不同頻率電針對抑郁模型大鼠血清BDNF及CRH含量的影響

王敏丹，燕 平

（山西中醫學院，山西太原030024）

不同頻率電針對抑郁模型大鼠血清BDNF及CRH含量的影響

王敏丹，燕 平

（山西中醫學院，山西太原030024）

目的：研究“解郁方”的不同頻率對抑郁模型大鼠血清腦源性神經營養因子（BDNF）和促腎上腺皮質激素釋放激素（CRH）含量的影響，探討抑郁癥的機制。方法：清潔級SD雄性大鼠40只隨機分為空白對照組（A組）、模型對照組（B組）、針刺干預組（設3組，分別編號C組、D組、E組）5組，每組8只。除A組外，其他各組動物接受21 d各種不同的應激，造模的同時分別對針刺干預組進行不同頻率電針干預。21 d后測定5組血清中BDNF和CRH含量。結果：與A組比較，B、C、D、E組BDNF含量均降低，CRH含量均升高，表明造模成功；與B組比較，C、D、E組BDNF含量升高，CRH含量降低；D、E組與C組BDNF及CRH含量比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：針刺頻率2 Hz效果最好，其作用機制可能與針刺調節下丘腦-垂體-腎上腺（HPA軸）的功能有關。

抑郁癥；解郁方；針刺；腦源性神經營養因子；促腎上腺皮質激素釋放激素

抑郁癥是一種以持久的情緒低落，活動能力減退，思維與認知功能遲緩為主要臨床特征的一類心理障礙，其主要癥狀包括焦躁情緒、快感缺失、睡眠障礙、負罪感和反復自殺念頭等，是一種嚴重影響人類身心健康的精神性疾病。普通人群中抑郁癥的年發病率約為200/10萬，且發病率呈逐年上升趨勢，目前中國的抑郁癥患者已超過2 600萬［1-2］。由于抑郁癥表現多樣，病因、發病機制錯綜復雜，藥物治療是目前主要的治療方法，但藥物治療的副作用較大，療效不佳以及治療費用昂貴等限制了其臨床應用。中醫藥，尤其是針灸在治療該病種上優勢突出，特色明顯。本文在前期實驗“解郁方”（百會、神門、太沖）的基礎上，研究“解郁方”的不同頻率電針對抑郁模型大鼠血清BDNF及CRH含量的影響，進一步探討抑郁癥的機制，為臨床研究和治療抑郁癥提供依據。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級SD大鼠［合格證號SCXK-（軍）2007-004］40只，雄性，體重（220～240）g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司。

1.1.2 試劑與儀器 促腎上腺皮質激素釋放激素（CRH）ELISA試劑盒（批號10-42-513）、腦源性神經營養因子（BDNF）ELISA試劑盒（批號10-42-514），均購于美國Becton，Dickinson and Company公司。LH-202型HANS電針治療儀、毫針、離心機、酶標儀、恒溫培養箱。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與造模 40只SD大鼠隨機分為空白組（A組）、模型組（B組）、針刺干預組（設3組，分別編號C組、D組、E組）。除A組外，其他各組動物接受21 d各種不同的應激，包括束縛（3 h）、冰水游泳（4℃，5 min）、熱應激（45℃，5 min）、夾尾（3 min）、禁水（24 h）、禁食（24 h）和晝夜顛倒等，用隨機軟件每天安排一種應激，平均每種刺激使用3次［3］。同時配合單籠飼養。

1.2.2 針刺方法 A組不予任何干預措施，B組雖經抓取、固定，但不做針刺，其他處理同針刺組。針刺干預組于造模第1天開始取百會、神門、太沖穴（參照《實驗針灸學》［4］大鼠穴位定位方法取穴），各組穴位常規消毒，選用華佗牌0.25 mm×25 mm針灸針進行針刺，百會向前平刺2 mm，神門直刺1 mm，太沖斜刺1 mm。連接到LH-202型HANS電刺激儀。刺激強度以大鼠微顫為準，每次電針20 min，每日上午9時進行，共21 d。C組電針刺激頻率設置為2 Hz，D組為30 Hz，E組為100 Hz。

