生物梅里埃腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5臨床應用局限性分析

肖亞雄，朱波，沈偉，劉影

（宜賓市第一人民醫院檢驗科，四川644600）

生物梅里埃腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5臨床應用局限性分析

肖亞雄，朱波，沈偉，劉影

（宜賓市第一人民醫院檢驗科，四川644600）

目的探討生物梅里埃腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5在臨床應用中存在的缺陷，并提出補救（解決）方案。方法以《美國臨床和實驗室標準化協會（CLSI）M100-S23-表2A腸桿菌科細菌抑菌圈直徑和最低抑菌濃度解釋標準》（簡稱CLSI標準）提供的腸桿菌科細菌對應抗菌藥物拐點作為標準，對生物梅里埃藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5抗菌藥物覆蓋情況與各抗菌藥物拐點質量濃度進行對比分析。結果試劑盒ATB G（-）5不包括CLSI標準推薦的氯霉素類、磷霉素及硝基呋喃類抗菌藥物；試劑盒ATB G（-）5提供的19種抗菌藥物拐點均與CLSI標準推薦的抗菌藥物拐點不一致或不包含，從而可能導致臨床藥敏試驗報告出現假敏感或假耐藥情況。結論以現行CLSI標準作為參考標準，單獨使用試劑盒ATB G（-）5進行腸桿菌科細菌藥敏試驗將產生較大誤差，甚至錯誤，必須用其他藥敏試驗進行修正方可發出報告。

腸桿菌科；微生物敏感性試驗；生物梅里埃；局限性

腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5為法國生物梅里埃（簡稱梅里埃）公司所生產。由于該試劑盒操作簡單（公司提前將諸多試驗藥物固定在一塑料反應小孔內，進行藥敏試驗時只需將配置好的菌懸液加入藥敏試驗反應孔內、35～37℃孵育16～24 h即可，詳見試劑盒說明書）、判讀方便（根據反應孔內細菌生長抑制情況即可進行藥敏試驗結果判讀）、無需特殊儀器（判讀時可采用肉眼判讀或儀器判讀），因此，較傳統微量肉湯稀釋法或藥敏試驗紙片法更適合于臨床應用。尤其對于標本量不大的基層醫院該試劑具有很大的吸引力，但是由于試劑盒提供的反應孔內抗菌藥物質量濃度是固定的，同一種抗菌藥物包括一個低質量濃度孔（用于敏感的判讀）和一個高質量濃度孔（用于耐藥的判讀），有的僅有一個判讀敏感的質量濃度孔。因此，一旦抗菌藥物敏感、耐藥判讀拐點發生變化時則有可能導致判讀結果錯誤，對臨床用藥產生誤導。本研究以《美國臨床和實驗室標準化協會（clinical and laboratory standards institute，CLSI）M100-S23-表2A腸桿菌科細菌抑菌圈直徑和最低抑菌濃度解釋標準》[1]（簡稱CLSI標準）作為參考標準，對腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5所包含的抗菌藥物覆蓋情況、對應最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）等在臨床應用中的局限性進行分析，以期引起使用該試劑盒的同仁注意，以更好地為臨床抗菌藥物的合理應用提供正確的指導。

1 材料與方法

1.1 材料腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5（生物梅里埃公司生產）。

1.2 方法以CLSI標準（中華檢驗醫學雜志CLSI臨床檢驗標準編譯小組2013年出版）作為參考標準。對梅里埃公司生產的腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5所提供的19種抗菌藥物覆蓋范圍、試劑盒提供的19種抗菌藥物對應拐點情況與CLSI標準進行對比分析，查找差異并分析其在臨床應用中可能出現的誤差或錯誤。

2 結果

2.1 試劑盒ATB G（-）5抗菌藥物種類覆蓋情況分析試劑盒ATB G（-）5共包含19種抗菌藥物，具體為阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林、替卡西林/克拉維酸、頭孢噻吩、頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢吡肟、美羅培南、亞胺培南/西司他丁鈉（泰能）、慶大霉素、妥布霉素、阿米卡星、奈替米星、環丙沙星、復方新諾明等。上述19種抗菌藥物覆蓋了青霉素類，β-內酰胺類，β-內酰胺酶抑制劑及其復方制劑，第1、2、3、4代頭孢菌素類，碳青霉烯類，氨基糖苷類，喹諾酮類等抗菌藥物；CLSI標準對于腸桿菌科細菌藥敏試驗所選藥物除要求覆蓋上述各類抗菌藥物外，還要求包括氯霉素類、磷霉素及硝基呋喃類抗菌藥物，其余各類抗菌藥物均有至少一種代表藥物。CLSI標準還規定對于糞便分離的沙門、志賀菌需常規測試并報告氨芐西林藥敏試驗結果，對于腸道外分離的沙門菌需測試并報告氯霉素藥敏試驗結果[1]；硝基呋喃類為CLSI標準推薦的U組抗菌藥物，主要用于泌尿道分離的腸道細菌藥物敏感試驗，而試劑盒ATB G（-）5無氨芐西林、氯霉素、硝基呋喃類抗菌藥物。

