抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ及心肌細胞TGF-β1的影響

抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ及心肌細胞TGF-β1的影響

麻京豫

(河南中醫學院第一附屬醫院心血管內科，河南鄭州450000)

摘要〔〕目的探討抗心衰顆粒對舒張性心衰(DHF)大鼠血漿醛固酮(ALD)、腎素活性(PRA)、血管緊張素(AT)-Ⅱ及心肌細胞內轉化生長因子 (TGF)-β1的影響。方法建立DHF大鼠模型，隨機分為模型組，陽性藥組(鹽酸貝那普利)，抗心衰顆粒大、中、小劑量組和假手術組，采用放射免疫法(RIA)測定大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ，免疫熒光染色法測定大鼠心肌細胞內TGF-β1蛋白表達水平。結果陽性藥組及抗心衰顆粒大劑量組AT-Ⅱ均較模型組降低(均P<0.05)，且兩組之間無統計學差異(P>0.05)；陽性藥組及抗心衰顆粒大、中劑量組ALD均較模型組降低(均P<0.05)，且抗心衰顆粒大、中劑量組ALD與陽性藥組均無統計學差異(P>0.05)；陽性藥組及抗心衰顆粒各劑量組大鼠心肌細胞內TGF-β1的平均熒光強度均較模型組降低(均P<0.05)。結論抗心衰顆粒具有有效抑制DHF發生發展過程中腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)的過度激活和抗心肌纖維化的作用，具有較好的臨床應用價值。

關鍵詞〔〕醛固酮；血管緊張素Ⅱ；腎素；轉化生長因子β1；抗心衰顆粒；舒張性心力衰竭

中圖分類號〔〕R541.4〔文獻標識碼〕A〔

第一作者：麻京豫(1969-)，女，碩士，副教授，副主任醫師，主要從事心衰方面的研究。

目前研究〔1〕認為舒張性心力衰竭(DHF)的主要發生發展機制主要與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)的過度激活和心肌纖維化有關，而心肌的纖維化則與心肌細胞內轉化生長因子(TGF)-β1有著緊密聯系。本研究通過建立DHF大鼠模型，觀察分析抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿醛固酮(ALD)、腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AT-Ⅱ)及心肌細胞內TGF-β1的影響，為DHF的臨床治療提供新的思路。

1材料與方法

1.1動物模型的建立選擇8周齡SD雄性大鼠120只，體重(200±10)g，鄭州大學實驗室動物中心提供(合格證號511020)，隨機分為模型組(100只)和假手術組(20只)。采用腹主動脈縮窄法建立DHF大鼠模型，使大鼠腹主動脈直徑減少35%～45%，在建模后8 w采用超聲心電圖和心導管等方法判斷DHF大鼠模型是否建立成功。假手術組僅開腹暴露腹主動脈不做結扎縮窄，其余步驟和模型組相同。術后1 w內給每只大鼠腹腔注射青霉素10萬單位/d。

1.2分組與給藥將DHF大鼠模型隨機分為模型組，陽性藥組，抗心衰顆粒大、中、小劑量組和假手術組。其中抗心衰顆粒大、中、小劑量分別予以48.29、24.14、12.07 g/kg抗心衰顆粒(河南省中醫院制劑部提供，批號：20130411)進行灌胃，陽性藥組予以1.43 mg/kg的鹽酸貝那普利(商品名：洛汀新，北京惠通醫藥有限公司提供，批號:C0005)進行灌胃，而模型組和假手術組則僅予以蒸餾水灌胃。給藥8 w后，每組隨機抽取6只大鼠進行測定。

1.3大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ的測定采用放射免疫法(RIA)測定大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ，所有試劑盒均由北京解放軍總醫院東亞免疫所提供。抽取大鼠頸總動脈血液，使用肝素抗凝，2 500 r/min離心10 min。

1.4大鼠心肌細胞內TGF-β1的測定采用免疫熒光染色法測定大鼠心肌細胞內TGF-β1蛋白表達水平，所有試劑盒均由南京凱基生物科技有限公司提供。將大鼠心室相同部位心肌進行冰凍切片染色及置片，用激光488 nm/530 nm激發20%發射后觀察照相。

