CDl51在肝門部膽管癌組織中的表達及其與腫瘤進展和預(yù)后的關(guān)系

王康磊,劉緒舜,陳　堅

(中國人民解放軍第81醫(yī)院血管外科，江蘇 南京 210002)

CDl51在肝門部膽管癌組織中的表達及其與腫瘤進展和預(yù)后的關(guān)系

王康磊,劉緒舜,陳堅

(中國人民解放軍第81醫(yī)院血管外科，江蘇 南京 210002)

[摘要]目的探討CD151在肝門部膽管癌組織中的表達及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。方法采用免疫組化S-P法檢測38例肝門部膽管癌、11例膽管炎病變組織標本中CDl51的表達，并分析其與肝門部膽管癌臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果CDl51在肝門部膽管癌組織中的表達高于膽管炎組織。肝門部膽管癌組織中CDl51的表達與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和生存狀況密切相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論CD151在肝門部膽管癌組織中存在高表達，且其表達隨疾病進展而升高，CD151的高表達也預(yù)示著肝門部膽管癌較差的預(yù)后，CD151的檢測可用于肝門部膽管癌的預(yù)后評估和治療指導(dǎo)。

[關(guān)鍵詞]CDl51；肝門部膽管癌； 臨床病理特征

跨膜4蛋白家族(transmembrane 4 superfamily, TM4SF)是近年來被廣泛研究的一個基因家族,其成員一個明顯生物學特征是可以與自身或其他膜蛋白如整合素、c-Met等酪氨酸激酶受體等結(jié)合形成四跨膜網(wǎng)絡(luò)，在細胞黏附、增殖、融合，腫瘤的生長、遷移及血管生成中起重要作用。CD151是TM4SF重要成員之一，與腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),是TM4SF中惟一的癌基因[1-2],其表達產(chǎn)物在多種腫瘤細胞表面均有較高水平的表達[3]。目前CD151已在前列腺癌[4]、結(jié)腸癌[5]、肺癌[6]、胰腺癌[7]、腎透明細胞癌[8]等組織中發(fā)現(xiàn)其高表達與腫瘤的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)相關(guān)。肝門部膽管癌是指原發(fā)于膽囊管開口以上，肝總管與左右二級膽管起始部中間，主要侵犯肝總管、 肝總管分叉部及左右肝管的膽管癌。研究[9-10]證實，近年來肝門部膽管癌的發(fā)病率明顯增加，且該病起病隱匿，發(fā)病時多已到晚期，手術(shù)根治切除率低，近年僅為18.0%～26.2%[11]，且遠期療效不佳。本研究旨在通過檢測CD151蛋白在肝門部膽管癌及膽管炎術(shù)后組織中的表達，分析其在肝門部膽管癌組織中高表達與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)合術(shù)后患者的臨床隨訪資料，對肝門部膽管癌根治手術(shù)后患者預(yù)后進行判定，從進而指導(dǎo)臨床治療，提高肝門部膽管癌患者的術(shù)后早期治療效果。

1資料與方法

1.1組織標本收集2008年7月至2010年7月中國人民解放軍第81醫(yī)院行根治性切除術(shù)的38例肝門部膽管癌患者，其中男24例，女14例。研究標本取自膽管癌的原發(fā)灶,經(jīng)質(zhì)量分數(shù)4%中性多聚甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋,3 μm厚連續(xù)切片的石蠟切片。同時選取11例膽管炎性病變組織作為對照。肝門部膽管癌均經(jīng)HE染色及免疫組化染色確診和分型。所有患者均保有完整及詳盡的隨訪資料，其術(shù)后隨訪時間為6～48個月。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療、生物、熱療、免疫療法、中醫(yī)中藥等治療。

1.2試劑鼠抗人CDl51單克隆抗體、鼠抗人к單克隆抗體(上海生工生物有限公司)；免疫組化S-P試劑盒及DAB試劑盒(珠海泉輝企業(yè)有限公司)。

1.3免疫組化S-P法檢測CDl51蛋白免疫組織化學檢測CDl51蛋白表達采用TM二步法，實驗步驟按試劑盒說明進行設(shè)計。

1.4結(jié)果判定免疫組化結(jié)果根據(jù)染色強度和陽性細胞數(shù)進行半定量分析。CD151的陽性表達主要位于細胞膜，根據(jù)細胞膜的染色強度：1分為無色，2分為淡黃色，3分為棕黃色；每張切片選5個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，按陽性細胞數(shù)占同類計數(shù)細胞的百分比將染色結(jié)果分為陰性與陽性，0分為陰性，1分陽性細胞0%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分76%～100%。染色強度與陽性細胞百分比的乘積≥3分為高表達，<2分為低表達。

1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS 17.0進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗，生存率計算用Kaplan-Meier分析，比較用logrank檢驗，檢驗水準α=0.05。

2結(jié)果

2.1CD151在肝門部膽管癌和膽管炎組織中的表達CD151蛋白在肝門部膽管癌、膽管炎組織中的高表達率分別為78.9%(30/38)、18.2%(2/11),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖1。

圖1　CD151在肝門部膽管癌(A)

2.2CDl51蛋白在肝門部膽管癌組織中的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1　CDl5在肝門部膽管癌

2.3CDl51蛋白在肝門部膽管癌組織中的表達與預(yù)后的關(guān)系30例CD151高表達患者的1、2、3 a生存率分別為63.0%、31.0%、10.8%，8例CD151低表達患者分別為83.3%、62.5%、24.5%；CD151高表達患者中位生存時間為18.1個月，CD151低表達患者為33.2個月。CD151高表達患者較CD151低表達患者生存情況差(P<0.05)。

