關于某豬場HCV和PRRSV雙重感染的診治報告

代振江，劉 釗，曾智勇，湯德元，梁海英，王偉丞

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

關于某豬場HCV和PRRSV雙重感染的診治報告

代振江，劉 釗，曾智勇*，湯德元，梁海英，王偉丞

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

2014年12月，貴州安順某豬場，現有存欄育肥豬300余頭，豬群已免疫豬瘟（HC）、口蹄疫和藍耳病（PRPS）疫苗，其中藍耳病疫苗已接種90 d。12月上旬，約140日齡的育肥豬相繼發病，臨床癥狀主要表現為耳朵發紺，食欲不振、精神委頓、腹瀉，高熱1周左右。對病死豬進行了剖檢，其中1頭經產病死母豬解剖見肺臟嚴重出血及大量化膿性病灶，呈綠色，且散發腐尸臭味，單側腎腫大，內有積水（形似囊腫）；1頭發病的育肥豬解剖可見腎臟存在大量點狀出血（似雀斑腎），肺臟散見陳舊性出血斑，且間質性肺炎明顯，淋巴結腫大出血呈黑色，脾臟大范圍梗死。根據上述情況，初步判斷豬群存在HCV和/或PRRSV感染。為了進一步確診，分別進行了組織病料的實驗室核酸檢測，其結果顯示該豬場發病豬群存在HCV和PRRSV的雙重感染，現將檢測過程報道如下。

1??材料

1.1?病料

采自1頭病死母豬和1頭發病育肥豬的組織病料（肝、腎、肺、淋巴結和脾臟等臟器）。

1.2?主要試劑

TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0、PrimeScript One Step PT-PCR Kit VER.2.0、DL2000皆購自大連寶生物公司；其他化學試劑均為國產分析純。

2??方法

2.1?病料的處理及核酸的提取

分別取適量剖檢病豬的肝、腎、肺臟、淋巴結和脾臟進行碾磨勻漿，反復凍融3次后，12 000 r/min離心10 min，取上清，用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0試劑盒進行核酸的提取。

2.2?病原核酸檢測

分別用HCV和PRRSV的特異性引物，以提取的核酸為模板，參照一步法RT-PCR試劑盒說明書，對HCV、PRRSV進行核酸檢測，其反應總體系為50μL：2×1 StepBuffer 25μL，模板7.0μL，上下游引物各1.0μL，PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μL，RNase Free H2O 14μL；反應程序為：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35個循環；72 ℃ 10 min。擴增產物經1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

3??結果

病原核酸檢測結果表明該豬場送檢的發病豬存在HCV、PRRSV的雙重感染（圖1）。

4??結果分析討論

通過實驗室診斷可知，該豬場存在豬瘟和藍耳病的雙重感染，盡管該豬場已免疫豬瘟、藍耳病和口蹄疫，但是豬群免疫后未及時地做抗體檢測以確定免疫是否有效，從臨床發病情況及病原檢測結果可知，該豬場存在豬瘟、藍耳病免疫失敗現象。由于豬瘟、藍耳病免疫失敗，使豬群處于無保護狀態，又加之入冬后晝夜溫差變化較大，豬場飼養管理不當等應激因素，致使抵抗力下降，故而發病。PRRS是一種公認的免疫抑制性疫病，機體感染病毒后可導致免疫力嚴重下降，從而繼發其他病原體的多重或混合感染，進而導致臨床癥狀復雜化和損失程度嚴重化[1]。豬瘟的流行形式已從頻發的大流行轉變為多地區散發性流行，大多表現為非典型的溫和性流行，其臨床癥狀顯著減輕，死亡率低或呈亞臨床感染，母豬發生繁殖障礙等，導致其長期帶毒、散毒，使得豬瘟病毒在豬場廣泛存在，常因各類應激誘發豬瘟疫情，臨床上多與PRRSV、PCV2、副豬嗜血桿菌以及附紅細胞體等多重或混合感染[2-5]。鑒于此，豬場在進行免疫之后應進行相關抗體檢測，這樣才能掌握豬群疫苗免疫的效果，以確定疫苗免疫是否有效，對抗體水平不達標的要認真分析免疫失敗的原因并及時補免。

圖1 檢測結果

此外，當前豬病多是由于幾種病原體協同作用而造成的，混合感染已成為豬場發病的主要形式，根據病毒的生物學特性和豬病的流行特點，當前對于藍耳病、豬瘟及圓環病毒感染等病毒性疫病的防控，免疫接種只是一個重要手段，更重要的是要落實綜合性防控措施[6]。有資料表明，帶毒仔豬無論是吃初乳，還是免疫接種疫苗，均不能阻止因HCV感染而引起的死亡。所以對發病豬群立即進行徹底的清潔和消毒，對發病豬進行嚴格的隔離觀察或治療，無治療價值的建議直接無害化處理。病癥較輕的豬只可隔離后對癥治療。在豬病毒性疫病的綜合防控中，養殖環境是基礎，病原診斷和抗體監測是保障，疫苗免疫是手段，加強飼養管理是重點，隔離治療僅是補充。

[1] 王慧， 宋宏曉， 師麗剛，等. 豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒混合感染的檢測分析[J].中國畜牧獸醫，2012，39（9）：173-177.

[2] 蘇桂花， 張華， 劉霜桂，等.我國豬瘟流行現狀、原因及防制對策[J]. 中國畜牧獸醫， 2007，34（12）：108-110.

[3] 王鎮，丁明孝.豬瘟病毒致病機制及防治的研究進展[J].畜牧獸醫學報，1998(5)：66-71.

[4] 劉志杰，曾智勇，湯德元，等.豬繁殖障礙病毒性疫病六重PCR檢測方法的建立及應用[J].畜牧獸醫學報.2012(9)：1429-1436.

[5] 覃紹敏，梁安莉，王仰杰，等.豬流感病毒與繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、圓環病毒、偽狂犬病病毒、副豬嗜血桿菌混合感染的情況調查[J].中國畜牧獸醫，2008，35（3）：77-80.

[6] 曾智勇.豬病毒性疫病病原及綜合防控[J].飼料與畜牧：規模養豬， 2014 (8)：1.

2015-01-05）

省校合作計劃項目， 黔科合LH字[2014]7670號

代振江（1991-），男，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學。

*通訊作者：曾智勇（1978-），男，教授，博士，碩士生導師，從事動物傳染病病原分子生物學研究。