丹銀提取物對血管性癡呆模型大鼠海馬長時程增強的影響

丹銀提取物對血管性癡呆模型大鼠海馬長時程增強的影響

張敏李永江潘婭陳粲

(貴陽醫學院生理學教研室， 貴州貴陽550004)

摘要〔〕目的探討丹銀提取物對血管性癡呆(VD)模型大鼠海馬長時程增強(LTP)的影響。方法采用改良的4-VO法建立VD模型大鼠，術后給予丹銀提取物治療，用Morris水迷宮檢測大鼠學習記憶能力，在體記錄大鼠海馬LTP。結果經丹銀提取物治療后，VD模型大鼠學習記憶能力明顯改善。LTP實驗：模型組與對照組比較，高頻刺激后峰電位(PS)幅值和興奮性突觸后電位(EPSP)斜率均明顯減小(P<0.01)，用藥組與模型組比，高頻刺激后PS幅值和EPSP斜率均增大(P<0.01)。結論丹銀提取物能改善VD大鼠學習和記憶能力，其機制可能與其促進VD模型大鼠海馬病理性突觸可塑性的恢復有關。

關鍵詞〔〕血管性癡呆；銀杏葉提取物；丹酚酸B；長時程增強

中圖分類號〔〕R743〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：貴陽市科技局資助項目(T2006-12)

第一作者：張敏(1973-)，女，副教授，碩士，碩士生導師，主要從事神經疾病研究。

血管性癡呆(VD)是指各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產生的獲得性智能損害綜合征，以記憶、認知功能缺損為主，是我國最常見的癡呆之一〔1〕，但其確切發病機制尚不明了,也缺乏特效的療法。研究發現,VD大鼠海馬CA1區神經元之間突觸數量及形態結構發生顯著變化〔2〕,而海馬齒狀回長時程增強(LTP)是突觸可塑性變化的典型表現形式之一〔3〕。中醫藥在本病的治療方面具有一定優勢，不僅能明顯改善近期臨床癥狀，而且可延緩病程進展，提高生活質量。本實驗觀察銀杏葉提取物聯合丹參提取物(丹銀提取物)對VD模型大鼠學習記憶及LTP化的影響,以探討丹銀提取物對VD病的促智機制。

1材料和方法

1.1材料健康、雄性SD大鼠60只，體重為300～350 g，由貴陽醫學院動物中心提供，使用許可證號：SYXY(黔)2002-0001。丹酚酸B(60%)和銀杏葉提取物(黃酮 ≥24%、內脂≥6%)購自西安鴻生生物技術有限公司。

1.2方法

1.2.1動物分組將60只SD大鼠隨機分成3組：VD模型組(模型組)、對照組、用藥組，每組20只，因實驗過程中有大鼠死亡，故最終對照組15只，模型組10只，用藥組14只。

1.2.2VD模型的制作采用改良Pulsinelli四血管阻斷法建立VD動物模型〔4〕。大鼠麻醉后行背側頸部正中切口，用電凝針插入翼小孔灼斷雙側椎動脈，造成永久性閉塞； 24 h后再夾閉雙側頸總動脈5 min×3次，每次間隔1 h。對照組大鼠不燒灼椎動脈及夾閉頸總動脈，其余步驟同前。

1.2.3治療造模后用藥組給予銀杏葉提取物96 mg/kg和丹酚酸B 36 mg/kg分別溶于2 ml蒸餾水中灌胃。對照組、模型組分別給予相同容量的生理鹽水灌胃。灌胃1次/d，連續4 w。

1.2.4水迷宮實驗各組大鼠于用藥后第3周開始進行Morris水迷宮實驗。實驗的第1～6天進行定向航行實驗，第7天進行空間探索實驗。

1.2.5LTP實驗刺激及記錄方法〔5〕各組大鼠于Morris水迷宮實驗完成后(實驗第4周)進行LTP實驗。使用BL-420生物機能實驗系統先給予波寬0.1 ms的單脈沖(方波)刺激，在海馬DG區記錄誘發群峰電位(PS)的產生，刺激強度逐漸增大，直到PS波幅不再增高時的刺激強度為最大刺激強度。然后用1/2最大刺激強度的單刺激連續刺激并記錄30 min，1次/min，為測試刺激，之后采用相同刺激強度的高頻刺激(HFS)，其波寬為0.1 ms，頻率100 Hz ，5個脈沖/串，串間隔0.2 s，脈沖總數100，最后用與測試刺激相同的單刺激作為檢驗刺激，持續記錄90 min。

