黃芩總黃酮苷元對(duì)小鼠肝臟的保護(hù)作用

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(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)系，江西 南昌 330004)

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

黃芩總黃酮苷元對(duì)小鼠肝臟的保護(hù)作用

徐勤*，李怡光

(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)系，江西 南昌 330004)

目的探討黃芩總黃酮苷元(SBTF)對(duì)肝臟的保護(hù)作用。方法將70只小鼠隨機(jī)均分為7組(空白組、模型組、陰性對(duì)照組、聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性對(duì)照組及高、中、低劑量黃芩總苷元給藥組)，每組10只，灌胃給藥15天。高、中、低劑量給藥組分別給黃芩總苷元400、200、100 mg/kg；陽(yáng)性組給予聯(lián)苯雙酯200 mg/kg；陰性組給予2.0%泊洛沙姆水溶液；模型組和空白組均給予生理鹽水。第15天給藥6 h后除空白組外均腹腔注射0.1%四氯化碳油溶液。12 h后稱(chēng)重，取血，分離肝臟，拍照、制勻漿測(cè)定丙二醛(MDA)指標(biāo)；全血離心后取血清測(cè)定肝功能指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)。結(jié)果陽(yáng)性組與高劑量給藥組中小鼠肝臟外表光滑紅潤(rùn)，無(wú)血塊和斑點(diǎn)，但光澤差于空白組；中、低劑量給藥組紅潤(rùn)程度依次下降，并可見(jiàn)瘀斑漸次明顯；陰性組和模型組外觀蒼白，可見(jiàn)成塊淤血、瘀斑。模型組、陰性組AST、ALT、MDA指標(biāo)與空白組相比明顯升高；給藥組AST、ALT、MDA指標(biāo)按低、中、高劑量下降，與模型組相比差異有顯著性。結(jié)論黃芩總黃酮苷元對(duì)肝臟有保護(hù)作用。

黃芩總黃酮苷元； 保肝； 四氯化碳； 藥理

黃芩為唇形科植物黃芩的干燥根，性寒，味苦，具清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎之功效[1]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，黃芩尚有保肝方面的功效，但多集中在黃芩苷類(lèi)研究[2-4]。本研究將黃芩苷類(lèi)提取后充分酶解，并經(jīng)高效液相檢測(cè)，將苷類(lèi)全部轉(zhuǎn)化為苷元。并以此為藥物，觀察其對(duì)小鼠肝臟的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)采用四氯化碳腹腔注射來(lái)制作肝損傷模型[5]，并以天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate transaminase，AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase，ALT)及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)為指標(biāo)反映肝功能的實(shí)際損傷程度。以此定量描述黃芩總黃酮苷元(Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid，SBTF)的保肝作用。

1 材料與方法

1.1 儀器

S/54紫外分光光度計(jì)(上海立光精密儀器有限公司)；METTLER AE240電子天平(梅特勒托利多儀器公司)；離心機(jī)(深圳市超杰實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；P10-W實(shí)驗(yàn)室用純水機(jī)(長(zhǎng)沙源科儀實(shí)驗(yàn)器材有限公司)；KCD-1006超聲機(jī)(南昌科昌達(dá)超聲設(shè)備廠)

1.2 藥品和試劑

黃芩總苷元(為陜西商洛野生子芩經(jīng)提取、酶解后制得，高效液相檢測(cè)結(jié)果顯示黃芩苷已徹底酶解為苷元，其中黃芩素、漢黃芩素、千層紙素、去甲漢黃芩素峰面積總和占93.12%)；AST、ALT試劑盒(北京中生生物工程公司)；丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒(南京建成科技有限公司)；聯(lián)苯雙酯滴丸(購(gòu)于藥店)；水為純化水，其余輔料為藥用級(jí)別。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性昆明種小鼠70只，體重25～30 g，購(gòu)于江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心(合格證號(hào)：JZDWNO：2012-0029)。將小鼠隨機(jī)分為七組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、模型組、陰性對(duì)照組、聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性對(duì)照組以及低、中、高劑量黃芩總苷元給藥組。

1.4 給藥、造模及檢測(cè)方法

因黃芩總苷元難溶于水，故采用2.0%泊洛沙姆水溶液為分散介質(zhì)，將黃芩總苷元配成0.5%、1.0%、2.0%濃度混懸液，每日以20 mL/kg分別給低、中、高給藥組灌胃；為消除泊洛沙姆對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，每日以2.0%泊洛沙姆水溶液給陰性對(duì)照組灌胃；將聯(lián)苯雙酯滴丸于研缽中研碎，加水，超聲溶解，使成1.0%濃度水溶液，每日以20 mL/kg給陽(yáng)性對(duì)照組灌胃；空白對(duì)照組與模型組每天灌以等量生理鹽水。

于第15天灌胃6 h后，空白組按1 mL/kg腹腔注射植物油，其余各組腹腔注射0.1%四氯化碳油溶液。禁食12 h后稱(chēng)重，眼眶取血，剝離完整肝組織，用濾紙吸去肝臟表面血跡，稱(chēng)重，拍照，用生理鹽水沖洗后制成10%肝臟勻漿，吸取上清液測(cè)定MDA含量。同時(shí)血液以3 000 r/min離心10 min，取上清液按試劑盒說(shuō)明測(cè)定AST及ALT的濃度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。各組數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 形態(tài)學(xué)觀察圖

陽(yáng)性組與高劑量組中小鼠肝臟外表光滑紅潤(rùn)，無(wú)血塊和斑點(diǎn)，但光澤差于空白組；中、低劑量組紅潤(rùn)程度依次下降，并可見(jiàn)瘀斑漸次明顯；陰性組和模型組外觀蒼白，可見(jiàn)成塊淤血、瘀斑，肝損傷嚴(yán)重(如圖1)。

