 4789.4-2010 對標號分別為1#、2#、3#、4#、5#的5組樣品進行檢測，并對陽性菌進行了分型。[結(jié)果]試驗得出，供試的 1#～5#樣品中1#菌為鼠傷寒沙門氏菌，2#為蒙得維的麗沙門氏菌，3#為阿貢納沙門氏菌，4#、5#樣品均為非沙門氏菌。[結(jié)論]通過此次能力驗證，甘肅省食品檢驗研究院微生物檢測實驗室的檢驗?zāi)芰Φ玫搅擞行炞C，實驗室管理水平和沙門氏菌檢測技術(shù)水平得到了有效提高。

關(guān)鍵詞沙門氏菌；能力驗證；盲樣考核

沙門氏菌(Salmonella)是一種常見的食源性致病菌。據(jù)統(tǒng)計，在世界各國的細菌性食物中毒種類中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。微生物檢測能力驗證是實驗室微生物檢測質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其結(jié)果直接關(guān)系到檢驗報告的準確性和可靠性。中國食品藥品檢定研究院所為了驗證全國承擔(dān)國家抽檢任務(wù)的微生物實驗室對沙門氏菌的檢測能力而進行了這次能力驗證。筆者按照國家標準GB 4789.4-2010 對標號分別為1#、2#、3#、4#、5#的5組樣品進行檢測，并對陽性菌進行了分型。通過此次能力驗證，甘肅省食品檢驗研究院微生物檢測實驗室的檢驗?zāi)芰Φ玫搅擞行炞C，實驗室管理水平和沙門氏菌檢測技術(shù)水平得到了有效的提高。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株來源。中國食品藥品檢定研究院食品化妝品檢定所發(fā)放的能力驗證菌株(凍干粉)。

1.1.2主要試劑。緩沖蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液、亞硫酸鉍(BS)瓊脂、HE瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽鹽(XLD)瓊脂、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、三糖鐵(TSI)瓊脂、沙門氏菌生化鑒定試劑盒、沙門氏菌診斷血清、沙門氏菌陽性菌株CMCC(B)50115等，購自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司，均經(jīng)過驗證并在有效期內(nèi)使用。

1.2方法

1.2.1檢測依據(jù)。依據(jù)中華人民共和國國家標準GB 4789.4-2010沙門氏菌檢驗，對標號分別為1#、2#、3#、4#、5#的5組樣品進行檢測，同時設(shè)陽性對照和空白對照。

1.2.2前增菌(按照盒內(nèi)付作業(yè)指導(dǎo)書進行)。在生物安全柜內(nèi)無菌操作打開西林瓶，加入1 ml的BPW，振蕩使凍干菌球融解，用吸液器將其加入到滅菌的試管中，然后再用BPW沖洗西林瓶3次，每次1 ml，將潤洗液轉(zhuǎn)移到試管中，最終試管中的BPW總體積為10 ml。同時接種沙門氏菌菌株做陽性對照。放入到36 ℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18 h。

1.2.3增菌。按照GB 4789.4-2010進行。

1.2.4分離培養(yǎng)。將增菌液分別劃線到BS平板、HE平板、XLD平板和沙門氏菌顯色平板上。

1.2.5生化試驗。從各平板上分別挑取5株可疑菌落，接種到TSI上，同時接種營養(yǎng)瓊脂平板，并做革蘭氏染色。

從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取菌落，分別接種到蛋白胨水、pH 7.2尿素瓊脂、氰化鉀。

按照GB 4789.4-2010中5.5規(guī)定的方法進行血清學(xué)鑒定。

2結(jié)果與分析

2.1分離培養(yǎng)由表1可看出，1#～5#樣品中除4#、5#在顯色培養(yǎng)基平板上不符合，其他都符合沙門氏菌的特征，繼續(xù)生化試驗[1]。

2.2生化試驗結(jié)果細菌在各培養(yǎng)基上的生長情況及革蘭氏染色結(jié)果見表2。由表2得出，5#樣品為非沙門氏菌，革蘭氏染色不能排除任何樣品[1]。

細菌各生化反應(yīng)結(jié)果見表3。由表3可以得出，1#、3#樣品為典型的沙門氏菌；2#樣品為沙門氏菌個別變體；4#樣品為非沙門氏菌，也進一步確定5#樣品為非沙門氏菌[1]。

