E-cad、nm-23、ki-67在人乳腺浸潤性導管癌中的表達及意義

E-cad、nm-23、ki-67 在人乳腺浸潤性導管癌中的表達及意義

焦俊霞葉曉霞趙偉志湯代軍

(馬鞍山市中心醫院病理科，安徽馬鞍山243000)

摘要〔〕目的研究E-cad、nm-23、ki-67 在乳腺浸潤性導管癌的表達及其臨床意義。方法應用免疫組化方法，檢測癌旁相對正常乳腺組織、乳腺導管內癌、乳腺浸潤性導管癌中E-cad、nm-23、ki-67的表達情況。結果與癌旁相對正常乳腺組織比,乳腺導管內癌、浸潤性導管癌中E-cad、nm-23 的陽性表達率明顯降低，而ki-67的表達明顯增高(P<0.05)；導管內癌、浸潤性導管癌患者間：家族史、年齡、原發腫瘤大小對E-cad、nm-23、ki-67表達影響差異無統計學意義，但不同組織學分級、腋窩淋巴結轉移與否，E-cad、nm-23、ki-67的表達差異有統計學意義(P<0.05)。結論E-cad、nm-23、ki-67可能參與了乳腺導管癌的發生、發展和轉移，有利于乳腺浸潤性導管癌的預后判斷。

關鍵詞〔〕導管內癌;浸潤性導管癌;E-cad；nm-23；ki-67

中圖分類號〔〕R322.33〔文獻標識碼〕A〔

第一作者：焦俊霞(1982-)，女，碩士，主要從事病理學研究。

乳腺癌以浸潤性導管癌多見,近年來發病率逐年升高。乳腺癌轉移是導致患者死亡的主要原因，其中淋巴結轉移是預后不良的重要指標,早期預測乳腺癌淋巴結轉移趨勢,合理制訂治療方案,對提高患者生存率有重要意義。惡性腫瘤的侵襲和轉移是多因素、 多步驟的復雜過程。 本研究分析E鈣黏附素(E-cad)、nm-23、ki-67與乳腺癌臨床病理特征的關系， 并探討其在乳腺癌診治及預后判斷等方面的可能價值。

1材料和方法

1.1一般資料2008年1月至 2012年 5月我院收治乳腺癌患者腫瘤組織存檔蠟塊107例,其中乳腺導管內癌24例，乳腺浸潤性導管癌83例，另取癌旁相對正常乳腺組織20例。術前均未經放療、化療及內分泌等治療。年齡31～71歲，中位年齡51.5歲，平均年齡(45.4±4.7)歲。病理診斷按世界衛生組織(WHO)(1988)乳腺癌分類標準及Bloom-Richardson系統Nottingham改良方案分類及分級〔1〕，其中Ⅰ級32例，Ⅱ級64例， Ⅲ級11例。

1.2主要試劑 鼠抗人E-cad、nm-23、ki-67單克隆抗體及S-P免疫組化試劑盒購于福州邁新公司，二氨基苯胺(DAB)顯色試劑盒購于華美生物工程公司上海分公司。

1.3方法采用免疫組化染色方法。按說明書操作如下： 組織蠟塊3μm連續切片，脫蠟，3%過氧化氫滅活內源性過氧化物酶15min，微波爐加熱15min修復抗原，自然冷卻，滴加非免疫性羊血清以阻斷組織中的非特異性抗體，依次滴加一抗4℃過夜，加二抗(羊抗鼠IgG)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶液，37℃孵育30min，DAB顯色3～5min，蘇木精復染，脫水，透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。陽性對照為已知陽性反應的乳腺癌組織切片， 磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.4結果判定ki-67陽性表達定位于胞核，E-cad陽性表達定位于胞膜，nm-23陽性表達定位于胞質及胞膜。陽性結果的判定標準:腫瘤細胞胞質中呈棕黃色至棕褐色為陽性染色，高倍鏡下(×200)對每張切片隨機選擇6個視野，按切片中細胞顯色強度計分:0分，細胞無顯色；1分，細胞呈淺黃色(弱染色)；2分，細胞呈棕黃色(中等染色)3分，細胞呈棕褐色(強染色)。

1.5統計學方法采用SPSS13.0 軟件進行χ2檢驗及Spearman相關性分析。

2結果

2.1E-cad、nm-23、ki-67在乳腺導管內癌和浸潤性導管癌中的表達與癌旁相對正常乳腺組織比，E-cad、nm-23在乳腺導管內癌和浸潤性導管癌中的陽性表達率降低(P<0.05);ki-67在乳腺導管內癌和浸潤性導管癌中陽性表達率明顯增高(P< 0.05)，見圖1、表1。

圖1　E-cad、nm-23、ki-67在不同乳腺組織中的表達(DAB，×200)

臨床病理參數nE-cadnm-23ki-67癌旁相對正常組織2016(80)15(75)6(30)乳腺導管內癌2412(50)1)11(46)14(58)1)浸潤性導管癌8334(41)1)31(37)1)59(71)1)

與正常組織比較：1)P<0.05

2.2E-cad、nm23和ki-67表達與乳腺癌臨床病理參數的關系E-cad、nm23和ki-67陽性表達與患者的年齡、腫瘤大小無關(P>0.05)，而與淋巴結轉移、組織學分級相關(P<0.05)。E-cad、nm23蛋白陽性表達率隨組織學分級升高而降低(P<0.05);淋巴結轉移組陽性表達率顯著低于無淋巴結轉移組(P<0.05)。ki-67蛋白陽性表達率隨組織學分級升高而升高(P<0.05);淋巴結轉移組陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移組(P<0.05)，見表2。