2.2 試劑盒ATB G（-）5與CLSI標準推薦抗菌藥物拐點比較試劑盒ATB G（-）5提供的19種抗菌藥物拐點與現行CLSI標準拐點均存在差異，具體表現為阿莫西林被氨芐西林所取代，根據CLSI標準氨芐西林拐點：敏感小于或等于8 μg/mL、耐藥大于或等于16 μg/mL，可以根據氨芐西林藥敏試驗結果推測阿莫西林藥敏試驗結果，但是否可反推CLSI標準未明確；其余的青霉素類（替卡西林）、β-內酰胺類（哌拉西林）、β-內酰胺酶抑制劑及其復方制劑（除阿莫西林/克拉維酸外）、第1代頭孢菌素（頭孢噻吩）、第2代頭孢菌素（頭孢呋辛）、氨基糖苷類、復方新諾明等試劑盒說明書拐點僅有敏感的拐點，而無耐藥的拐點，可導致將部分中介而未達耐藥的抗菌藥物誤判為耐藥；環丙沙星、頭孢吡肟CLSI標準耐藥的拐點較試劑盒說明書高，從而會導致假耐藥的錯誤判讀；其余抗菌藥物（頭孢噻肟、頭孢他啶等）CLSI標準拐點較試劑盒說明書低，從而可導致將部分本來為中介或耐藥的抗菌藥物誤判為敏感，見表1。

3 討論

CLSI標準制訂的抗微生物藥物敏感試驗操作方法與判斷標準是目前國內臨床細菌檢驗遵循的行業標準。由于該標準的制訂需要投入大量人力、財力和物力，所以，國際上大多數國家包括中國在內均未建立自己的標準而依賴CLSI的方法和標準。常規臨床檢驗指標，如血糖、血脂、血細胞計數相對較穩定，因此，一個標準或參考值可以沿用多年。而細菌耐藥性檢測與上述檢驗指標不同，因為細菌耐藥性與臨床抗菌藥物的合理或不合理應用[2-3]及細菌本身耐藥基因[4-5]的變異等諸多因素直接相關，因此，對于細菌耐藥、敏感判讀的拐點相對上述其他臨床檢驗指標而言變異較大，故CLSI標準需每年更新，臨床微生物實驗室通常采取當年或上一年頒布的標準作為參照，其中本研究參照的CLSI標準為2013年頒布的。

表1 試劑盒ATB G（-）5與CLSI標準拐點比較

腸桿菌科細菌是臨床血液[6]、尿液[7-8]、呼吸道、膿液[9]等標本中分析率最高的細菌，其中大部分屬于致病菌或條件致病菌，因此，需要出具藥敏試驗報告以供臨床醫生用藥參考。生物梅里埃腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5將眾多抗菌藥物固定在塑料板孔上，將傳統復雜的微量肉湯稀釋法進行了簡化，且判讀簡單，因此，深受臨床微生物工作者的青睞，在國內有較高的市場占有率。但由于該產品源自法國，而我國目前普遍采用的美國CLSI標準，因此，試劑盒提供的抗菌藥物標準與我國采用的CLSI標準不一致。從抗菌藥物覆蓋范圍來看，該試劑盒提供的抗菌藥物較CLSI標準缺少氯霉素類、磷霉素及硝基呋喃類抗菌藥物，其中針對沙門菌氯霉素通常為臨床要求報告的一類抗菌藥物，磷霉素主要針對泌尿道分離的大腸埃希菌，通常對于泌尿道分離的腸桿菌科細菌要求報告一種硝基呋喃類抗菌藥物。因此，在臨床醫生提出需求時需要用其他方法，如紙片法或其他覆蓋該類抗菌藥物的試劑盒補充進行藥敏試驗。