1.2.3 指標檢測 21 d后腹腔注入1%戊巴比妥鈉（40～50 mg/kg體重）將動物麻醉，麻醉后開腹充分暴露腹腔，腹主動脈取血，按BDNF及CRH試劑盒方法要求分離血清，采用ELISA法測定BDNF和CRH。

1.3 統計學方法

所得數據使用SPSS17.0統計軟件進行統計，計量資料用單因素方差分析。

2 結果

與A組比較，B、C、D、E組BDNF含量均降低，CRH含量均升高，表明造模成功。與B組比較，C、D、E組BDNF含量升高，CRH含量降低。D、E組與C組BDNF含量降低、CRH含量升高，差異有統計學意義（P＜0.05），表明針刺頻率2 Hz效果最好。結果見表1。

表1 各組大鼠血清BDNF、CRH含量比較 （ng/L，x±s）

3 討 論

前期實驗探討了針灸治療抑郁癥的選穴配伍，確立了最佳組方百會、神門、太沖，命名“解郁方”［5］。本實驗建立在前期實驗的基礎上，研究“解郁方”的不同頻率對抑郁癥的影響，進一步探討抑郁癥的機制，為臨床研究和治療抑郁癥提供依據。

BDNF是在腦內合成的一種蛋白質，它廣泛分布于中樞神經系統內，在中樞神經系統發育過程中，對神經元的存活、分化、生長發育起重要作用，并能防止神經元受損傷死亡、改善神經元的病理狀態、促進受損傷神經元再生及分化等生物效應，而且也是成熟的中樞及周圍神經系統的神經元維持生存及正常生理功能所必需。充足的BDNF能夠使大腦不斷重寫覆蓋痛苦的記憶，并在重寫的過程中建立信心和安全感。大腦自然分泌BDNF，能夠起到調節痛苦和恐懼的作用，BDNF缺乏會導致創傷后壓力紊亂，繼發加重抑郁癥。BDNF屬于神經營養素家族，對發育過程中神經元的存活、分化以及成年神經元的存活和功能起重要作用。近年來研究表明，神經營養因子尤其是BDNF在抑郁癥發病和治療中起著重要作用，神經營養不足可引起腦區功能受損，抗抑郁治療可以上調BDNF并翻轉這種損害［6］。

血清CRH為神經垂體及下丘腦中含有的能刺激促腎上腺皮質激素釋放的物質，在垂體門脈血液及末梢血中發現也有此類因子。其合成部位尚不太清楚。由于其不太穩定，影響了純化過程。主要作用于促垂體的促腎上腺皮質細胞受體，通過cAMP系統促進促腎上腺皮質激素的合成與釋放。其活性以下丘腦正中隆起最高。電刺激杏仁核區下丘腦結節部、乳頭部，可引起促腎上腺皮質激素釋放。各種傳入性影響主要通過改變下丘腦CRH的合成和釋放來改變腺垂體-腎上腺皮質的功能，組成下丘腦-腺垂體-腎上腺皮質軸（HPAA）。電刺激杏仁核可引起CRH釋放，而刺激海馬則抑制CRH釋放。調節CRH的興奮性遞質主要有乙酰膽堿和5-羥色胺，抑制性遞質為兒茶酚胺和γ-氨基丁酸。電針能夠使慢性應激抑郁大鼠的CRH水平明顯下降，起到抑制或治療抑郁癥的效果。

