黃芪多糖聯合順鉑對人肺癌A549細胞增殖抑制作用及其機制研究

李蓉，章運生，譚小武

（1.南華大學附屬第二醫院呼吸內科，湖南衡陽421001；2.南華大學附屬第二醫院臨床研究所，湖南衡陽421001）

·腫瘤治療研究專題·

黃芪多糖聯合順鉑對人肺癌A549細胞增殖抑制作用及其機制研究

李蓉1，章運生2，譚小武1

（1.南華大學附屬第二醫院呼吸內科，湖南衡陽421001；2.南華大學附屬第二醫院臨床研究所，湖南衡陽421001）

目的觀察黃芪多糖與順鉑對人肺癌A549細胞增殖、細胞周期、誘導凋亡的影響，并對其作用機制進行初步探討。方法采用四甲基偶氮唑鹽法檢測黃芪多糖、順鉑及兩藥聯合對細胞增殖的影響；用流式細胞儀分析對細胞周期及凋亡率的影響；用反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）和Western blotting法檢測對人肺癌A549細胞B細胞淋巴瘤-白血病2（Bcl-2）、Bcl相關X蛋白（Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）基因表達水平的影響。結果黃芪多糖、順鉑及兩藥聯合對人肺癌A549細胞的增殖抑制作用呈時間-濃度依賴關系；與陰性對照組比較，黃芪多糖作用后可出現G1期細胞阻滯，順鉑作用后出現S期細胞阻滯，兩藥聯合出現G1、S期細胞阻滯，差異均有統計學意義（P＜0.01）。兩藥聯合較陰性對照組及單用黃芪多糖、順鉑明顯上調Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表達，下調Bcl-2 mRNA及蛋白的表達，差異均有統計學意義（P＜0.01）。結論黃芪多糖可協同順鉑增強對人肺癌A549細胞的促凋亡作用，其作用機制與上調Bax、Caspase-3的表達、下調Bcl-2的表達有關。

黃芪多糖；順鉑；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3；人肺癌A549細胞；Bcl相關X蛋白；B細胞淋巴瘤-白血病2

肺癌是世界最常見的惡性腫瘤，其發病率和死亡率逐年升高，根據世界衛生組織2014年報告，肺癌為全球癌癥死因的首位，已成為累積危險性最高的腫瘤[1]。大多數肺癌患者就診時已為晚期[2]。目前，非小細胞肺癌的治療主要采用手術，放、化療，中藥等綜合治療方案，化療在綜合治療中的地位尤為重要，以鉑類聯合其他化療藥物的兩藥方案已成為治療晚期非小細胞肺癌的標準一線方案[3]。順鉑（DDP）為晚期非小細胞肺癌化療的一線藥物，對腫瘤有肯定的療效，但其非血液毒性較大，限制了其使用劑量[4]。

中藥由于在腫瘤治療方面有其獨特的優勢，正受到廣泛關注，中醫治療肺癌能減輕手術，放、化療的不良反應，提高機體免疫力，提高患者生活質量[5-6]。黃芪是我國傳統中藥，黃芪多糖（APS）是黃芪的主要活性成分之一，具有增強機體免疫系統功能、抗腫瘤、抗氧化、延緩衰老等諸多藥理學作用[7-8]。APS應用于臨床治療腫瘤的有效性及安全性已被證實，其可通過誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞增殖等而發揮抑瘤作用。近年來，APS的抗腫瘤作用取得了不少新的研究成果，但APS與抗腫瘤藥物聯用的研究較少，本研究選用人肺癌A549細胞作為研究對象，探究APS與DDP聯合對其增殖、細胞周期及對凋亡相關蛋白——B細胞淋巴瘤白血病-2（Bcl-2）、Bcl相關X蛋白（Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的影響，旨在為臨床應用APS治療肺癌提供理論和實驗依據，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞株人肺癌A549細胞株購自上海細胞中心。

1.1.2 主要試劑APS購自上海穎心實驗室有限公司，DDP購自山東齊魯藥業股份有限公司，四甲基偶氮唑鹽（MTT）購自美國Sigma公司，碘化丙啶（PI）、二喹啉甲酸（BCA）蛋白試劑盒、增強化學發光（ECL）試劑盒均購自碧云天生物研究所，聚合酶鏈反應（PCR）試劑盒購自Promega公司，Bcl-2兔抗人單克隆抗體、Bax兔抗人單克隆抗體、Caspase-3兔抗人單克隆抗體均購自Santa Crus公司，辣根過氧化物酶標記山羊抗兔IgG購自北京中杉金橋生物技術有限公司（進口分裝）。

