鋁負荷致慢性腦損傷大鼠皮層前列腺素合酶-前列腺素-前列腺素受體信號通路變化特征

鋁負荷致慢性腦損傷大鼠皮層前列腺素合酶-前列腺素-前列腺素受體信號通路變化特征

魏玉玲王健峰陽群芳胡馨月紀超男楊洋匡勝男麥少珊楊俊卿

(重慶醫科大學藥理學教研室 重慶市生物化學與分子藥理學重點實驗室，重慶400016)

摘要〔〕目的觀察鋁負荷致慢性腦損傷大鼠皮層前列腺素(PGs)合酶-PGs-PGs受體信號通路的變化特征。方法SD雄性大鼠經灌胃給予葡萄糖酸鋁溶液(Al3+ 200 mg/kg)，1次/d，每周持續灌胃5 d，共20 w，建立慢性鋁負荷致大鼠腦損傷模型。采用Morris水迷宮、組織病理學、生化酶學指標觀察慢性鋁負荷大鼠皮層神經元損傷，采用ELISA方法檢測皮層組織PGs(PGD2、PGE2、PGF2α、6-keto-PGF1α、TXB2)含量變化，RT-PCR方法測定大鼠皮層PGs合酶(cPGES、mPGES-1、H-PGDS、PGIS、TXAS)和PGs受體(EP1、EP2、EP3、EP4、DP1、FP、TP、IP)mRNA表達，Western印跡方法檢測皮層PGs受體(EP2、EP3、DP1、FP、TP、IP)蛋白含量。結果與對照組相比，慢性鋁負荷大鼠空間學習記憶能力明顯下降，皮層神經元核固縮；皮層組織SOD活性均降低，MDA含量增加；皮層PGE2、PGD2、PGF2α、6-keto-PGF1α、TXB2 的含量均顯著升高；mPGES-1、PGIS、TXAS、EP2、DP1、IP 、EP4 mRNA表達明顯升高，EP3、FP、TP mRNA表達明顯降低，H-PGDS、cPGES、EP1 mRNA無明顯變化；皮層EP2、IP蛋白表達顯著升高，而EP3蛋白表達明顯降低，DP1、FP、TP蛋白無明顯變化。結論鋁負荷大鼠的皮層PGs合酶-PGs-PGs受體信號通路平衡失調，其可能參與了鋁負荷致大鼠皮層神經損傷機制。

關鍵詞〔〕鋁負荷；大腦皮層；前列腺素；前列腺素合酶；前列腺素受體

中圖分類號〔〕R964〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：國家自然科學基金資助項目(No.81070972)

通訊作者：楊俊卿(1969-),男,博士,教授,博士生導師,主要從事神經藥理學研究。

第一作者：魏玉玲(1990-),女,碩士,主要從事神經藥理學研究。

Change of PGs synthase-PGs-PGs receptor signal pathway in rat cerebral cortex caused by chronic aluminum overload

WEI Yu-Ling, WANG Jian-Feng，YANG Qun-Fang,etal.

Department of Pharmacology, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China

Abstract【】ObjectiveTo investigate the change of PGs synthases-PGs-PGs receptor signal pathway in cerebral cortex of chronic aluminum overload rat.MethodsThe chronic aluminum overload rats were induced via intragastric administration of aluminum gluconate(Al3+ 200 mg/kg), once a day, with 5 d a week ,for total 20 w. The functions of spatial learning and memory were evaluated by Morris water maze. Pathomorphological changes of rat cortical neurons were observed by HE staining. SOD activity and MDA content were detected by biochemistry methods. Changes of PGs levels in cortical tissues were assessed by ELISA, PGs synthase and PGs receptor mRNA expression were measured by RT-PCR, PGs receptor protein expression was measured by Western blot.ResultsCompared with those of control group, the spatial learning and memory functions were notably impaired in aluminum overload group, and the cortical neurons of aluminum overload rats appeared nuclear condensation. In the cerebral cortical tissues, the contents of PGE2, PGD2, PGF2α, 6 -keto-PGF1α, TXB2 were increased. The mRNA expressions of mPGES-1, PGIS, TXAS, EP2, DP1, IP, EP4 were increased and EP3, FP, TP were decreased. The protein expressions of EP2, IP were increased and EP3 was decreased.ConclusionsPGs synthase-PGs-PGs receptor signaling pathway disorder is presented in cortical tissue of aluminum overload rat. However, further discussion on the specific mechanisms of the imbalance of signaling pathways induced by chronic aluminum overload in SD rat cerebral cortex is needed.