目前研究結果表明，抑郁癥的病理生理和發病機制不限于神經遞質和神經肽及其受體數量和密度異常等神經生物化學的改變［7］，同時與下丘腦-垂體-腎上腺（HPA軸）之間的功能、海馬發生結構和功能改變等有著密切的交互作用。抑郁癥的神經內分泌研究開始于20世紀80年代，研究發現抑郁癥患者HPA軸存在功能亢進。近年來對于內分泌系統疾病如皮質醇增多的研究中發現抑郁癥患病率明顯增高，進一步提示神經內分泌系統的功能改變可能同抑郁癥存在某些相關性，尤其是HPA軸功能損害［8］。HPA軸具有調節食欲、睡眠、性欲和對應激的適應等功能，這些功能障礙與抑郁癥的癥狀密切相關。臨床研究顯示約有50%的抑郁癥患者有明顯的晝夜節律改變［9］，有半數以上的抑郁癥患者呈現HPA軸功能亢進［10］。本研究顯示，抑郁癥大鼠血清BDNF含量低于正常對照組，血清CRH含量高于空白組，這說明抑郁癥大鼠的HPA軸存在明顯的功能亢進。據本研究推斷抑郁癥可能與HPA軸的失衡有關。

［1］毛慶秋，黃真.中藥治療抑郁癥的作用機制研究進展［J］.中國中藥雜志，2007，23（10）：877.

［2］姚李吉，沈洪.抗抑郁中醫方藥的實驗研究進展［J］.光明中醫，2008，23（5）：696.

［3］許晶，李曉秋.慢性應激抑郁模型的建立與評價［J］.中國行為醫學學科，2003，23（5）：14-17.

［4］李忠仁.實驗針灸學［M］.北京：中國中醫藥出版社，2003：360.

［5］喬瑞瑞，燕平，劉明菲，等.電針“百會”“神門”“太沖”穴對慢性應激抑郁模型大鼠血清ACTH、CORT的影響［J］.世界中西醫結合雜志，2014，9（2）：156-158.

［6］Chen B，Dowlatshahi D，MacQueen G M，et al.Increased hip-pocampal BDNF immunoreactivity in subjects treated with antide-pressant medication［J］.Biol Psychiatry，2001，50（4）：260-265.

［7］彭桂軍.腦源性神經營養因子與抑郁癥的研究進展［J］.國外醫學·精神病學分冊，2004，31（3）：152-154.

［8］陽瓊，李萍，關靖，等.難治性抑郁癥與HPA軸的關系研究［J］.臨床醫學工程，2013，20（7）：815-816.

［9］崔青，孫麗亞，肖紅，等.抑郁癥患者神經內分泌節律變化的對照研究［J］.中華行為醫學與腦科學雜志，2010，19（1）：33-35.

［10］Holsboer F.Prospects for antidepressant drug discovery［J］.Biol Psy-chol，2001，57（1-3）：47.

（編輯：翟春濤）

Effect of different frequency electric acupuncture on the content of BDNF and CRH in serum with depressed model rats

Wang Mindan，Yan Ping
（Shanxi college of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To research the effect of different frequency electric acupuncture on the contents of BDNF and CRH in serum with depressed model rats so as to explore the mechanism of depression.Methods：40 SD male rats were divided into blank control group（A group），model group（B group）and acupuncture intervening group（C、D、E group）with 8 rats in each group.Except A group，other groups were accepted the different stress and acupuncture intervening group were intervened by using different frequency electric acupuncture at the same time.After 21 days，the contents of BDNF and CRH in serum were measured.Results：Compared to A group，the content of BDNF were decreased and the content of CRH were increased in B、C、D、E group.Compared to B group，the content of BDNF were increased and the content of CRH were decreased in C、D、E group.The content of BDNF and CRH in C group had significant difference comparing with D、E group.Conclusion：The electric acupuncture have an effect on the depression，especially the 2 Hz.It is possible relationship with HPA axis function regulated by acupuncture.

depression；antideprssion prescription；acupuncture；BDNF；CRH

R245

A

1671-0258（2015）01-0021-03

山西省自然科技基金資助項目（2012011041-3）

王敏丹，在讀碩士，E-mail：867094585@qq.com

燕平，教授，碩士研究生導師，E-mail：yanp83@sina.com