1.1.3 主要儀器細胞培養箱購自美國Forma公司，倒置顯微鏡購自日本奧林巴斯CK-2，離心機購自德國Eppendorf 525L，酶標儀（Rayto RT-6000型）購自深圳雷杜生命科學股份有限公司，流式細胞儀（FACS）購自BD公司，PCR儀（TC-XP-G型）購自杭州博日科技有限公司，電泳儀（DYY-8C型）購自北京市六一儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 MTT法檢測APS與DDP對人肺癌A549細胞增殖的影響根據倍增時間選擇對數生長期人肺癌A549細胞，以每孔5×103個細胞接種于96孔板中，每孔體積200 μL，接種3塊板。培養過夜后吸棄培養孔內上清液，單一用藥組分別加入質量濃度為50、100、200、400 mg/L APS 100 μL或1、2、4 mg/L DDP 100 μL，聯合用藥組分別加入質量濃度為2 mg/L DDP和400 mg/L APS 200 μL，每個質量濃度設5個復孔，同時，設陰性對照組，以磷酸鹽緩沖液（PBS）填充，置于孵育箱內繼續培養，于24、48、72 h各取出1塊培養板每孔加入20 μL MTT溶液，繼續培養4 h，而后小心吸取孔內液體并加入二甲基亞砜150 μL，置于振蕩器上10 min使其充分溶解，用PCR儀以490 nm波長對各孔光密度（OD）值進行檢測并記錄結果。實驗重復3次。細胞增殖抑制率（%）=（1-OD加藥組/OD陰性對照組）×100%。

1.2.2 流式細胞術檢測細胞周期與凋亡水平選擇對數生長期人肺癌A549細胞，調整細胞密度為1×106mL-1，然后接種于6孔板內，相同質量濃度設2個復孔，培養12 h。單一用藥組向每孔細胞分別加入APS（200 mg/L）、DDP（2 mg/L），聯合用藥組加入APS 200 mg/L及DDP 2 mg/L，各2 mL；陰性對照組不加入藥物，繼續培養48 h。加入PBS1mL清洗2次，胰蛋白酶消化低速離心，棄PBS，加入70%冰醋酸1 mL固定細胞樣本，4℃冰箱內過夜。再次離心，將固定液吸出，加入PBS 3 mL重懸，離心后棄PBS。將樣品取出再向管內加入50 μg/mLPI溶液1mL，4℃避光染色30 min。選用488 nm激發波長對待測樣品進行流式細胞儀檢測，實驗重復3次。

1.2.3 RT-PCR檢測Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表達水平選擇對數生長期人肺癌A549細胞，調整細胞密度為1×106mL-1，然后，接種于6孔板內，相同質量濃度設2個復孔，培養12 h。單一用藥組向每孔細胞分別加入APS（200 mg/L）、DDP（2 mg/L），聯合用藥組加入APS（200 mg/L）及DDP（2 mg/L），陰性對照組不加入藥物，繼續培養48 h。用Trizol法提取總RNA，反轉錄合成cDNA。引物序列：Bcl-2基因，上游5′-CTTTTGCTGTGGGGTTTTGT-3′，下游5′-GTCATTCTGGCCTCTCTTGC-3′；Bax基因，上游5′-GGAGCTGCAGAGGATGATTG-3，下游5′-CCTCCCAGAAAAATGCCATA-3′；Caspase-3基因，上游5′-AGGGGTCATTTATGGGACA-3′，下游5′-TACACGGGATCTGTTTCTTTG-3′；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）基因，上游5′-AGATCCACAACGGATACATT-3′，下游5′-TCCCTCAAGATTGTCAGCAA-3′。RT-PCR嚴格按照試劑盒說明書操作，反應條件：94℃變性5 min，擴增30個循環（94℃60 s、57℃30 s、72℃60 s），72℃延伸5 min。擴增產物用1.5%瓊脂糖進行電泳，用UVP凝膠成像系統觀察結果并拍照，實驗重復3次，采用Adobe Photoshop CS5進行灰度值分析。