圖1 小鼠肝臟外觀圖 A：高劑量黃芩總苷元組；B：中劑量黃芩總苷元組；C：低劑量黃芩總苷元組；D：陰性對(duì)照組；E：空白對(duì)照組；F：模型組；G：聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性組

2.2 小鼠血清ALT、AST、MDA測(cè)定結(jié)果

小鼠的ALT、AST指標(biāo)顯示的結(jié)果與小鼠肝臟外觀結(jié)果一致，空白組及陽(yáng)性組與模型組之間差異有極顯著性，而高、中、低劑量給藥組與模型組之間差異有顯著性；小鼠MDA數(shù)據(jù)與空白組相比，模型組、陰性組MDA數(shù)據(jù)上升極顯著，而低、中、高劑量組與模型組相比差異有顯著性，且呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。詳見(jiàn)表1。

表1小鼠血清ALT、AST、MDA測(cè)定結(jié)果

組別nAST(IU/L)ALT(IU/L)MDA(nmol/mgprot)空白組1029.98±0.36b8.32±0.17b7.44±1.04b模型組10206.01±8.64305.52±17.0520.8±2.84陰性組10205.76±4.88307.45±7.3920.4±2.47聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性對(duì)照組(200mg/kg)10110.94±8.34b138.9±16.33b9.27±1.33b黃苓總黃酮苷元組 高劑量組(400mg/kg)10142.65±7.05a198.44±7.52a11.5±1.05b 中劑量組(200mg/kg)10154.33±4.81a219.36±4.37a13.2±0.81a 低劑量組(100mg/kg)10169.46±6.41a245.60±5.41a15.8±1.41a

與模型組比較，a:P<0.05,b:P<0.01

3 討 論

目前肝病已經(jīng)成為社會(huì)健康的主要問(wèn)題，目前治療肝病尚沒(méi)有特異性高的藥物，導(dǎo)致患者生活質(zhì)量顯著下降[6]。而中藥副作用小，適于長(zhǎng)期服用，所以從中藥中尋找一個(gè)有效的護(hù)肝藥成為現(xiàn)在一個(gè)焦點(diǎn)。

ALT位于肝細(xì)胞漿內(nèi)，而AST位于肝細(xì)胞漿和線粒體內(nèi)，兩者只有在肝細(xì)胞損傷后才會(huì)進(jìn)入到血液中[7]。而MDA是在肝損傷時(shí)組織缺氧缺血，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)而生成的。故根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，黃芩總黃酮苷元可以顯著抵御四氯化碳對(duì)肝臟的傷害，而起到保肝作用。

由于本研究采用的藥物為完全酶解后的苷元，排除了苷類(lèi)物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，從這點(diǎn)上提示在保肝作用上，黃芩苷類(lèi)很有可能為前藥，而真正藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是其苷元部分。其作用機(jī)制可能是通過(guò)多個(gè)酚羥基的抗氧化能力對(duì)抗自由基對(duì)肝細(xì)胞的破壞而起效[8]。但是自然界中具有抗氧化性的物質(zhì)不勝枚舉，光從這一個(gè)角度無(wú)法完全說(shuō)明黃芩總黃酮苷元對(duì)肝臟特有的保護(hù)作用，其更進(jìn)一步的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的發(fā)現(xiàn)與完善。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010:282.

[2] 寧康健，呂景芳，江景鵬，等.黃芩苷對(duì)小鼠四氯化碳肝損傷保護(hù)作用的研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2011,18(2)：120-121.

[3] 旺曉軍，馬赟，張奉學(xué).黃芩甙對(duì)ConA致肝損傷小鼠肝組織MDA含量的影響[J].世界華人消化雜志，2005，13(9)：1153-1155.

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EffectofScutellariaBaicalensisTotalFlavonoidonLiver-protection

XU Qin，LI Yiguang

(JiangxiUniversityofChineseTraditionalMedicine，Nanchang,Jiangxi330004,China)

ObjectiveTo study the hepatic protection effect of Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid (SBTF).MethodsSeventy male Kunming mice were randomly divided into seven groups:blank control group,model group,negative group,bifendate positive group and high-dose,middle-dose,low-dose group.Stomach perfusion was given for 15 days; High-dose,middle-dose,low-dose group were given SBTF 400mg/kg，200mg/kg，100mg/kg each once a day; positive group,negative group,model group and blank control group were given bifendate(200mg/kg),poloxamer solution(2.0%),normal saline separately.At the 15th day,6 hours after perfusion,all mice were intraperitoneally injected carbon tetrachloride oil resolution (0.1%) except the blank group,and 12h later,mice were weighed and taken for blood; their livers were separated,taking pictures,making homogenate to test MDA.The whole blood was centrifugalled and blood serum was to test ALT and AST and calculate liver index.ResultFor positive and high-dose group,the surface of mice’s liver was smooth and ruddy with no blood clot or spots,but a little dull compared with blank control group; middle-dose and low-dose group had less ruddy sequence with more obvious blood spots; negative and model group were pale,with block of clots and spots.AST,ALT,MDA of negative and model group were apparently higher than blank control group; decreases in the sequent low-dose,middle-dose,high-dose group,but not so evident as positive group.ConclusionSBTF has a hepatoprotection effect,positively related to its dose.

Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid; hepatoprotection; carbon tetrachloride; pharmacology

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2015.01.009

2014-04-14；

2014-11-20

*通訊作者，E-mail：xjh6262@sina.com.

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(此文編輯：蔣湘蓮)