五味子對衰老大鼠心肌抗氧化能力及形態學改變的影響

五味子對衰老大鼠心肌抗氧化能力及形態學改變的影響

李屹馬越嬌張曄劉永林徐國峰楊鑫周酈楠

(遼寧省基礎醫學研究所，遼寧沈陽110101)

摘要〔〕目的探討五味子對D-半乳糖致衰老大鼠血清及心肌抗過氧化能力及心肌形態學改變的影響。方法應用D-半乳糖復制衰老大鼠模型，同時給予五味子灌胃，8 w后，取血、心臟。檢測血清和心肌組織總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的含量及光鏡下心肌形態學的改變。結果五味子治療組血清和心肌組織的T-AOC、GSH-Px、SOD、NO含量明顯高于衰老模型組，MDA含量低于衰老模型組。結論五味子對自由基引起的心肌損傷有保護作用，清除自由基的能力隨用藥時間的延長而增強，所以其保護作用與五味子服用時間呈正相關。

關鍵詞〔〕五味子；衰老；D-半乳糖；總過氧化能力；丙二醛；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽過氧化酶

中圖分類號〔〕R322.1+1〔文獻標識碼〕A〔

通訊作者：周酈楠(1966-)，女，碩士，教授，碩士生導師，主要從事神經解剖學研究。

第一作者：李屹(1973-)，男，碩士，講師，主要從事基礎醫學研究。

《新修本草》載“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。古醫書稱它荎蕏、玄及、會及，最早列于神農本草經上品中藥，能滋補強壯之力，藥用價值極高，有強身健體之效。藥理研究表明，北五味子含有多種營養成分，如五味子素、蘋果酸、檸檬酸、糖類、樹脂、維生素C等〔1〕。味甘、酸，性溫，能益氣生津，補腎養心，收斂固澀，用于氣虛津傷，體倦多汗，短氣心悸；肺氣不足或肺腎兩虛所致的喘咳，或喘咳日久，肺氣耗傷；心陰不足，心悸怔忡，失眠健忘；腎氣不固，遺精，尿頻，或脾腎兩虛，久瀉不止〔2，3〕。

1材料與方法

1.1動物8周齡(180～200 g體重)SD大鼠。由沈陽醫學院實驗動物中心提供。實驗動物許可證為遼寧省科學技術廳簽發，許可證號：SCXK(遼)2003-0016。動物飼料為繁殖鼠全價顆粒飼料，由沈陽市于洪區前民飼料廠生產。

1.2藥品及試劑D-半乳糖(D-gal)為Sigma公司的產品，購于上海博蘊生物科技有限公司。總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所。北五味子由吉林農業大學提供，按水提液常規方法煎制，濃縮至含生藥量0.4 g/ml，供灌胃給藥用。

1.3方法SD大鼠適應性飼養1 w，然后將大鼠稱重，編號，隨機分成5組，每組12只，雌雄各半，腹腔注射D-半乳糖(生理鹽水)200 g·kg-1·d-1，連續給藥8 w。①衰老模型組：腹腔注射D-半乳糖，生理鹽水10 ml·kg-1·d-1灌胃。②五味子1組：腹腔注射D-半乳糖，自造模第1天開始灌胃給藥，五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。③五味子2組：腹腔注射D-半乳糖，自造模第3周開始灌胃給藥，五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。④五味子3組：腹腔注射D-半乳糖，自造模第5周開始灌胃給藥五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。⑤空白對照組：腹腔注射生理鹽水，生理鹽水灌胃。所有大鼠均飼以常規動物飼料和水。各組連續給藥到8 w。末次給藥4 h后處死動物，取血、心臟，分離血清。生理鹽水10%心肌組織勻漿，3 000 r/min離心15 min,取上清液。血清及心肌組織勻漿上清液置于-80℃冰箱保存，備檢測相關指標。各組另取大鼠經1%肝素鈉生理鹽水、含4%多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸鹽緩液(PBS,pH7.4)固定液內固定灌注，取出心臟組織并置于固定液中后固定4 h，HE染色，光鏡下觀察。

1.4統計學方法采用SPSS13.0軟件進行t檢驗。

2結果

2.1五味子對衰老大鼠血清T-AOC、GSH-Px的影響給藥8 w后衰老大鼠血清T-AOC、GSH-Px含量顯著下降，與空白對照組相比較差異顯著(P<0.01)。五味子1組與衰老模型組相比較血清T-AOC、GSH-Px含量升高顯著(P<0.01)，五味子2組與衰老模型組相比較血清T-AOC、GSH-Px含量明顯升高(P<0.05)，而五味子3組與衰老模型組相比較血清中T-AOC、GSH-Px含量有所升高，但差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2五味子對衰老大鼠心肌組織MDA、SOD、NO的影響給藥8 w后衰老大鼠心肌組織SOD、NO含量顯著下降，MDA含量顯著上升，與空白對照組相比較差異有統計學意義(P<0.01)。五味子1組、2組、3組與衰老模型組相比較心肌中SOD、NO含量明顯升高(P<0.01，P<0.05)，MDA含量明顯下降(P<0.01，P<0.05)。說明五味子對自由基引起的心肌損傷有保護作用。見表2。