1.2.4 Western blotting法檢測Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達水平選擇對數生長期人肺癌A549細胞，調整細胞密度為1×106mL-1，然后，接種于6孔板內，相同質量濃度設2個復孔，培養12 h。單一用藥組向每孔細胞分別加入APS（200 mg/L）、DDP（2 mg/L），聯合用藥組加入APS（200 mg/L）及DDP（2 mg/L），陰性對照組不加入藥物，繼續培養48 h，棄培養液，加入預冷PBS 3 mL漂洗細胞，置冰上加入含1%苯甲基磺酰氟（PMSF）的蛋白裂解液作用30 min，收集上清液。用試劑盒測定蛋白水平。經10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）凝膠電泳，轉移蛋白樣品至硝酸纖維素膜上，5%脫脂奶粉封閉90 min，加入一抗溶液（1∶500）4℃過夜。本研究以β-肌動蛋白（β-actin）作為內參基因，用TBST（含0.1%吐溫20-Tris緩沖液）洗膜。加入辣根過氧化物酶二抗溶液（1∶2 000），室溫孵育2 h。洗膜后加入ECL化學發光液，暗室內曝光膠片，用UVP凝膠成像系統觀察結果并拍照，實驗重復3次，采用Adobe Photoshop CS5進行灰度值分析。

1.3 統計學處理應用SPSS18.0統計軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 APS對人肺癌A549細胞增殖的影響APS對人肺癌A549細胞具有增殖抑制作用，在同一作用時間下，隨著APS質量濃度的增加，抑制作用逐漸增強；在同一藥物質量濃度下，隨著APS作用時間的延長，抑制作用逐漸增強，差異均有統計學意義（P＜0.01），見表1。

表1 APS不同質量濃度及作用時間人肺癌A549細胞增殖抑制率比較（±s，%）

表1 APS不同質量濃度及作用時間人肺癌A549細胞增殖抑制率比較（±s，%）

注：與陰性對照組同時間點比較，aP＜0.01；與同組24 h比較，bP＜0.01；與同組48 h比較，cP＜0.01。

組別陰性對照組APS（mg/L）50 100 200 400作用時間24 h48 h72 h 0.65±0.120.88±0.111.10±0.15 9.77±0.25abc13.93±1.07ab23.27±0.49abc25.32±0.26abc3.59±0.34a8.08±0.28a12.06±0.23a16.04±0.38a7.32±0.15ab12.80±0.37ab20.60±0.45ab22.53±0.49ab

2.2 DDP對人肺癌A549細胞增殖的影響DDP對人肺癌A549細胞具有顯著的增殖抑制作用，在同一作用時間下，隨著DDP質量濃度的增加，抑制作用逐漸增強；在同一藥物質量濃度下，隨著DDP作用時間的延長，抑制作用逐漸增強，差異均有統計學意義（P＜0.01），見表2。

表2 DDP不同質量濃度及作用時間人肺癌A549細胞增殖抑制率比較（±s，%）

表2 DDP不同質量濃度及作用時間人肺癌A549細胞增殖抑制率比較（±s，%）

注：與陰性對照組同時間點比較，aP＜0.01；與同組24 h比較，bP＜0.01；與同組48 h比較，cP＜0.01。

組別陰性對照組DDP（mg/L）作用時間24 h48 h72 h 0.65±0.120.88±0.111.10±0.15 124 5.03±0.25a15.46±0.45a23.83±0.25a8.47±0.21ab40.87±0.85ab51.56±0.46ab11.74±0.26abc48.84±0.32abc59.34±1.32abc

2.3 APS聯合DDP對人肺癌A549細胞增殖的影響

APS與DDP聯合對人肺癌A549細胞增殖有較強抑制作用，隨著時間的延長，抑制作用增強，聯合用藥組抑制率與單一用藥組比較，差異均有統計學意義（P＜0.01），見表3。

表3 聯合用藥組與單一用藥組人肺癌A549細胞增殖抑制率比較（±s，%）

表3 聯合用藥組與單一用藥組人肺癌A549細胞增殖抑制率比較（±s，%）

注：與聯合用藥組同時間點比較，aP＜0.01；與同組24 h比較，bP＜0.01；與同組48 h比較，cP＜0.01。

組別作用時間24 h48 h72 h單一用藥組APS組DDP組聯合用藥組16.04±0.38a15.46±0.45a25.12±0.73 22.53±0.49ab40.87±0.85ab53.94±0.25b25.32±0.26ac48.84±0.32ac63.94±0.69c

