濟寧市售淡水魚中喹諾酮類抗生素殘留及其健康風險評價

摘要[目的]了解濟寧市區市售淡水養殖魚的抗生素殘留水平，評價其對人體的健康風險。[方法]于2013年3～5月采集濟寧市區2個農貿市場和2個大型超市鯽魚、鯉魚和烏鱧3種淡水養殖魚。使用高效液相色譜法檢測其肌肉與肝臟組織中的恩諾沙星（Enrofloxacin，ENFX）、環丙沙星（Ciprofloxacin，CPFX）殘留的含量，并使用恩諾沙星的ADI對其進行健康風險評價。[結果]恩諾沙星在魚肉中的檢出率為83%，殘留范圍為0～76.6 ng/g，平均含量為18.36 ng/g。環丙沙星在魚肉中的檢出率為25%，殘留范圍為0～8.4 ng/g，平均含量為6.65 ng/g。在肝臟中，恩諾沙星的檢出率為83%，殘留范圍為0～160.1 ng/g，平均含量為34.2 ng/g。[結論]所有魚肉樣品中2種喹諾酮的含量均符合國家標準。使用恩諾沙星ADI值評價膳食安全的結果表明，恩諾沙星在魚肉中的殘留沒有健康風險。

關鍵詞濟寧；淡水魚；喹諾酮；殘留；健康風險評價

中圖分類號S821.34+7文獻標識碼

A文章編號0517-6611（2015）26-141-03

Abstract [Objective] To investigate the residues of enrofloxacin in fishes from the market in Jining City and evaluate health risk to human body. [Method] The residues of enrofloxacin and ciprofloxacin in muscle and liver of Carassius auratus， Cyprinus carpio and Ophicephalus argus from 2 free market of agricultural products and 2 supermarket in Jining City during March—May， 2013 were determined by HPLC， ADI was used to conduct health risk assessment. [Result] Enrofloxacin were detected in 83% muscle samples， ranged from 0 to 76.6 ng/g with average content 18.36 ng/g and in 83% in liver samples， ranged from 0 to160.1 ng/g. Ciprofloxacin were detected in 25% muscle samples， ranged from 0 to 8.4 ng/g， average content is 6.65 ng/g. [ Conclusion] The residues of enrofloxacin in fishes from the market in Jining City is eligible based on the related standard. Health risks to human body were negligible as the estimated intake was less than 1% ADI， therefore the security of dietary was high.

Key words Jining； Freshwater fish； Quinolones； Residues； Health risk assessment 水產品是人類的重要食物來源之一，隨著養殖技術的進步，我國水產養殖業得到了迅猛發展。由于藥品的使用不當而引起的水產品安全問題也越來越引起人們的重視。抗生素作為被廣泛應用在畜牧養殖業中的廣譜抗菌藥，其超標事件更是時有發生[1]。目前，國內對此類藥物的研究還主要集中于其在生物體內的藥代動力學特征、檢測分析方法的建立等方面[2]，少有對某一地區魚體中抗生素殘留的調查及風險評估的研究。濟寧市毗鄰南四湖，淡水水產品產量位居山東省第一，并且水產品是當地居民的傳統食物，消費量巨大。為了解濟寧市水產品抗生素殘留水平，筆者于2013年3～5月調查了3種常見養殖魚類體內恩諾沙星及環丙沙星2種喹諾酮類抗生素的殘留情況。

1材料與方法

1.1樣品采集

于2013年3～5月，在濟寧市區2個農貿市場（SM1，SM2）和2個大型超市（SS1、SS2）分別采集了鯽（Carassius auratus）、鯉魚（Cyprinus carpio）與烏鱧（Ophiocephalus argus Cantor）3種淡水魚類作為研究對象。采樣后3 h內運至實驗室，測定體長、體重后進行解剖，將肌肉及肝臟分開保存于-20 ℃冰箱中。

1.2儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀，配熒光檢測器和自動進樣器（美國安捷倫公司）；Agilent TCC18色譜柱（美國安捷倫公司）；旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；色譜級恩諾沙星、環丙沙星（西格瑪奧德里奇·中國）；色譜級甲醇（韓國SK集團）；甲醇、85%磷酸、三乙胺、正己烷、氫氧化鈉，均為國產分析純。

1.3試驗方法

1.3.1色譜條件。

色譜柱：Aglient TC-C18；流動相：甲醇/水（5 ml 85%的磷酸稀釋至1 000 ml，用三乙胺調節pH至3.0）配比為32∶68。柱溫：室溫。進樣量為20 μl；流速為1.0 ml/min。激發波長為280 nm；發射波長為452 nm。

