王不留行對去勢大鼠骨密度和骨代謝指標的影響

王不留行對去勢大鼠骨密度和骨代謝指標的影響

黃庭惠伍楊1鄭永梅

(恩施市中心醫院,湖北恩施445000)

摘要〔〕目的評價中藥王不留行對去勢大鼠骨質疏松的防治效果。方法采用去卵巢建立大鼠骨質疏松模型。60只雌性大鼠，分假手術組、模型組(去除卵巢)，雌二醇(E2)組(去除卵巢+尼爾雌醇)、藥物組(去卵巢+王不留行)。術后3個月，雙能X線吸收法(DEXA)測量大鼠骨密度(BMD)、骨礦含量(BMC)；取大鼠血、尿檢測骨代謝指標。結果與模型組比較，藥物組BMD和BMC有顯著提高。藥物組骨鈣素(BGP)、骨堿性磷酸酶(ALP)明顯升高，同時尿鈣/肌酐、尿磷/肌酐、尿羥脯氨酸/肌酐、尿Ⅰ型膠原羧基末端肽/肌酐均降低。結論王不留行可以有效地阻止去勢骨質疏松大鼠的骨量丟失，具有促進骨形成，抑制骨吸收的作用，對去勢大鼠骨質疏松有較好的防治作用。

關鍵詞〔〕王不留行；骨質疏松；骨密度；骨代謝指標

中圖分類號〔〕R285.6〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：湖北省自然科學

通訊作者：伍楊(1962-)，女，副教授，主要從事老年病相關免疫學機制研究。

1湖北民族學院醫學院

第一作者：黃庭惠(1973-)，女，主管護師，主要從事老年護理與保健研究。

骨質疏松是常見的代謝性疾病，雌激素的缺乏是絕經后骨質疏松(PMO)發病中的重要因素。雌激素替代療法(ERT)是防治PMO的有效方法，但長期大量使用有一定的副作用〔1〕，因此，選用副作用小的中藥防治PMO已成為一個研究熱點。一些植物雌激素有著和天然雌激素相似的作用，在對傳統中藥王不留行化學成分的研究中，桑圣明等〔2〕從王不留行中分離出有較強雌激素樣活性的環肽成分。本實驗通過觀測王不留行對去勢大鼠骨密度(BMD)和骨代謝指標的影響來客觀評價王不留行對去勢大鼠骨質疏松的防治作用。

1材料與方法

1.1實驗動物3月齡清潔級Wsitar雌性大鼠60只，體重180～220 g，由湖北省實驗動物研究中心提供。動物合格證號：SCXK(鄂)2003～005。

1.2藥物及試劑王不留行藥材購自恩施州恒信醫藥公司，于常壓下，用10倍于藥材體積的開水將王不留行浸泡1 d，然后過濾去渣，將藥物濃縮至所需濃度。尼爾雌醇(片劑，每片1 mg，上海華聯制藥有限公司生產)，使用前配成0.01 mg/ml的溶液。血骨鈣素(BGP)、堿性磷酸酶(ALP)、尿鈣、磷、尿羥脯氨酸、尿Ⅰ型膠原羧基末端肽(CTX)、肌酐(Cr)檢測試劑盒均購自北京康源瑞得生物科技有限公司。

1.3儀器QDR-4500型雙能X線骨密度儀(美國Hologl公司)，中佳光電GC-1200γ放射免疫計數器，TP-1000電子天平(湘儀天平儀器廠)。

1.4分組及選模方法將大鼠稱重后除正常對照組(n=10)外，其余50只大鼠均以3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(0.1 ml/100 g體重)，背部肋下切開皮膚、肌肉、暴露腹腔，找出卵巢，假手術組(10只)保留，其余大鼠切除雙側卵巢。術后1 w行陰道涂片，確定無動情周期變化者為選模成功，選模成功大鼠隨機分為3組：模型組、雌二醇(E2)組(去除卵巢+尼爾雌醇)、藥物組(去卵巢+王不留行液)，各組10只。E2組予以尼爾雌醇按人鼠體表面積比率折算1倍等效劑量〔3〕，合0.01 mg/ml的混懸液，每周1次(周內第1天使用)，其余時間每天灌胃等量飲用水；藥物組予以0.4 g/ml王不留行水浸液2 ml(相當于生藥40 g)，每天1次灌服，連續6 d，休息1 h給藥時間為3個月。期間各組大鼠同樣環境分籠飼養，自由攝食飲水。飼養環境：室內溫度控制在(20±2)℃,標準飼料。

1.5標本制備大鼠處死前1 d置于代謝籠中收集24 h尿液，-10℃保存待測。3% 戊巴比妥鈉麻醉后，斷頭處死大鼠，取血，3 000 r/min離心10 min，分離血清，置-40℃保存待檢。

1.6檢測指標和方法所有動物3% 戊巴比妥鈉麻醉后置于掃描定位板上，于QDR-4500型雙能X線密度儀測定腰椎、股骨及全身BMD和骨礦含量(BMC)。按試劑盒說明測定血BGP、ALP、尿鈣、磷、尿羥脯氨酸、尿Ⅰ型CTX。