2結果

2.1抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ的影響模型組大鼠血漿PRA、ALD、AT-Ⅱ均較假手術組升高(均P<0.05)；抗心衰顆粒中劑量組PRA較模型組降低，差異具有統計學意義(P<0.05)，而陽性藥組及抗心衰顆粒大、小劑量組PRA均與模型組無統計學意義(均P>0.05)；陽性藥組及抗心衰顆粒大劑量組AT-Ⅱ均較模型組降低(均P<0.05)，且兩組之間無統計學差異(P>0.05)；陽性藥組及抗心衰顆粒大、中劑量組ALD均較模型組降低(均P<0.05)，且抗心衰顆粒大、中劑量組ALD與陽性藥組均無統計學差異(P>0.05)。見表1。

表1　抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿ALD、

與假手術組比較：1)P<0.05；與模型組比較： 2)P<0.05

2.2抗心衰顆粒對DHF大鼠心肌細胞內TGF-β1的影響模型組大鼠心肌細胞內TGF-β1的平均熒光強度(60.12±12.32)較假手術組(15.62±2.19)升高(P<0.05)；陽性藥組(18.21±2.41)及抗心衰顆粒大、中、小劑量組(19.47±2.86，31.32±7.96，41.32±8.78)均較模型組降低(均P<0.05)，其中陽性藥組與抗心衰顆粒大劑量組無統計學差異(P>0.05)，而與抗心衰顆粒中、小劑量組存在統計學差異(P<0.05)。

3討論

DHF是以心室肌舒張功能僵硬度升高及順應性下降而心室肌收縮功能正常(射血分數>50%)為主要特征，臨床表現為充血性心力衰竭癥狀與體征的一組臨床癥候群〔2〕。目前研究〔3〕認為RAAS在心血管系統功能的調節和維持方面具有重要的意義，近年的研究發現RAAS系統不僅參與調節大血管功能，而且在心力衰竭過程中心肌細胞的增殖與凋亡中也具有一定的促進作用，能夠間接或直接導致心力衰竭的發生〔4〕。PRA可以使血管緊張素原水解成AT-Ⅰ，而血管緊張素轉化酶(ACE)可以使AT-Ⅰ進一步轉化成AT-Ⅱ，AT-Ⅱ不但能促進ALD在腎上腺皮質的分泌，而且同時還具有膠原轉化等生物學作用〔5〕。近年來很多學者〔6～8〕從不同角度對構建了一系列心衰動物模型，這些模型有利于對心衰的全過程進行研究。DHF的病因多種多樣〔6〕，目前研究發現高血壓是造成DHF的主要疾病〔7〕。

抗心衰顆粒由黃芪、山萸肉、蒲黃及海藻等中草藥組成，有益氣滋陰、化痰利水、活血養血、軟堅散結的功效〔8〕。其中黃芪為君藥，具有增強心肌細胞缺血缺氧耐受力的能力；山萸肉可以提高受損心肌細胞內質網活性氧水平；蒲黃可以抑制血小板的聚集作用，延長復鈣時間；海藻有調節血管收縮、抗動脈粥樣硬化及保護心肌等作用〔9〕。

本研究結果與RAAS的過度激活理論一致。另外本研究可能與鹽酸貝那普利不能直接作用于PRA，其可能直接通過抑制ACE使AT-Ⅱ的生成減少有關，這與苗夢露等〔10〕的研究結果一致。本研究還發現抗心衰顆粒可能對PRA具有最佳效應劑量，若需進一步確認，可以適當增加劑量組繪制劑量效應曲線。而且本研究提示抗心衰顆粒與鹽酸貝那普利抗心衰的效果一致，抗心衰顆粒能抑制RAAS的過度激活，可以用于臨床治療DHF。

DHF的發展過程中，心肌細胞和間質細胞能夠發生代償性變化，造成心肌纖維化，使心肌發生重構〔11〕。RAAS的激活是造成心肌纖維化的主要原因，而同時細胞因子中最重要的促纖維化生長因子則為TGF-β1，其能促進細胞外基質mRNA的表達及蛋白質的形成，同時能抑制細胞外基質的降解〔12〕。本研究結果提示鹽酸貝那普利和抗心衰顆粒均能抑制TGF-β1的表達，其抑制程度與抗心衰顆粒的劑量呈正相關關系。

綜上所述，抗心衰顆粒具有有效抑制DHF發生發展過程中RAAS的過度激活和抗心肌纖維化的作用，臨床應用抗心衰顆粒具有一定的有效性及理論依據。

4參考文獻

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〔2014-11-17修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)