頸動脈血管重構患者核因子κB的變化及意義

頸動脈血管重構患者核因子κB的變化及意義

鄭舒展李郁1羅興林

(瀘州醫學院附屬醫院心內科，四川瀘州646000)

摘要〔〕目的探討頸動脈血管重構患者核因子(NF)-κB的變化及意義。方法對老年體檢人員血管行超聲檢測，選擇38例具有頸動脈硬化血管重構者為研究對象(頸動脈重構組)，以同齡頸動脈正常的老年人36例為對照組。常規檢測心電圖、胸片、血液生化等指標，同時用免疫組化方法檢測外周血單核細胞NF-κB活化表達率。用直線回歸分析法探討頸動脈血管重構與NF-κB活化率的相關性。結果①頸動脈重構組與對照組比較，頸動脈內徑較對照組增寬，內膜-中層厚度(IMT)及斑塊積分顯著增加。②頸動脈重構組外周血單核細胞NF-κB活化率顯著高于對照組(P<0.05)。③頸動脈重構組NF-κB水平與頸動脈IMT、頸動脈斑塊積分呈顯著正相關。結論頸動脈重構與NF-κB活化率密切相關，NF-κB可能參與了頸動脈重構及粥樣斑塊形成的過程。

關鍵詞〔〕血管重構；核因子-κB

中圖分類號〔〕R543.5〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：四川省應用基礎研究項目(04JYOL9-019-2)

通訊作者：羅興林(1950-)，男，教授，碩士生導師，主要從事老年心血管疾病研究。

1綿陽市中心醫院心內科

第一作者：鄭舒展(1982-)，女，碩士，主治醫師，主要從事老年心血管疾病研究。

Change and clinical significance of nuclear factor-κB in elderly hypertensive patients with carotid aterial remodeling

ZHENG Shu-Zhan,LI Yu,LUO Xing-Lin.

Department of Cardiology,Affiliated Hospital of Luzhou Medical College,Luzhou 646000,Sichuan,China

Abstract【】ObjectiveTo investigate the correlation of nuclear factor-κB(NF-κB) with carotid artery remodeling in elderly patients.Methods38 elderly patients with carotid artery remodeling (aged 66.32±6.10 years old) were chose into experimental group and 36 healthy persons into control group (aged 64.36±6.23 years old).Circumference blood serum of all persons were gathered in early moring and serum peripheral blood mononuclear cells were extracted,then NF-κB activation expression rate was detected by immunohistochemical method.The common carotid artery (CCA) intima-media thickness (IMT),carotid diameter,carotid artery blood flow velocity and carotid artery plaque formation were detected by vascular ultrasound.Carotid plaque score was obtained according to the crouse method.ResultsCompared to the control group,the diameter of CCA in experiment group was increased,the systolic and diastolic peak velocity were decreased,the IMT was thicker,and the plaque score was higher (P<0.05).The NF-κB level of experiment group was significantly higher than that of control group (P<0.05).There was a positive correlation among NF-κB activation expression rate and vascular remodeling indicators,which including carotid artery diameter,IMT and vascular wall/cavity ratio,carotid artery plaque score,carotid artery resistance index and pulsatility index.ConclusionsNF-κB might involved in the process of carotid atery remodeling in elderly patient.

【Key words】Carotid artery remodeling; Nuclear factor-κB

研究證實炎癥參與了動脈硬化血管重構的發生發展。核因子(NF)-κB是一種廣泛存在于真核細胞內的非常重要的炎癥、免疫調控因子，是調節血管平滑肌細胞存活和增殖的轉錄因子，參與血管炎癥反應〔1〕，但對血管重構影響的報告較少，本研究通過檢測頸動脈重構病人外周血單核細胞NF-κB的表達，探討NF-κB與頸動脈血管重構的相關性。

1資料與方法

1.1 研究對象頸動脈重構組：近年我院對部分老年體檢人員進行了頸部血管超聲檢測，選取2011年9月至2012年9月具有頸動脈重構的患者38例〔平均年齡(66.32±6.10)歲〕為研究對象，其中高血壓16例，排除急性冠脈綜合征、高脂血癥、糖尿病、腦卒中、惡性腫瘤、肝腎功能不全、心力衰竭及肺部感染的患者。對照組：選取同期在我院行體檢的36例老年人，經常規體格檢查、有關實驗室和超聲心動圖檢查未發現心、肺、肝、腎等疾患，血管超聲檢測，無明顯動脈硬化征象者作為對照組，年齡60～72歲〔平均(64.36±6.23)歲〕，其中高血壓14例。