【Key words】Aluminum overload；Cerebral cortex；Prostaglandin；Prostaglandin synthase；Prostaglandin receptor

過量的鋁異常沉積于腦會產生嚴重的中樞系統毒性，表現為行為和認知功能障礙、神經元損傷，甚至神經元退行性變〔1~3〕。但是其機制并不完全清楚。我們前期研究發現慢性鋁負荷可致大鼠空間學習記憶能力減退，皮層和海馬組織出現明顯的神經元損傷；同時，環氧合酶(COX)-2 mRNA和蛋白的表達均顯著增加，給予COX-2抑制劑美洛昔康能明顯改善鋁負荷大鼠行為學和形態學的病理性改變，COX-2 mRNA和蛋白表達顯著降低；同時抑制COX-2不會明顯導致5-脂氧酶途徑的明顯代償〔4〕，提示COX-2信號通路可能是干預慢性腦損傷的重要環節之一。然而，長期使用選擇性 COX-2 抑制劑只能預防而不能治愈腦損傷所引起的認知缺失，且該類藥物的長期使用會增加病人發生胃腸道潰瘍、出血、心腦血管疾病的風險〔5~7〕。前列腺素(PGs)是一類以前列烷酸為骨架的不飽和脂肪酸衍生物。細胞膜磷脂在磷脂酶A2的作用下生成花生四烯酸(AA)，AA在COX作用下生PGG2，隨后轉變成PGH2，PGH2分別在PGs合酶(PGDS、PGES、PGFS、PGIS和TXAS)的酶促反應下生成系列PGs(PGD2、PGE2、PGF2a、PGI2和TXA2)。PGs通過作用于相應的G蛋白耦聯的PGs受體(DP、EP、FP、IP和TP)而發揮不同的生理作用和病理效應。一些學者也提出，在對急、慢性腦損傷的治療中，低位干預COX-2下游PGs合酶-PGs-PGs受體信號通路的靶點會優于高位阻斷COX-2〔8〕。本實驗擬進一步觀察慢性鋁負荷大鼠大腦皮層PGs合酶-PGs-PGs受體信號通路的變化。

1材料與方法

1.1動物、主要試劑及儀器由重慶醫科大學實驗動物中心提供清潔級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠34只，體重220~250 g，動物許可證：SCXK(渝)：2010-0001。

D-葡萄糖酸鈉、六水合三氯化鋁均購于國藥化工試劑有限公司，多聚甲醛、水合氯醛均為國產分析純，蛋白定量試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒、丙二醛(MDA)檢測試劑盒均購于南京建成生物技術有限公司，ELISA試劑盒、大鼠PGs受體多抗(一抗)、辣根過氧化物酶標記山羊抗兔IgG(二抗)均購于美國Cayman公司，SDS-PAGE制膠試劑盒、WIP組織細胞裂解液、BCA蛋白定量試劑盒、5×Loading上樣緩沖液、BeyoECL plus化學發光試劑盒均購于碧云天生物技術有限公司，BIOZOL總RNA提取試劑、BioFlux逆轉錄試劑盒均購于杭州博日科技有限公司，Premix PCR混染試劑購于北京康為世紀生物科技有限公司、兔抗小鼠β-actin購于北京中杉金橋生物技術有限公司。