1.3.2樣品預處理。

魚樣用清水清洗干凈，選取相應組織，準確稱取5.00 g于勻漿杯中，加入10 ml甲醇勻漿1 min。將勻漿液倒入50 ml離心管中，另取10 ml甲醇清洗刀頭和勻漿杯，再將清洗液并入離心管中，振蕩2 min，靜止10 min。使用離心機在轉速5 000 r/min條件下離心20 min，收集上清液，用定性濾紙過濾。將濾渣搗碎，加入10 ml甲醇，振蕩5 min后混勻，重復離心步驟。將2次上清液合并于50 ml離心管中。

向離心管中加入20 ml水飽和正己烷，振蕩5 min，靜止5 min，棄去上層液。用旋轉蒸發儀蒸至近干，注入1 ml流動相溶解，混勻。用注射器吸取部分溶解液，所得溶液經針頭濾膜過濾后進樣。

1.3.3標準曲線的繪制及檢測限。

用電子天平精確稱量恩諾沙星、環丙沙星各20.0 mg，用0.03 mol/L的氫氧化鈉預溶，配制成20 μg/ml的喹諾酮標準母液。用適量流動相稀釋標準母液為5、10、20、50、100、200、400 ng/ml標準系列溶液。搖勻，0.22 μm濾膜過濾后進樣。用對色譜峰面積與對應梯度濃度繪制標準曲線，檢測限為3倍基線噪音對應的濃度，結果見表1。

1.3.4質量控制。

將預處理后的魚肉樣品作為空白樣，精確稱量空白魚肉4份，分別加入50、100、400、1 000 ng/ml不同濃度梯度的標準液，按照樣品前處理步驟進行處理。同時，每個濃度設5個平行。

2結果與分析

2.1加標回收率加標回收率的測定結果見表2。

2.22種喹諾酮的殘留情況

從表3可以看出，2種喹諾酮藥物均被檢出。恩諾沙星在魚肉中的檢出率為83%，殘留范圍為0～76.6 ng/g，平均含量為18.36 ng/g。環丙沙星在魚肉中的檢出率僅有25%，殘留范圍為0～8.4 ng/g，平均含量為6.65 ng/g。在魚肝臟中，恩諾沙星的檢出率為83%，殘留范圍為0～160.1 ng/g，平均含量為34.2 ng/g，高于環丙沙星的10.4 ng/g。恩諾沙星在魚肉和魚肝臟中的殘留含量均高于環丙沙星（P<0.05）。

2.3不同魚體組織中喹諾酮含量

3種魚中鯽魚肌肉中恩諾沙星與環丙沙星檢出率最低，分別為50%和0。烏鱧肌肉中恩諾沙星與環丙沙星的檢出率最高，分別為100%和50%。烏鱧肌肉中恩諾沙星含量為范圍為13.2～76.6 ng/g，平均含量為33.8 ng/g，環丙沙星為0～8.4 ng/g，均高于其他2種魚類。在肝臟中，烏鱧恩諾沙星與環丙沙星的平均含量分別為76.5和19.4 ng/g，均高于其他2種魚類。

魚肉中恩諾沙星和環丙沙星的平均含量為18.36和6.65 ng/g，小于魚肝臟中2種喹諾酮的平均含量（34.2和10.4 ng/g）。魚肉中2種喹諾酮之和范圍為0～76.6 ng/g，平均值為16.9 ng/g。魚肝臟中2種喹諾酮之和范圍為0～178.6 ng/g，平均值為43 ng/g。

3討論

3.1喹諾酮種類的選擇

恩諾沙星屬于喹諾酮類抗生素，是第一個動物專用的氟喹諾酮類藥物。2002年農業部制定的無公害水產品標準[3]中曾經將廣泛應用的環丙沙星列為禁藥，并將恩諾沙星推薦為其替代用藥，使得恩諾沙星成為水產養殖中被普遍使用的一種抗生素。在一些水產品抗生素殘留檢測中，恩諾沙星也是檢出率較高的一種漁藥[4]。但是，在對喹諾酮類抗生素殘留檢測中往往有環丙沙星檢出。這可能有以下原因：①養殖過程中存在違禁使用環丙沙星的現象；②恩諾沙星在魚體內可代謝產生環丙沙星。在國內外相關規定中，也將恩諾沙星與環丙沙星共同作為恩諾沙星殘留的標志殘留物。因此，研究選取恩諾沙星與環丙沙星作為檢測靶物質。

3.2魚體中2種喹諾酮藥物的殘留情況

此次檢測結果表明，恩諾沙星在魚體內的檢出率與殘留量均大于環丙沙星。此結果與在蘇州[4]、廣州[5]等地區的調查結果類似，但與其他一些調查結果不同。環丙沙星被列為禁用漁藥以后，魚類對恩諾沙星的代謝方式就成為影響魚體內這2種喹諾酮含量的主要原因。魚類可以在體內將恩諾沙星代謝為環丙沙星，在不同的代謝階段這2種藥物的殘留比例不同，不同的采樣時間就可能導致檢測結果的不同。此外，違規使用環丙沙星也會對結果造成影響。