1.2實驗方法

1.2.1一般情況記錄兩組對象年齡、性別、身高、體重及吸煙史，測量入選病人的血壓、身高、體重，計算體重指數(BMI)，BMI≥25 kg/m2者為肥胖。

1.2.2NF-κB p65蛋白表達檢測于清晨采集兩組空腹外周血2 ml,采用FicoⅡ密度梯度離心法提取單核細胞，制作單核細胞涂片放入-40℃冰箱待用。兔抗人NF-κB-p65(V248)抗體購自ABZOOM公司，操作按免疫細胞化學染色試劑盒說明書進行。結果判定：顯微鏡下細胞質和細胞核均出現棕黃色顆粒為NF-κB p65亞單位陽性表達。相差顯微鏡下計數同一張蓋玻片，計算500個細胞中黃染陽性細胞數所占百分比。

1.2.3頸動脈超聲檢測采用Philips iE33、L11-3 超聲診斷儀，探頭頻率2.5~5.0 MHz。檢查前囑患者休息5～10 min，取平臥位，充分暴露頸部。在檢查時，首先自頸動脈起始處作縱向掃查顯示頸動脈，然后沿血管走行做橫切掃查，觀察動脈內膜有無增厚、斑塊部位、大小和回聲特點，所有指標均測量左右兩側，取平均值。①測量頸總動脈內膜-中層厚度(IMT)：選取頸總動脈遠端距分叉處1 cm處的圖像，連續測量10 mm,取平均值得到頸動脈IMT，測量時注意避開粥樣斑塊。正常的頸動脈管壁呈典型的“雙線征”，即兩條平行的強回聲帶被一低回聲或無回聲帶所分離，兩線間的距離即為IMT。②測量頸動脈粥樣斑塊：采用Crouse積分法，將同側頸動脈各個孤立性動脈粥樣硬化斑塊的最大厚度相加，得到該側頸動脈斑塊積分(CPS)，將雙側頸動脈斑塊積分相加為其斑塊總積分。③測量動脈管徑：血管內徑即測量從內膜內表面至對側內膜內表面的距離，以心臟收縮期的血管徑為準。頸總動脈(CCA)內徑于CCA分叉前2 cm處測量。 ④ 血流參數測量：流速曲線顯示后，連續觀察20~30個周期，調整最佳取樣門大小，顯示最清晰連續流速曲線后，凍結圖像并測量頸總動脈阻力指數(RI)、搏動指數(PI)、頸內動脈與頸總動脈收縮期峰值流速之比(Vica/Vcca)。

1.3統計學方法采用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗及方差分析。相關性分析作直線回歸分析。

2結果

2.1頸動脈重構組與對照組一般資料比較 兩組年齡、性別、BMI、血壓、空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白(Apo)A水平無顯著差異(P>0.05)，見表1。

表1　兩組人群基本特征分布 ± s)

2.2頸動脈重構組與對照組頸動脈超聲檢測結果頸動脈重構組與對照組比較，頸總動脈內徑(Dd)較對照組增寬，血流收縮、期峰值流速(SPV)、舒張期峰值流速(EDV)減慢，血管RI增大。頸動脈IMT及斑塊積分顯著增加(P<0.05)。見表2。

2.3不同組別血單核細胞NF-κB活化率比較頸動脈重構組外周血單核細胞NF-κB活化率(23.51±5.16)%顯著高于對照組(15.21±4.68)%(P<0.05)，見圖1。

2.4頸動脈重構組血清單核細胞NF-κB活化率與頸動脈參數的相關性頸動脈重構組患者Dd(r=0.580)、IMT(r=0.601)、血管壁/腔比值(r=0.615)、CPS(r=0.695)與血清單核細胞與對照組比較：1)P<0.05NF-κB活化率均呈顯著正相關(均P<0.01)。

表2　兩組患者頸總動脈結構與功能指標比較 ± s)

對照組

頸動脈重構組

3討論

血管重構是指血管為適應體內外環境的變化而發生的形態結構和功能的動態反應過程，主要表現為大中動脈IMT的增厚和粥樣硬化斑塊的形成。頸動脈是粥樣硬化的早期好發部位，其位置表淺，易于探查，對早期診斷動脈粥樣硬化，防治心血管事件具有重要的臨床意義。本研究顯示頸動脈重構組患者符合動脈硬化血管重構的病理改變〔1〕。