DMS-2 Morris水迷宮為中國醫學科學院藥物研究所研制，全自動酶標儀購于美國Spectra Max M2公司，Western印跡電泳儀購于北京六一儀器廠，定量PCR儀、凝膠成像圖像分析系統購于美國Bio-Rad公司。

1.2動物分組與建模SD大鼠34只，隨機分成慢性鋁負荷模型組和對照組各17只，模型組每天灌胃葡萄糖酸鋁溶液(Al3+200 mg/kg)，對照組同時灌胃等體積葡萄糖酸鈉溶液，每周灌胃給藥5 d，持續20 w〔9〕。給藥結束后第2天進行空間學習記憶能力檢測，之后每組各取3只進行組織病理學檢查，其余大鼠分離皮層組織儲存于-80℃。所有相關實驗均在重慶醫科大學道德與倫理委員會的指導和許可下進行。

1.3大鼠空間學習記憶能力的檢測水迷宮實驗參考Yu等〔9〕的方法并做一定改進，給藥結束第2天，用電腦全自動程控 Morris水迷宮檢測大鼠空間學習記憶能力，水溫 21℃～25℃。在學習記憶階段，第一天，將大鼠放到平臺上1 min 后讓其自由游泳至平臺;90 s內未找到平臺的大鼠,實驗者將其引至平臺。第2天起，將大鼠分別從A、B、C、D四個方位面向池壁放入水中，記錄其尋臺潛伏期，持續檢測4 d。若90 s內未找到平臺者，記錄其尋臺潛伏期為90 s。每只大鼠每天四次尋臺潛伏期的平均值作為該大鼠當天的空間學習成績。在記憶檢測階段，撤去水平臺，隨機選取方位將大鼠面壁放入水中，記錄第1次跨越水平臺的時間，作為空間記憶成績(超過90 s者記為90 s)。

1.4組織病理學檢查給藥結束第3天，每組各取3只大鼠進行在體腦組織固定，大鼠腹腔注射4%水合氯醛麻醉后仰臥位固定于鼠板上，打開胸腔并于肝臟上剪適量切口作為血液及灌注液的出口，將灌注針頭插入心尖并用止血鉗固定，快速滴入預冷的150 ml肝素化生理鹽水，然后緩慢注入200 ml 4%多聚甲醛。分離大鼠全腦組織并置于10%多聚甲醛中固定，行冠狀面切片，每片厚約 5 μm，經HE 染色，光鏡下觀察皮層神經元形態和數目的變化。

1.5皮層組織SOD活性和MDA含量測定行為學測試結束后處死各組大鼠,分離其大腦皮層,用預冷的生理鹽水制成10%勻漿,按相關試劑盒說明書檢測SOD活性及MDA含量。

1.6ELISA法測定PGs含量稱取適量皮層組織，加入9倍體積勻漿液(含10 μmol/L吲哚美辛，1 mmol/L EDTA，0.01 mol/L PBS， pH7.4)，冰上充分勻漿后離心10 min(4℃，12 000 r/min)，收集勻漿液上清液存放于-20℃。由于PGI2和TXA2會迅速代謝為6-keto-PGF1α和TXB2，因此使用其代謝產物含量代表其變化，分別按照PGE2、PGD2、PGF2α、6-keto-PGF1α、TXB2 的 ELISA含量測定說明書操作。使用全自動酶標儀于波長405~420 nm處測定各孔吸光度值(OD值)。

1.7RT-PCR檢測PGs合酶和PGs受體mRNA表達參照GenBank基因庫,依據大鼠PGs合酶(cPGES、mPGES-1、H-PGDS、TXAS、PGIS)以及PGs受體(EP1、EP2、EP3、EP4、DP1、IP、FP、TP)的mRNA序列由上海生工生物有限公司設計合成各引物。見表1。