2.4 APS聯合DDP對人肺癌A549細胞周期和凋亡的影響APS作用后可使人肺癌A549細胞中G1期細胞比例上升，出現G1期細胞阻滯；而DDP作用后S期細胞比例有所增加，出現S期細胞阻滯；APS與DDP聯合可使G1、S期細胞比例均上升，表現為G1、S期細胞阻滯。聯合用藥組細胞凋亡率較單一用藥組明顯增加，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表4。

表4 各組人肺癌A549細胞周期阻滯及凋亡率比較（±s，%）

表4 各組人肺癌A549細胞周期阻滯及凋亡率比較（±s，%）

注：與陰性對照組比較，aP＜0.01；與聯合用藥組比較，bP＜0.01，cP＜0.05。

組別陰性對照組單一用藥組APS組DDP組聯合用藥組凋亡率0.99±0.21細胞周期G1SG252.82±0.8432.56±1.2014.65±1.02 10.43±0.83a8.92±0.89a4.69±0.75a11.53±1.24ac16.60±0.69ac19.08±0.86a61.06±0.78ab46.76±1.11ab59.85±1.05a28.51±0.69b44.34±1.82ab35.44±1.01

2.5 APS聯合DDP對人肺癌A549細胞Caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA表達水平的影響APS及DDP均可促進人肺癌A549細胞Bax、Caspase-3 mRNA表達和抑制Bcl-2 mRNA表達，差異均有統計學意義（P＜0.01）。APS與DDP聯合作用效果更強，與單一用藥組比較，差異均有統計學意義（P＜0.01），見圖1。各組Bcl-2/GAPDH、Bax/ GAPDH、Caspase-3/GAPDH灰度值比值，見表5。

表5 各組Bcl-2/GAPDH、Bax/GAPDH、Caspase-3/GAPDH灰度值比值（±s，n=3）

表5 各組Bcl-2/GAPDH、Bax/GAPDH、Caspase-3/GAPDH灰度值比值（±s，n=3）

注：與陰性對照組比較，aP＜0.01；與聯合用藥組比較，bP＜0.01。

組別Bax/GAPDHCaspase-3/ GAPDH陰性對照組單一用藥組APS組DDP組聯合用藥組Bcl-2/GAPDH 0.87±0.050.15±0.030.33±0.02 0.67±0.10ab0.54±0.07ab0.21±0.06a0.47±0.07ab0.67±0.08ab0.82±0.09a0.42±0.11ab0.64±0.07ab0.71±0.08a

2.6 APS聯合DDP對人肺癌A549細胞Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表達水平的影響與陰性對照組比較，APS與DDP均可明顯促進人肺癌A549細胞Bax、Caspase-3蛋白表達，而抑制Bcl-2蛋白表達，APS與DDP聯合作用效果更強，與陰性對照組及單一用藥組比較，差異均有統計學意義（P＜0.01），見圖2。各組Bcl-2/β-actin、Bax/β-actin、Caspase-3/β-actin灰度值比值，見表6。

圖2 各組人肺癌A549細胞Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表達水平比較

圖1 各組人肺癌A549細胞Bax、Bcl-2、Caspase-3mRNA表達水平比較

表6 各組Bcl-2/β-actin、Bax/β-actin、Caspase-3/β-actin灰度值比值（±s，n=3）

表6 各組Bcl-2/β-actin、Bax/β-actin、Caspase-3/β-actin灰度值比值（±s，n=3）

注：與陰性對照組比較，aP＜0.01；與聯合用藥組比較，bP＜0.01。

組別Bcl-2/β-actinBax/β-actinCaspase-3/β-actin陰性對照組單一用藥組APS組DDP組聯合用藥組0.75±0.050.53±0.070.59±0.05 0.62±0.04ab0.43±0.01ab0.23±0.05a0.61±0.04ab0.63±0.03ab0.91±0.02a0.79±0.08ab0.85±0.09ab0.89±0.02a

3 討論

肺癌是世界范圍內最常見惡性腫瘤之一，目前還難找到肺癌的特效療法。DDP為肺癌化療中的常用藥物，但其非血液毒性較大，尋找高效、低毒的腫瘤化療藥物及增強化療效果迫在眉睫。在我國中醫藥治療惡性腫瘤歷史悠久，擁有獨特的理論體系。APS具有廣泛的抗腫瘤作用，可通過誘發細胞凋亡而發揮抗腫瘤作用。有研究表明，APS能誘導人胃癌MKN45細胞凋亡[9]。APS對肝癌BEL-7404細胞有殺傷作用，與DDP聯用具有協同抗腫瘤作用。本研究采用MTT法檢測細胞存活水平，結果顯示，APS聯合DDP對人肺癌A549細胞的生長具有濃度依賴性抑制作用。