3討論

膽管癌發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯,有轉(zhuǎn)移傾向，確診時患者多已屬于腫瘤晚期，手術(shù)切除率較低,預(yù)后較差[12-13]，膽管癌的局部復(fù)發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移是引起死亡的主要原因，膽管癌根治性切除術(shù)后患者的5 a生存率低于20%[14]，而腫瘤的預(yù)后效果取決于腫瘤本身的生物學行為，因此，加強對肝門膽管癌發(fā)生發(fā)展過程中的分子機制的研究是提高膽管癌術(shù)后生存率的關(guān)鍵。

本研究證實CD151蛋白在肝門部膽管癌組織及膽管炎術(shù)后組織中都有表達，在免疫組化法檢測的49例標本中，其CD151的表達主要在組織細胞膜，細胞漿、細胞核基本不表達，在肝門部膽管癌組織中基本呈高表達；在膽管炎組織中基本呈低表達或不表達，CDl51蛋白高表達與肝門部膽管癌患者的性別、年齡、腫瘤的大小無關(guān)，而與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，且腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移站數(shù)越多、TNM分期越高其CDl51蛋白高表達率越高。

CD151促進腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的機制可能與CD151與整合素結(jié)合及促進腫瘤新生血管形成有關(guān)。一方面，CD151與整合素復(fù)合物在促進細胞的黏附、信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞的移動、形態(tài)改變等方面起重要作用，CD151與整合素的關(guān)系已被大量的研究所證明，對其進行進一步研究有助于深入了解CD151與整合素復(fù)合物介導(dǎo)腫瘤細胞轉(zhuǎn)移機制[15]。通過免疫共沉淀證實與CD151緊密結(jié)合的整合素只有α3、α6,即復(fù)合體存在形式只有CD151-α3β1、α6β4、α6β1等3種形式,另一方面，相關(guān)研究表明在小型豬心肌梗死模型中CD151能促進缺血心肌的新生血管形成，且能增加心肌的灌注，提示CD151促進新生血管生成且在血運重建中起著重要作用，是促進腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移的因素之一[16-17]。研究[18]表明CD151-α3、α6復(fù)合物是誘導(dǎo)新生血管形成及信號傳導(dǎo)途徑建立的先決條件。更有實驗[19]表明，細胞外信號蛋白激酶傳導(dǎo)途徑與CD151促進血管形成有關(guān)。腫瘤的新生血管形成后不僅可以為原發(fā)瘤提供足夠的養(yǎng)分,而且能使腫瘤細胞通過新生的血管轉(zhuǎn)入血液,進而轉(zhuǎn)移至其他器官。因此血管形成對腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中起到重要作用[20]，且CD151與整合素的結(jié)合是促進腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移的重要因素。

本研究臨床隨訪38例肝門部膽管癌根治術(shù)后患者，其中術(shù)后組織標本中CD151高表達30例，低表達8例，且后者更具有生存優(yōu)勢。相關(guān)研究[21]表明CD151的過表達可能與腫瘤的術(shù)后早期復(fù)發(fā)及臨床患者術(shù)后生存率低有關(guān)，本研究得出了相似結(jié)論。肝門部膽管癌根治術(shù)后患者的高轉(zhuǎn)移及高復(fù)發(fā)特性是影響預(yù)后的主要因素，深入研究其相關(guān)機制將為臨床了解肝門部膽管癌的生物學行為以及該病的臨床治療提供幫助[22]。

綜上所述，CD151在肝門部膽管癌組織中存在高表達，且其表達隨疾病進展而升高，CD151的高表達也預(yù)示著肝門部膽管癌較差的預(yù)后，CD151的檢測可用于肝門部膽管癌的預(yù)后評估和治療指導(dǎo)。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-5412.2015.05.003

[中圖分類號]R735.8；R730.23

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-5412(2015)05-0376-04

作者簡介：王康磊(1984-)，男，碩士，住院醫(yī)師，主要從事肝膽外科臨床工作。E-mail：1055392409@qq.com 李銀英(1982-),女,碩士,主要從事腫瘤藥理學研究。E-mail：361549378@qq.com

通信作者：劉緒舜(1960-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事肝膽外科基礎(chǔ)和臨床工作。E-mail:liuxushun@sina.com 張振中(1964-)，男，博士，教授，主要從事腫瘤靶向治療藥物研究。E-mail:zhangzhenzhong@zzu.edu.cnmail

(收稿日期：2015-04-12)

Expression of CDl51 in the Hliar Cholangiocarcionma

Wang Kanglei,Liu Xuyao,Chen Jian

(DepartmentofVascularSurgery,the81thHospitalofPLA,Nanjing210002,China)

[Abstract]ObjectiveTo examine the correlations of CDl51 expression with clinicopathological characteristics

and prognosis of hilar cholangicocarcinoma.MethodsImmunohistochemistry S-P method was used to detect the CD151 expressions in the 38 specimens of hilar cholangicocarcinoma and 11 specimens of benign bile duct tissues, and the correlations of CDl51 expression with clinicopathological characteristics and prognosis of hilar cholangicocarcinoma were analyzed.ResultsThe positive expression rate of CD151 in the hilar cholangicocarcinoma was higher than that in the benign bile duct tissues. The expression of CD151 was related with lymph node metastasis, TNM stage and prognosis of hilar cholangicocarcinoma (P<0.05).ConclusionHigh expression of CD151 is observed in the hilar cholangicocarcinoma, and detection of CD151 may be the factor to predict tumor progression and prognosis of hilar cholangicocarcinoma.

[Key words]CD151; hilar cholangicocarcinoma; clinicopathological characteristics