表1　五味子對D-半乳糖致衰老大鼠血清

與衰老模型組比較：1)P<0.01,2)P<0.05,下表同

2.3心肌組織形態學變化空白對照組心肌細胞排列整齊,心肌細胞呈短圓柱狀,細胞質豐富, 細胞核較大,核仁明顯, 染色質稍疏松,無炎性細胞浸潤,連接處染色較深,即閏盤,多數只有一個細胞核,少數有雙核,呈卵圓形,位于細胞中央,有橫紋。衰老模型組心肌細胞排列紊亂，心肌纖維小，心肌細胞核不規則，少，萎縮，異常形狀增多，呈橢圓形、細長形，血管擴張充血。心肌之間閏盤減少，不清楚。五味子組較衰老模型組有所恢復，心肌細胞核增多，橢圓形，空泡減少，但閏盤不清楚。見圖1。

表2　給藥后第8周五味子對D-半乳糖致衰老大鼠心肌

空白對照組

衰老模型組

五味子1組

五味子2組

五味子3組

3討論

本實驗結果表明D-半乳糖亞急性中毒狀態下, 體內產生大量超氧陰離子自由基, 是引起動脈粥樣硬化、冠狀心臟疾病和免疫力不足的主因，也是造成老化過程加速的罪魁禍首。可以直接損傷細胞引起衰老,還可以通過引起微循環障礙和缺血改變從而進一步加重衰老進程。這種生化和組織結構的改變與自然衰老表現基本吻合。五味子中含有多種化學成分，其中木酚素及多糖是強效抗氧化劑〔4～7〕，能抑制自由基，能增強腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)或粒線體(細胞能量庫)的能量生產，同時保護線粒體免受氧化壓力所侵害。具有降低心肌損害程度,明顯延緩衰老中心肌細胞的功能減退速度。這些作用足以說明五味子能減緩老化過程和延緩出現與老化相關的疾病，如心臟衰竭、阿爾茨海默病及帕金森病〔8～10〕。本實驗中,五味子不同的給藥時間均可顯著提升衰老大鼠血清和心肌中T-AOC、GSH-Px、SOD、NO和降低MDA的含量，說明五味子對自由基引起的心肌損傷有保護作用，清除自由基的能力隨用藥的時間延長而增強，所以其保護作用與五味子服用時間呈正相關。

4參考文獻

1高雁，李廷利.五味子有效成分的藥理作用研究進展〔J〕.中醫藥學報，2011；39(6)：104-6.

2倪立東，陳延西.五味子藥理作用研究概況〔J〕.暨南大學學報：醫學版，1996；17(2)：125-8.

3李巧茹.五味子藥理作用的研究進展〔J〕.西北藥學雜志，1995;10(1)：46-8.

4Liu H,Lai H,Jia X,etal.Comprehensive chemical analysis of Schisandra chinensis by HPLC-DAD-MS combined with chemometrics 〔J〕.Phytomedicine,2013;20(12)：1135-43.

5孟憲軍，秦琴，高曉旭.五味子多糖的分離純化及清除自由基研究 〔J〕.食品科學，2008;29(1)：91-4.

6謝宇，陳建光，孫新.4種五味子木脂素抗氧化作用實驗研究〔C〕.第十屆全國心血管藥理學術會議暨2010(重慶)國際心血管疾病與藥物高峰論壇，2010:151-3.

7劉威，張茜，張成義.五味子對心血管系統作用的研究〔J〕.北華大學學報：自然科學版，2011;12(1)：47-9.

8聞雷，孫志學，肖威.五味子的藥理作用研究〔J〕.齊齊哈爾醫學院學報，2010;31(13)：2126-7.

9Hua DH, Zhang DZ, Huang B,etal.Structural characterization and DPPH radical scavenging activity of a polysaccharide from Guara fruits 〔J〕.Carbohydrate Polymers,2014;103(1)：143-7.

10Sanna D, Delogu G, Mulas M,etal. Determination of free radical scavenging activity of plant extracts through DPPH assay：An EPR and UV-Vis Study〔J〕.Food Anal Methods, 2012;5(4)：759-66.

〔2014-03-12修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)