1.3統計學方法采用SPSS11.5進行SNK檢驗。

2結果

2.1Morris 水迷宮實驗如表1所示，在第1～6天的Morris水迷宮定向航行實驗中，各組的平均逃避潛伏期均呈日漸縮短的趨勢，模型組與對照組比較，平均逃避潛伏期在實驗進行的第2～6天顯著延長(P<0.05，P<0.01)；用藥組與模型組比較，實驗的第2～6天平均逃避潛伏期均縮短(P<0.05，P<0.01)。如表2所示，在第7天的Morris水迷宮空間探索實驗中，模型組與對照組比較，第3象限活動時間明顯縮短、穿越站臺次數明顯減少(P<0.01)。用藥組與模型組比較，第3象限活動時間延長、穿越站臺次數增多(P<0.01)。

2.2海馬長時程增強實驗PS幅值變化如表3所示，對照組在HFS后PS幅值明顯增大，且表現為持續性增加，PS幅值相對值最高達194%；模型組在HFS后PS幅值增大程度較小；用藥組PS幅值在HFS后迅速且持續性增加，90 min時達到186%水平； HFS后模型組與對照組相比，PS幅值明顯減小(P<0.01)；用藥組與模型組相比，PS幅值明顯增大(P<0.01)。

表1　各組大鼠定向航行實驗每日平均逃避潛伏期 ± s,s)

與對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.05,4)P<0.01

表2　各組大鼠空間探索實驗第3象限活動時間

與對照組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.01，表3同

2.3LTP實驗EPSP斜率變化如表4所示，對照組在HFS后EPSP斜率迅速增加，最高達20.6%；模型組EPSP斜率在HFS后維持在100%左右的較低水平，到90 min時減小到100%以下水平；用藥組EPSP斜率在HFS后增加，最高時達到199%； HFS后模型組與對照組相比EPSP斜率明顯減小(P<0.01)；用藥組與模型組比，EPSP斜率明顯增大(P<0.05，P<0.01)。

表3　各組大鼠海馬齒狀回HFS后各時點

表4　各組大鼠海馬齒狀回HFS后各時點

與對照組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01

3討論

VD的臨床表現主要以記憶、認知功能缺損為主,VD大鼠海馬缺血損傷，學習記憶下降。本實驗結果顯示模型組大鼠學習記憶能力較對照組明顯降低,用藥組學習記憶能力較模型組提高,表明采用改良四血管阻斷法能成功模擬VD大鼠缺血后學習記憶能力減退。

研究表明，動物空間學習記憶能力的增強或損傷與其海馬LTP活動的提高與降低密切相關〔6,7〕，提示海馬LTP是反映學習記憶路徑形成的神經模式及神經元生理活動的一個重要指標。本實驗以HFS前PS幅值和EPSP斜率為標準(HFS前的數值為1,即100%),記錄HFS后不同時間點的相對PS幅值和EPSP斜率，并以此反映海馬齒狀回LTP的誘導和維持，PS幅值和EPSP斜率增大都反映了突觸后細胞同步活動的增強。研究表明,VD大鼠海馬突觸結構多組參數發生變化是影響海馬LTP的維持和誘導的組織學基礎,突觸可塑性依賴于不同突觸前、突觸后神經元機制和突觸周圍的膠質細胞〔8〕。

丹參具有活血化淤、通經活絡之功效，丹酚酸B是從丹參中分離出的水溶性酚酸類化合物，是丹參中重要的有效成分之一〔9〕。丹酚酸B透過血腦屏障后，具有很強的抗氧化作用，對腦缺血和缺血再灌注引起的腦損傷發揮保護作用，可縮小缺血區面積，改善腦缺血引起的學習記憶和行為學障礙〔10〕。銀杏葉提取物(Egb)主要成分為黃酮類和萜內酯化合物等，對腦組織及腦神經細胞的活性有保護作用。研究表明〔11〕，Egb可以擴張腦血管，增加腦血流量，促進血液循環，對抗腦缺血性損傷；同時可調節神經遞質含量，減少對神經細胞的損傷，并可通過促進海馬膽堿的再攝取，減少M型膽堿受體和α2腎上腺受體及遞質的丟失，從而發揮改善學習和記憶能力的功能。本實驗表明丹銀提取物可以改善VD大鼠的學習記憶，其機制可能與其易化VD大鼠海馬LTP有關。

4參考文獻

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〔2014-03-17修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)