烏鱧體內藥物含量明顯高于其他2種魚類。據推測，可能有以下原因：①由于烏鱧經濟價值較高，養殖戶投入資金較多，可能會為了盡量規避風險，超量超時給藥，直接導致魚體內藥物殘留增高。這種經濟價值越高的魚類藥殘含量越高的現象也在其他一些調查中有所體現。②大量研究表明，水體底泥中普遍存在抗生素殘留[6-7]，高于水中的含量，其來源主要是剩餌及魚排泄物。烏鱧是典型的底棲魚類，其生活環境中抗生素濃度較水體其他區域要高，這也能是其體內藥殘高的原因。③烏鱧為肉食性魚類，其在食物鏈中的營養級較其他2種魚要高。食物鏈對污染物的富集有放大作用，也會導致其體內有較高的藥物殘留。

魚肝臟中2種藥物的含量均大于肌肉中的含量。大部分對于喹諾酮類藥物殘留的研究結果都與此類似[8]。對恩諾沙星在大菱鲆內的藥代動力學試驗表明，恩諾沙星在肝臟中的峰濃度大于肌肉中的峰濃度，推測可能是因為肝臟作為解毒器官，滲透性及血管豐富度都要高于肌肉組織所致。也有研究表明，某些藥物殘留在肌肉中的濃度大于其在肝臟中的濃度[9]。這可能主要與魚的種類有關，此外給藥方式、養殖環境等都可能對魚體內的藥物殘留量及其在組織內的分布造成影響。

3.3淡水魚中恩諾沙星殘留的健康風險評價

污染物進入人體的主要途徑是通過食物攝入，占總攝入量的90%以上[10]。此次調查中采集的魚類樣品均為可食用魚，是人們日常食用的食品，其中的藥物殘留直接威脅到人們的身體健康。農業部第235號公告[11]中規定恩諾沙星在水產品中的最高殘留限量（MRL）為：肌肉、肝中分別為100和200 ng/g，標志殘留物為恩諾沙星+環丙沙星。此次調查中樣品肌肉中恩諾沙星+環丙沙星的含量最高為76.6 ng/g，肝臟中最高為178.6 ng/g，均符合規定要求。我國農業部2001年9月3日發布的“無公害食品水產品中漁藥殘留限量”規定恩諾沙星的MRL均為50 ng/g，此次調查中SS1采樣點烏鱧肌肉中恩諾沙星含量為76.6 ng/g，沒有達標。此次調查的樣品中恩諾沙星殘留量全部符合國家規定。與一些國外標準相比，仍然有較大差距，如美國及歐盟等恩諾沙星與環丙沙星的殘留限量為30 ng/g。

依據聯合國農糧組織及世界衛生組織的評估，恩諾沙星的ADI值（每日安全攝取量）為2 μg/kg體重，標志殘留物為恩諾沙星+環丙沙星。按成人60 kg體重計算，每人每天安全攝取量為120 μg。按照國務院辦公廳以國辦發〔2014〕3號印發的《中國食物與營養發展綱要（2014～2020年）》要求，我國到2020年全年人均水產品消費量要達到18 kg。即每天每人平均消費約49.3 g。此次調查中魚肉中恩諾沙星+環丙沙星的平均含量為16.9 μg/kg，則每人每天恩諾沙星攝入量為0.833 μg，ADI貢獻值為0.7%，小于1%ADI，可認為沒有健康風險。

此次健康風險評價僅僅依賴于淡水魚類的調查，不能完全反映居民對這2種喹諾酮藥物的攝入情況。居民在其他食物的消費中也可能會攝入恩諾沙星和環丙沙星。大量研究表明，在雞蛋、牛奶、蔬菜等常用食品中也存在恩諾沙星及環丙沙星殘留。

抗生素殘留除了可能對人類健康造成威脅外，也會對微生態造成影響，增加微生物的耐藥性，從而威脅人類健康。環丙沙星作為人專用藥已經禁止在畜牧業中使用，但恩諾沙星在魚體內的代謝，使得環境中依然有低濃度環丙沙星存在。因此，除了繼續加大藥品使用管理力度，防止違法使用抗生素以外，還要積極研發抗生素替代品，真正做到食品的無公害。

4結論

（1） 濟寧市售淡水魚魚體中恩諾沙星含量高于環丙沙星含量。魚肝臟中2種喹諾酮含量均高于肌肉中含量。烏鱧體內殘留高于鯽魚和鯉魚。

（2） 所有魚肉樣品中2種喹諾酮含量均符合國家標準。SS1采樣點烏鱧肌肉中恩諾沙星含量不符合無公害水產品質量要求。

（3） 使用恩諾沙星ADI值評價膳食安全的結果表明，恩諾沙星在魚肉中的殘留沒有健康風險。

參考文獻

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