按照按照BIOZOL總RNA提取試劑說明書提取RNA,將1 μl RNA加入5 μl上樣緩沖液，0.8%瓊脂糖凝膠電泳鑒定其完整性，紫外分光光度法進行檢測，1.8≤OD260/OD280≤2.0即可判斷RNA濃度和純度合格。按照BioRT逆轉錄擴增試劑盒說明書逆轉錄mRNA為cDNA,按照康為世紀Premix PCR試劑說明書進行cDNA的擴增，2%瓊脂糖凝膠電泳擴增產物,電泳結果經Bio-Rad凝膠成像分析系統成像與分析。

表1　各引物序列及擴增片段長度

1.8Western印跡方法檢測大鼠腦組織中PGs受體蛋白含量取約50 mg大鼠大腦皮層組織，混合適量組織裂解液并在冰上充分勻漿，低溫離心后取上清液，BCA測定蛋白濃度，以4∶1比例加入上樣緩沖液充分煮沸變性之后儲存于-20℃,每次取適量蛋白進行10%SDS-PAGE,切膠后轉移至硝酸纖維素膜后用封閉液封閉2 h，搖床上洗膜3次，每次5 min，加一抗于4℃孵育過夜，洗膜3次，每次5 min，加辣根過氧化物酶標記的二抗室溫孵育2 h，洗膜3次后，用可見-紫外光凝膠掃描分析系統對蛋白條帶進行分析。

2結果

2.1鋁負荷對大鼠空間學習記憶能力的影響與對照組相比，在學習階段第3~4天，模型組大鼠尋臺潛伏期明顯延長(P<0.05，P<0.01)，在記憶檢測階段其尋臺潛伏期也明顯延長(P<0.01)。見表2。

表2　鋁負荷對大鼠空間學習記憶能力的影響 ± s, n=17)

與對照組比較：1)P<0.05,2)P<0.01；下表同

2.2鋁負荷對大鼠皮層組織病理形態學的影響光鏡下可見對照組大鼠皮層神經元層次分明、排列整齊、核膜核仁清晰，無明顯核固縮與核深染。與對照組相比，模型組大鼠皮層神經元胞體邊緣模糊、數目減少，可見明顯的核固縮和深染。見圖1。以百分比計數核固縮神經元數目，模型組的大鼠核固縮神經元(88.70%±1.50%)比對照組(35.30%±3.80%)明顯增加(P<0.01)。

圖1　鋁過負荷對大鼠皮層組織病理形態學的影響(HE，×400)

2.3鋁負荷大鼠皮層組織SOD活性和MDA含量的變化與對照組相比，模型組皮層組織的SOD活性明顯降低(P<0.05)，MDA含量明顯增多(P<0.05)，見表3。

表3　鋁過負荷大鼠皮層組織SOD活性和

2.4鋁負荷大鼠皮層組織PGs含量的變化ELISA結果表明，對照組大鼠皮層組織PGs含量由低到高依次為6-keto-PGF1α、PGE2、PGF2α、TXB2、PGD2；模型組大鼠皮層組織PGs含量由低到高依次為6-keto-PGF1α、PGF2α、PGE2、TXB2、PGD2。與對照組比較，模型組大鼠皮層組織PGD2、PGE2、PGF2α、6-keto-PGF1α、TXB2含量均明顯增多，差異有統計學意義(P<0.05，P<0.01)，依次增加80.91%、157.28%、74.14%、111.35%、79.63%(表4)。

表4　鋁過負荷大鼠皮層組織PGD2、PGE2、PGF2α、6-keto-PGF1α和TXB2含量變化

2.5鋁負荷大鼠皮層組織PGs合酶、PGs受體mRNA的表達變化對照組大鼠皮層組織PGs合酶mRNA表達水平由低到高依次為TXAS、mPGES-1、PGIS、cPGES、H-PGDS；模型組大鼠皮層組織PGs合酶mRNA表達水平由低到高依次為TXAS、mPGES-1、PGIS、cPGES、H-PGDS。與對照組比較，模型組大鼠皮層組織H-PGDS、 mPGES-1、PGIS、TXAS mRNA表達依次升高2.50%、43.40%、42.62%、30.00%，mPGES-1、PGIS、TXAS mRNA升高具有顯著性(P<0.05)，H-PGDS mRNA的升高無顯著性；cPGES mRNA表達降低1.27%，無顯著性(表5和圖2)。