1.7統計學方法采用SPSS17.0軟件進行t檢驗。

2結果

2.1王不留行對去勢大鼠全身、股骨、腰椎BMD的影響模型組大鼠腰椎、股骨和全身BMD與正常對照組比較明顯降低(P<0.01)；藥物組、E2組與模型組比較，全身及腰椎、股骨BMD有顯著差異(P<0.01)。見表1。

2.2王不留行對去勢大鼠BMC的影響模型組與正常對照組比較BMC量明顯降低(P<0.01)；與模型組比較，藥物組、E2組骨礦含量有顯著性提高(P<0.01)。見表2。

2.3王不留行對去勢大鼠血清BGP、ALP含量的影響模型組大鼠血清BGP、ALP含量與正常對照組比較明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，藥物組、E2組大鼠血清BGP、ALP含量明顯降

低(P<0.01)；藥物組、E2組明顯沒有差異。見表3。

2.4王不留行對去勢大鼠24 h空腹尿鈣、鈣/Cr、磷/Cr、羥氨酸/Cr、CTX/Cr的影響模型組大鼠24 h空腹尿鈣、鈣/Cr、磷/Cr、羥脯氨酸/Cr、CTX/Cr與正常對照組比較明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，藥物組、E2組大鼠24 h空腹尿鈣、鈣/Cr、磷/Cr、羥脯氨酸/Cr、CTX/Cr明顯降低(P<0.01)；藥物組、E2組明顯沒有差異。見表4。

表1　王不留行對去勢大鼠全身、股骨、腰椎BMD的

與模型組比較：1)P<0.01

表2　王不留行對去勢大鼠BMC的影響

與正常對照組比較:1)P<0.01；與模型組比較:2)P<0.01；下表同

表3　各組大鼠血清BGP、ALP含量比較

表4　各組大鼠24 h空腹尿鈣、鈣/Cr、磷/Cr、羥脯氨酸/Cr、CTX/Cr的比較

3討論

2000年美國國立公共衛生研究所(NIH)召開的骨礦會議上，認為骨質疏松是指因為骨強度的問題而引發骨折增加骨骼疾病。骨強度是由BMD和骨質量綜合決定的。骨質量評價依賴于DEXA評價和骨代謝標志物檢測。目前，DEXA是世界公認的診斷骨質疏松的金標準〔4〕。骨代謝標志物，血清BGP是成骨細胞合成分泌的特殊蛋白，其功能是維持骨的正常礦化率，為反映骨形成的靈敏指標，BGP由成骨細胞合成后，約20%從骨組織直接進入血液，因此血中BGP的濃度可以反映骨中BGP的狀態。血清ALP主要來自骨和肝，ALP是成骨細胞成熟早期的標志物，可反映骨形成。空腹尿鈣、磷主要來源于骨鹽的分解，故其排出量可反映骨吸收的狀況。尿羥脯氨酸的排泄量為骨吸收的指標；CTX是反映骨吸收狀態的特異指標。治療后骨吸收標志物減少能反映長期的骨折風險減小。因此，骨代謝標志物不僅作為評價量質量，預測骨折率的手段，且正在成為評價骨吸收藥物藥效的手段〔5〕。

本實驗結果顯示，中藥王不留行能有效改善去勢骨質疏松大鼠BMD和BMC，其治療效果與尼爾雌醇無明顯差異，王不留行既可以促進骨形成，又可以抑制骨吸收，對去勢大鼠骨質疏松有較好的防治作用，是一種有研究和應用前景的天然藥物。本實驗結果表明王不留行可顯著降低去勢大鼠白細胞介素(IL)-1、IL-6、TNF-α的水平〔6〕。而雌激素水平降低則可使這些細胞因子分泌增加，王不留行可能經其雌激素樣作用而改善去勢大鼠骨質疏松癥狀，其防治骨質疏松的機制有待進一步的實驗和臨床研究。

4參考文獻

1劉建立.應用雌激素防治絕經后骨質疏松癥的問題〔J〕.國際內分泌代謝雜志，2006；26(4)：230-2.

2桑圣明，榮愛娜，王洪誠，等.中藥王不留行化學成分的研究(Ⅱ) 〔J〕.中草藥，2000；31(3):1-4.

3苗明三.實驗動物和動物實驗技術〔M〕.北京：中藥中醫藥出版社，1997：143-4.

4馮秉瑋，高雨紅.源發性骨質疏松的診斷現狀〔J〕.內蒙古醫學雜志，2004；36(1)：37-40.

5于麗，蘇秀蘭，畢力夫.骨代謝指標和骨質疏松〔J〕.中國骨質疏松雜志，2006；12(3)：307-9.

6伍楊，鄧明會，陳顯兵.王不留行防治去勢大鼠骨質疏松癥的實驗研究〔J〕.四川中醫，2010；28(5)：58-9.

〔2014-01-07修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)