從試劑盒說明書與CLSI標準推薦的抗菌藥物拐點質量濃度比較分析發現，試劑盒說明書提供的19種抗菌藥物中，除阿莫西林被氨芐西林取代外，其余18種抗菌藥物拐點均與CLSI標準拐點不一致，其中哌拉西林、替卡西林等12種抗菌藥物僅提供了敏感的拐點，而無耐藥的拐點，因此，在判讀時這12種抗菌藥物可能實際結果為中介而被誤判為耐藥；而頭孢吡肟和環丙沙星則因為CLSI標準耐藥拐點的增加，而導致假耐藥的錯誤判讀，從而導致臨床抗菌藥物選擇范圍變窄；而頭孢噻肟、頭孢他啶、泰能因CLSI標準拐點降低，臨床應用上可能會將實際耐藥的細菌誤判為敏感或中介，如以泰能為例，假設某臨床分離腸道細菌針對該藥物MIC值為5 μg/mL，處于試劑盒說明書提供的拐點[（4～8）μg/mL]之間，判讀結果為中介，而實際上該拐點已經超過CLSI標準耐藥拐點（4 μg/mL）的上限，實際應該判讀為耐藥才正確，因此，臨床根據試劑盒說明書提供的錯誤中介報告，大劑量使用泰能進行治療可能是無效的，這不但導致臨床應用這些假敏感/中介的抗菌藥物而增加患者費用、浪費醫療資源，更為重要的是延誤了臨床救治患者的時間而引起患者死亡，并且由于抗菌藥物的不合理應用將促進更多耐藥細菌的產生。

加強抗菌藥物的合理應用一直是國內外臨床、微生物學專家一直呼吁和關注的問題，在我國已經上升到了國家層面，近年來，國家衛生和計劃生育委員會頒布了《合理使用抗生素指南》、《抗菌藥物臨床應用管理辦法》（衛生部令第84號）等文件，可見臨床微生物藥敏試驗報告在抗菌藥物合理應用過程中具有舉足重輕的作用，因此，選擇符合標準的藥敏試驗試劑盒是保證正確報告的前提。生物梅里埃腸道細菌藥敏試驗試劑盒ATB G（-）5與新的CLSI標準存在較大差異，如果采用該試劑盒檢測結果出報告需要慎重，對于未覆蓋的抗菌藥物需要補充采用其他實驗方法，如藥敏試驗紙片法進行報告，對于抗菌藥物拐點不包含的藥敏試驗、可能出現假耐藥（假敏感）的抗菌藥物需要補充采用其他方法給予糾正，以免發出錯誤報告，誤導臨床用藥。梅里埃公司作為微生物行業的巨頭，應該根據中國的行業標準研制出新的藥敏試驗試劑盒。

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ThelimitationsanalysisofbioMerieuxenterobacteriasusceptibilitytestkitATBG（-）5inclinicalapplication

XiaoYaxiong，ZhuBo，ShenWei，LiuYing
（DepartmentofClinicalLaboratory，theFirstPeople′sHospitalofYibin，Yibin，Sichuan 644600，China）

ObjectiveTo approach the limitations of bioMerieux enterobacteria susceptibility test kit ATB G（-）5 in clinical application and to propose remedies.MethodsIn line with break points of antibacterial agents of enterobacteriaceae provided by（abbreviated as CLSI）M100-S23 as the standard，the coverage condition of antibacterial agents of bioMerieux enterobacteria susceptibility test kit ATB G（-）5 and their quality concentrations of break points were compared and analyzed.ResultsThe kit ABT G（-）5 excluded three antibacterial agents as follows：chloromycetin，fosfomycin and nitrofurans recommend by CLSI；The break points of 19 antibacterial agents in the kit ATB G（-）5 were not inconsistent or did not contain with those recommended by CLSI M100-S23，which may lead to error drug sensitivity tests，false sensitive or false drug resistance.ConclusionUnder the current CLSI reference standards，the sole application of kit ATB G（-）5 forenterobacteriaceae bacteria susceptibility test may came out larger errors or mistakes.Besides，the results must be corrected by other necessary susceptibility tests before the report is issued.

Enterobacteriaceae；Microbial sensitivity tests；BioMerieux；Limitation

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.04.005

：A

：1009-5519（2015）04-0494-03

2014-09-05）

四川省宜賓市科技局重點科技計劃項目（2012SF005）。

肖亞雄（1981-），男，四川宜賓人，碩士研究生，主管技師，主要從事臨床微生物耐藥性的研究；Email：xiaoyaxiong@163.com。