2.3E-cad、nm23和ki-67在乳腺癌中表達的相關性經Pearson相關分析，ki-67與E-cad、nm23在乳腺癌組織中表達呈負相關(r=0.63、0.71，P<0.0 5)；E-cad、nm23在乳腺癌組織中表達無明顯相關性(r=1.62，P>0.0 5)，見表 3。

表2　 E- cad、 nm-23、 ki-67蛋白在乳腺導管癌中的表達與臨床病理參數的關系〔n(%)〕

表3　 E- cad、 nm-23、 ki-67在乳腺導管癌中表達的相關性(n)

3討論

E-cad、nm-23、ki-67參與人類多種腫瘤的惡性轉化、浸潤與轉移，如乳腺癌、前列腺癌、結腸癌、卵巢癌、胃癌和肺癌等，被認為是腫瘤轉移相關基因或轉移基因，在腫瘤中的過表達與腫瘤細胞轉移潛能的增加有關〔2〕。上皮細胞黏附分子、E-cad是一種單次跨膜糖蛋白，介導鈣依賴性上皮細胞黏附的最主要分子，在許多上皮細胞中與細胞骨架肌動蛋白連接，促進細胞間的黏附，維持細胞的極性。其功能障礙或缺失會使正常細胞與正常細胞之間的黏附缺失，影響細胞的分化和黏著，腫瘤細胞間的連接也減弱，瘤細胞易于從母體脫離，發生轉移。本研究中，在癌旁乳腺組織、乳腺導管內癌和浸潤性導管癌中，E-cad的陽性表達逐漸降低，可能在乳腺導管癌的惡變過程中發揮著重要作用。隨著乳腺癌的病理學分級逐漸升高和淋巴結轉移的發生，E-cadherin蛋白的表達明顯降低。這可能說明，E-cad表達水平降低導致細胞間的黏附作用力降低，癌細胞容易脫落， 從而發生浸潤和轉移。因此E-cad可作為判斷乳腺癌預后的一個參考指標。

癌細胞的浸潤與轉移，除與E-cad密切相關，nm23基因是近年來發現的重要轉移抑制基因，很可能對癌細胞的運動能力及轉移潛能有明顯的抑制作用，主要通過參與G蛋白調控的跨膜信息傳遞,從而對細胞的分化及癌基因的轉化起作用〔3〕。本研究表明，在癌旁乳腺組織、乳腺導管內癌和浸潤性導管癌中，nm23的陽性表達逐漸降低，可能在乳腺導管癌的惡變過程中發揮著重要作用。隨著乳腺癌的病理學分級逐漸升高和淋巴結轉移的發生，nm23蛋白的表達明顯降低，表明nm23在乳腺導管癌中的表達高低與病理學分級和淋巴結轉移能力呈負相關，與文獻報道一致〔3〕。

ki-67是一種與細胞周期相關的增殖細胞核抗原，在細胞周期G0期缺如，其他期都表達，M期達高峰。常作為腫瘤細胞增殖活性的可靠標記。而腫瘤的高增殖又與腫瘤的浸潤生長和轉移有關，因此ki-67的高表達與腫瘤患者的不良預后相關〔4〕。本研究表明，在癌旁乳腺組織、乳腺導管內癌和浸潤性導管癌中，ki-67蛋白陽性表達逐漸升高;隨著乳腺癌的病理學分級逐漸升高和淋巴結轉移的發生，ki-67蛋白的表達明顯降低，與國內外一些學者研究結果一致〔5,6〕，表明Ki-67在乳腺導管癌中的表達高低與病理學分級和淋巴結轉移能力呈正相關。

另外，本研究對E-cad、nm-23、ki-67在乳腺癌中表達的相關性進行分析顯示，經Pearson相關分析，ki-67與E-cad、nm23在乳腺癌組織中表達呈負相關。以上說明，上皮細胞黏附分子E-cad和重要轉移抑制基因nm-23與代表腫瘤細胞增殖活力的ki-67在腫瘤的發生、發展中有相互拮抗作用，從而影響腫瘤的臨床分期及淋巴結轉移狀況。

總之，本研究認為，E-cad、nm-23、ki-67表達與乳腺癌的浸潤、進展有關，可作為判斷乳腺癌惡性程度的指標。聯檢E-cad、nm-23、ki-67在乳腺癌組織中的表達可作為臨床上判斷乳腺癌的預后、 篩選高危轉移患者的有效指標，對指導臨床治療有一定作用。

4參考文獻

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2YapAS,CramptonMS,HardinJ.Makingandbreakingcontacts:thecellularbiologyofcadherinregulation〔J〕.CurrOpinCellBiol，2007;9(5):508-14.

3謝春華，楊基鵬，劉崢，等.Ki-67、VEGF、nm23在乳腺癌組織中表達的相關性及臨床意義〔J〕.中國腫瘤外科雜志，2011;3(6)：325-8.

4ErmiahE,BuhmeidaA,AbdallaF,et al.Prognosticvalueofproliferationmarkers:immunohistochemicalki-67expressionandcytometrics-phasefractionofwomenwithbreastcancerinlibya〔J〕.Cancer,2012;3(14):421-31.

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〔2013-10-02修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)