研究證明，動脈硬化病變常存在炎癥反應，而這種炎癥反應會促進血管重構〔2〕。NF-κB是一種非常重要的調節細胞存活和增殖的轉錄因子，大多數由p50和p65組成同源或異源性二聚體，存在于血管平滑肌細胞、單核細胞以及內皮細胞中〔3〕。一般情況下，NF-κB的p65亞基與κB抑制蛋白(IKB)單體結合形成的三聚體復合物以失活狀態存在，不具有調節基因轉錄的能力〔4〕。當細胞受到上游刺激因子(腫瘤壞死因子、白細胞介素-1、干擾素等)的作用時， IKB分子磷酸化，NF-κB與IκB三聚體解離釋放NF-κB激活NF-κB信號途徑。NF-κB移位至細胞核內，與核內靶基因結合，啟動相關基因的轉錄。NF-κB活化后可通過多種途徑影響機體免疫應答、炎癥反應、細胞生長和凋亡等。目前許多實驗已證實NF-κB的活化參與了動脈粥樣硬化過程〔5〕。首先，在動脈粥樣硬化組織內的巨噬細胞、內皮細胞和平滑肌細胞存在明顯的NF-κB激活,且可見許多由NF-κB調控的基因表達活性增強?；罨腘F-κB可通過調控例如血管細胞黏附分子-1、單核細胞趨化蛋白-1以及腫瘤壞死因子等基因的表達，促使炎癥因子向血管內皮的聚集，刺激血管平滑肌細胞增殖和遷移〔6〕；其次，通過抑制內皮細胞NF-κB p65基因的活化或者過表達κB抑制蛋白，可以抑制黏附分子的產生,減少巨噬細胞的聚集〔7〕，此外，調節細胞外基質降解的金屬基質蛋白酶(MMPs)基因啟動子近端調控區有特異性的NF-κB結合位點，去除NF-κB結合位點后可抑制各種刺激誘發MMP升高〔8〕；抑制NF-κB活性后MMPs表達明顯減少。因此，NF-κB參與了動脈粥樣硬化的發生和發展〔9〕。

通過排除炎癥狀態以及高血脂高血糖等致炎癥因素對NF-κB的影響，本研究顯示，NF-κB活化可能參與頸血管重構的過程，NF-κB在動脈粥樣硬化斑塊形成方面有著其不可忽視的作用，它可能是促進血管重構的高危因子。

4參考文獻

1朱平先.相關炎癥因子與動脈粥樣硬化〔J〕.中國動脈硬化雜志,2011;19(3)：123.

2Virdis A，Schiffrin EL.Vascular inflammation:a role in vascular disease in hypertension〔J〕.Curr Opin Nephrol Hypertens,2003;12(2):181-7.

3Grrimm S，Baeruerle PA.The inducible transcription factor NF-kappa B:structure-function relationship of its protein subunits〔J〕.Biochem J,1993;290(2):297-308.

4Donato AJ,Black AD,Jablonski KL,etal.Aging is associated with greater nuclear NF kappaB,reduced IkappaB alpha,and increased expression of proinflammatory cytokines in vascular endothelial cells of healthy humans 〔J〕.Aging Cell,2008;7(6):805-12.

5Pamukcu B,Lip GY,Shantsila E.The nuclear factor-kappa B pathway in atherosclerosis:a potential therapeutic target for atherothrombotic vascular disease〔J〕.Thromb Res,2011;128(2):117-23.

6Heiden KV,Cuhlmann S,Luong LA,etal.Role of nuclear factor κB in cardiovascular health and disease〔J〕.Clin Sci,2010;118(10):593-605.

7Gareus R,Kotsaki E,Xanthoulea S,etal.Endothelial cell-specific NF-κB inhibition protects mice from atherosclerosis〔J〕.Cell Metab,2008;8(5):372-83.

8Parodi FE，Mao D，Ennis TL,etal.Suppression of experimental abdominal aortic aneurysms in mice by treatment with pyrrolidine dithiocarbamate，an antioxidant inhibitor of nuclear factor-kappaB〔J〕.J Vasc Surg,2005;41(3):479-89.

9Hulsman M,van Dooren E,Hulvoet R.Mitochondrial reactive oxygen species and risk of atherosclerosis〔J〕.Curr Atheroscler Rap,2012;14(3):264-76.

〔2013-09-15修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)