血清學(xué)凝集結(jié)果見表4，對照GB 4789.4-2010附錄B得出：1#樣品菌為鼠傷寒沙門氏菌，2#樣品為蒙得維的麗沙門氏菌，3#樣品為阿貢納沙門氏菌。

3討論

微生物實驗室能力驗證是微生物檢驗質(zhì)量控制的一種手段，可以保證實驗室檢驗結(jié)果的準確性[2]。在接到樣品后應(yīng)根據(jù)自己的理論知識和工作經(jīng)驗盡快制定詳細的檢驗方案。規(guī)范操作，熟悉各培養(yǎng)基的特點和沙門氏菌的生長特性，嚴格按照標準要求進行，防止陽性對照污染其他樣品，及樣品間相互污染，從而影響檢驗結(jié)果的準確性。

表1　細菌在各平板上的生長情況

表2　細菌在各培養(yǎng)基上的生長情況

表3　細菌各生化反應(yīng)結(jié)果

注：“+”為有反應(yīng)，“-”為無反應(yīng)。

表4　血清學(xué)凝集結(jié)果

沙門氏菌為鞭毛菌，所以要求分離用的平板都要吹干表面的水分，防止沙門氏菌在較為松軟的培養(yǎng)基上通過鞭毛進行運動，導(dǎo)致很難分離到單個菌落。顯色培養(yǎng)基對于細菌的鑒定更加直觀，可以提高工作效率，縮短檢驗時間，再結(jié)合生化試驗，可以很快地得出結(jié)果[3]。此次能力驗證不僅要求確定陽性菌株編號，還要求具體分型到某種菌。菌種經(jīng)培養(yǎng)或傳代后，鞭毛2抗原易丟失或被抑制，會導(dǎo)致血清凝集呈假陰性，需反復(fù)位相變異誘導(dǎo)，才能得到準確結(jié)果，否則就會得出錯誤的結(jié)論。1#、2#、3#樣品在做血清學(xué)凝集試驗時，由于H抗原第1相的強陽性，導(dǎo)致H抗原第2相不凝集，試驗對H抗原第2相進行了位相變異誘導(dǎo)，才出現(xiàn)凝集現(xiàn)象[4]。

加強微生物實驗室檢驗質(zhì)量控制，可以有效地提高檢測結(jié)果的正確性和可靠性[5]，縮小各個實驗室的檢測水平的差距，提高檢驗人員的業(yè)務(wù)水平。

參考文獻

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部.食品安全國家標準：沙門氏菌檢驗：GB4789.4-2010[S]．北京：中國標準出版社，2010.

[2] 宋金卿.盲樣菌株微生物室間質(zhì)控方法探討[J].疾病監(jiān)測與控制雜志，2010,4(9)：542.

[3] 馬永，張溫玲，林真，等．兩種沙門氏菌顯色培養(yǎng)基在水產(chǎn)品檢驗中應(yīng)用比對研究[J].廣東化工，2013，40(5)：50.

[4] 朱超，許學(xué)斌．沙門菌屬血清型診斷[M].上海：同濟大學(xué)出版社, 2009:28-49.

[5] 施永鳳，鄧志新．食源性致病菌監(jiān)測質(zhì)量盲樣考核結(jié)果分析[J].檢驗與診斷，2014,8(5)：68.

中圖分類號TS207.4

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2015)30-225-02

作者簡介仝偉建(1983- )，男，山東金鄉(xiāng)人，中級獸醫(yī)師，碩士，從事食品微生物檢測研究。

收稿日期2015-09-14

Analysis of Salmonella Detection Capacity Verification Results

TONG Wei-jian, YANG Xiao-nan, DUAN Peng et al(Gansu Food Inspection and Research Institute, Lanzhou, Gansu 730030)

Abstract[Objective] To study the detection of Salmonella in laboratory. [Method] According to GB 4789.4-2010, the samples of 5 groups of 1#, 2#, 3#, 4# and 5# were detected, and the positive bacteria were divided into groups. [Result] The results showed that among test samples, bacteria 1# is Salmonella typhimurium, 2 # is Lisa Salmonella montevideo, 3# is Salmonella agone, 4# and 5# are Non Salmonella. [Conclusion] Through this capacity verification, testing capabilities of microbiology testing laboratory of Gansu Food Inspection and Research Institute have been effectively verified, laboratory management level and Salmonella detection technology has been effectively improved.

Key wordsSalmonella; Capacity verification; Blind sample evaluation