APS具有抗腫瘤作用，其機制復雜。既往實驗研究表明，APS對腫瘤細胞G1期具有阻滯作用，為APS抗腫瘤及協同化療藥物抗腫瘤研究提供了實驗依據[10-11]。馮濤等[12]發現，APS將肝癌HepG2細胞阻滯于G1期，從而誘導細胞凋亡。本研究采用流式細胞術檢測細胞周期及凋亡率，結果顯示，APS作用48 h后細胞周期構成發生變化，G1期細胞比例增多，出現G1期細胞阻滯，與劉愛平等[13]研究結果相似。DDP作用相同時間，S期細胞比例有所增加，聯合藥物組G1、S期細胞比例均上升。同時，本研究結果顯示，細胞凋亡水平增高，與陰性對照組比較，APS、DDP及聯合用藥凋亡率均增加。提示APS可通過對人肺癌A549細胞G1期的阻滯作用，DDP可通過對人肺癌A549細胞S期的阻滯作用，共同發揮誘導細胞凋亡的作用。

細胞凋亡受多基因的調控，Bcl-2家族和Caspase家族在線粒體途徑中發揮了極為重要的調控作用。Bcl-2、Bax是影響細胞凋亡的2個對立因素，Bax具有促進細胞凋亡作用，Bcl-2基因是一種重要的細胞凋亡抑制基因，其可與Bax形成異源二聚體，通過阻斷細胞色素C（Cyt-C）的釋放，抑制下游Caspase-3的激活[14]。國內外研究表明，Bcl-2與Bax表達水平的高低與凋亡調控直接相關。Caspase-3在細胞凋亡的信號轉導中具有中樞效應器作用[15]。Bcl-2、Bax與Caspase-3在細胞凋亡轉導過程中既相互聯系又相互制約，過表達Bcl-2可與Bax形成異源二聚體，抑制Bax的轉位及二聚體化，通過阻斷Cyt-C的釋放，抑制下游Caspase-3的激活，從而抑制細胞凋亡的發生。Caspase-3表達增強反過來抑制Bcl-2活性，而促進細胞凋亡[16-17]。本研究采用RT-PCR和Western blotting檢測人肺癌A549細胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表達情況，結果顯示，與陰性對照組比較，單一用藥組Bcl-2 mRNA及蛋白表達均下調，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表達均上調，聯合用藥組效果更明顯，提示APS、DDP可能通過下調人肺癌A549細胞Bcl-2 mRNA和蛋白表達水平，上調BaxmRNA和蛋白表達水平，從而形成同源二聚體而發揮誘導細胞凋亡作用，同時，上調Caspase-3 mRNA和蛋白表達水平，共同誘導細胞凋亡。

綜上所述，APS、DDP可能通過下調人肺癌A549細胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表達，上調Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表達，從而達到共同誘導細胞凋亡的作用。

[1]Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008：GLOBOCAN 2008[J].Int J Cancer，2010，127（12）：2893-2917.

[2]Chen W，Zheng R，Zhang S，et al.Annual report on status of cancer in China，2010[J].Chin J Cancer Res，2014，26（1）：48-58.

[3]Goffin J，Lacchetti C，Ellis PM，et al.First-line systemic chemotherapy in the treatment of advanced non-small cell lung cancer：a systematic review[J]. J Thorac Oncol，2010，5（2）：260-274.

[4]Jin XM.The toxic effects and preventive measures of platinum drugs[J]. Mod Med Health，2010，26（21）：3294-3295.

[5]劉嘉湘.發揮中西醫優勢治療肺癌[J].中醫學報，2014，29（3）：314-315.

[6]張陽，張偉.扶正補虛法在肺癌治療中的應用探討[J].中醫學報，2014（1）：7-8.

[7]何文涓，袁志堅，何曉升.黃芪多糖的藥理作用研究進展[J].中國生化藥物雜志，2012，33（5）：692-694.