對照組大鼠皮層組織PGs受體mRNA表達水平由低到高依次為DP1、EP4、IP、EP2、FP、EP1、EP3、TP；模型組大鼠皮層組織PGs受體mRNA表達水平由低到高依次為FP、EP3、DP1、EP4、IP、EP1、TP、EP2。與對照組比較，模型組大鼠皮層組織DP1、EP1 EP2、EP4、IP mRNA表達均升高，依次升高64.52%、13.24%、68.00%、39.53%、43.48%，EP2、DP1、IP、EP4 mRNA升高均具有顯著性(P<0.05)，EP1 mRNA升高無顯著性；EP3、FP、TP mRNA表達依次降低44.16%、39.06%、15.05%，均具顯著性(P<0.05)(圖3和表6)。

2.6鋁負荷對大鼠皮層組織PGs受體蛋白表達的影響對照組大鼠大腦皮層組織PGs受體蛋白表達水平由低到高依次為EP2、EP3、IP、TP、DP1、FP；模型組大鼠大腦皮層組織PGs受體蛋白表達水平由低到高依次為EP3、EP2、FP、TP、IP、DP1。與對照組相比，模型組大鼠大腦皮層組織EP2、DP1、IP蛋白表達依次升高42.31%、32.08%、9.52%，EP2、IP升高具有顯著性(P<0.05)；EP3、FP、TP依次降低17.95%、40.00%、11.29%，EP3降低具有顯著性(P<0.05)，其余均無顯著性(圖4和表7)。

圖2　鋁過負荷大鼠大腦皮層組織PGs合酶mRNA表達

圖3　鋁過負荷大鼠皮層組織PGs受體mRNA表達

組別H-PGDS/β-actincPGES/β-actinmPGES-1/β-actinPGIS/β-actinTXAS/β-actin對照組1.60±0.121.58±0.160.53±0.060.61±0.100.50±0.06模型組組1.64±0.091.56±0.080.76±0.081)0.87±0.061)0.65±0.021)

表6　鋁過負荷組大鼠皮層組織PGs受體mRNA表達變化

表7　鋁過負荷大鼠皮層組織PGs受體蛋白表達變化 ± s, n=3)

圖4　鋁過負荷大鼠皮層組織PGs受體蛋白表達

3討論

PGDS有谷胱苷肽依賴性生血型PGD合酶(H-PGDS)和非谷胱苷肽依賴性脂質運載蛋白型PGD合酶(L-PGDS)兩種亞型，為腦脊液含量最高的痕跡蛋白之一，并隨年齡增加其腦脊液中的含量也增加〔10〕。有研究報道，H-PGDS通過阻止小膠質細胞的炎性浸潤以及降低炎性因子核因子(NF)-κB 的產量從而保護缺血再灌注損傷的小鼠神經元〔11〕。PGD2是腦內最豐富的前列腺素，其DP受體包括DP1受體和DP2受體，在缺血腦損傷及興奮毒損傷模型中，激動DP1受體對神經元起保護作用，激動DP2受體卻起損傷作用〔12〕。也有文章報道PGD2通過合成環戊烯酮的代謝物而對原代培養的神經元產生毒性作用，用DP1和DP2進行干預也不能逆轉其損傷〔13〕。我們的研究結果發現鋁負荷大鼠腦組織H-PGDS mRNA未增加，而PGD2含量卻明顯增加，可能是L-PGDS表達上調所致，DP1受體蛋白表達明顯上調，我們初步認為在慢性鋁負荷致腦損傷大鼠的皮層組織中，PGD2可能通過激動DP1而介導損傷作用，而PGDS-PGD2-DP受體信號通路的具體作用機制還有待進一步探究。