[8]柴旺，何小鵑，朱軍璇，等.黃芪多糖對B16-F10荷瘤鼠髓樣抑制細胞免疫活性的影響[J].中國中醫基礎醫學雜志，2012，18（1）：63-65.

[9]黃惠風，錢建業，謝少茹.黃芪多糖對人胃癌細胞MKN45誘導凋亡和細胞周期的影響[J].實用臨床醫藥雜志，2010，14（19）：17-20.

[10]陳瑾歆，何軍，張娟娟，等.黃芪多糖對人肝癌細胞HepG2凋亡相關基因表達的影響[J].中國老年學雜志，2014，34（1）：124-126.

[11]吳朝妍，張瑩雯，葉太生，等.NF-κB抑制介導的黃芪多糖抗人肺癌細胞效應[J].武漢大學學報：醫學版，2013，34（2）：174-177.

[12]馮濤，張保國.黃芪多糖對肝癌HepG2細胞的抑制作用及其機制[J].實用老年醫學，2010，24（6）：486-488.

[13]劉愛平，曾峰.黃芪多糖對人肺癌A549細胞增殖的作用及其機制的實驗研究[J].腫瘤藥學，2011，1（6）：499-501.

[14]Pritchard JR，Gilbert LA，Meacham CE，et al.Bcl-2 family genetic profiling reveals microenvironment-specific determinants of chemotherapeutic response[J].Cancer Res，2011，71（17）：5850-5858.

[15]Zhou J，Zhang S，Ong CN，et al.Critical role of pro-apoptotic Bcl-2 family members in andrographolide-induced apoptosis in human cancer cells[J]. Biochem Pharmacol，2006，72（2）：132-144.

[16]Kuethe F，Sigusch HH，Bornstein SR，et al.Apoptosis in patients with dilated cardiomyopathy and diabetes：a feature of diabetic cardiomyopathy[J]. Horm Metab Res，2007，39（9）：672-676.

[17]Lanave C，Santamaria M，Saccone C.Comparative genomics：the evolutionary history of the Bcl-2 family[J].Gene，2004，333：71-79.

Study on proliferation inhibition and its mechanism of astragalus polysaccharide combined with cisplatin on human lung cancer A549 cells

Li Rong1，Zhang Yunsheng2，Tan Xiaowu1
（1.Department of Respiratory Medicine，the Second Affiliated Hospital of University of South China，Hengyang，Hunan 421001，China；2.Clinical Research Institute，the Second Affiliated Hospital of University of South China，Hengyang，Hunan 421001，China）

ObjectiveTo observe the inhibitory effects of astragalus polysaccharides and cisplatin on the cell proliferation，cycle，apoptosis induction of human lung cancer A549 cells，and initially discuss its action mechanism.MethodsThe effects on cell proliferation of astragalus polysaccharides，cisplatin and their combinations was detected by MTT assay.It analyzed the impact of cell cycle and apoptosis rate by flow cytometry.The A549 human lung cancer cells Bax，Bcl-2 and Caspase-3 gene expression levels by reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）and Western blotting.ResultsAstragalus polysaccharide，cisplatin and two-drug combination on inhibition of proliferation of human lung cancer A549 cells had a time-concentration-dependent proliferation.Compared with the negative control group，the cell cycle blockage in G1 phase after astragalus polysaccharide action while the cell cycle blockage in S phase after cisplatin action and the application of two-drug combination appeared cell cycle blockage by flow cytometry both in G1and S phases（P＜0.01）.The expression of Bax，Caspase-3 mRNA and protein were upgraded in the expression of the two-drug combination group and lowered in Bcl-2 mRNA protein compared to the negativecontrolandmonotherapygroup.Thedifferencehad statisticalsignificance（P＜0.05）.ConclusionTheastragaluspolysaccharide combined with cisplatin may strengthen human lung cancer A549 cells to enhance the pro-apoptosis，whose mechanism is associated with upgrading the expression of Bax，Caspase-3 and lowering the expression of Bcl-2mRNA.

Astragalan；Cisplatin；Caspase 3；human lung cancer A549 cells；Bcl associated X protein；B cell lymphoma/leukemia-2

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.04.001

A

1009-5519（2015）04-0481-04

2014-10-29）

李蓉（1987-），女，湖南邵陽人，碩士研究生，主要從事呼吸內科工作；E-mail：919876869@qq.com。

譚小武（E-mail：tanxiaowu1970@163.com）。