催化PGE2生成的PGES有三種亞型，胞質型PGES (cPGES)、微粒體型 PGES(mPGES)-1和mPGES-2。誘導型的mPGES-1通過與COX-2耦聯，在病理過程中發揮作用。EP受體主要包括EP1、EP2、EP3和EP4四種亞型，且在所有的器官均有不同程度的分布和表達。目前研究發現，PGE2既參與缺血性和興奮毒性腦損傷作用，也可能產生神經保護作用，并認為其原因可能與EP亞型和分布不同有關，也可能取決于采用炎癥損傷模型還是興奮毒損傷模型，如對于炎癥損傷模型PGE2為保護性PGs〔14，15〕。經EP1受體激動劑預處理的野生小鼠在紋狀體內注射NMDA后，損傷體積相比單一給予NMDA明顯增加，而EP1受體拮抗劑卻能明顯減少NMDA造成的損傷體積〔16〕。EP2和EP4受體通過參與中樞神經系統炎癥、脂質過氧化而介導神經元退變損傷〔17〕。一些研究發現EP3受體對神經元有保護作用，給予C57BL/6小鼠NMDA和EP3受體激動劑硫前列酮處理，硫前列酮能夠明顯對CA1區的椎體神經元起保護作用〔14〕。我們的研究結果提示EP2和EP4受體可能主要介導慢性鋁負荷大鼠神經元的損傷，而EP3受體則可能介導神經保護作用。

免疫組化研究顯示PGIS廣泛表達于CNS神經元和膠質細胞，特別是在皮層和海馬神經元高表達。IP受體廣泛表達于大鼠血管、海馬、皮層和紋狀體等神經元。研究發現PGI2能保護海馬神經元損傷，IP敲除的轉基因小鼠海馬神經元數目與野生小鼠之間沒有顯著差異，但是IP敲除能明顯增強全腦缺血海馬神經元損傷〔18〕。我們的結果表明在慢性鋁負荷損傷中PGIS- PGI2-IP通路可能起保護作用。

TXA2半衰期較短，經TXA2合成之后主要代謝為TXB2，缺血再灌注能夠明顯誘導腦組織產生和釋放TXA2〔19〕。另有研究顯示，在中風病人以及AD患者尸檢腦組織TXA2水平增加，TXA2可能介導了Aβ對運動神經元的毒性作用〔20〕。TXA2受體 (TP) 表達于中樞神經系統的神經元和膠質細胞。有研究表明缺血再灌注誘導大鼠腦組織PGI2/TXA2比值反饋性升高，從而降低神經元損傷〔21〕。本研究發現慢性鋁負荷大鼠腦組織中TXAS mRNA、TP受體mRNA和蛋白表達以及TXB2含量明顯增加，初步認為TXAS- TXB2-TP信號通路可能參與慢性鋁負荷對皮層組織的損傷。

有研究報道，給予大鼠注射紅藻酸建立癲癇模型，海馬中PGF2α含量明顯增加，注射FP受體拮抗劑可加重癲癇〔22，23〕。另一些研究則表明在大鼠缺血再灌注腦損傷中，給予FP受體激動劑后腦損傷明顯加重，給予FP受體拮抗劑AL-8810腦損傷能明顯減輕〔24〕。而我們研究發現鋁負荷大鼠腦組織中PGF2α含量增多，FP受體mRNA和蛋白表達卻明顯下調，考慮到模型的不同，PGFS-PGF2α-FP信號通路在慢性鋁負荷大鼠腦損傷過程的具體作用及機制待進一步研究。

4參考文獻

1Walton JR .Cognitive deterioration and associated pathology induced by chronic low-level aluminum ingestion in a translational rat model provides an explanation of Alzheimer's disease,tests for susceptibility and avenues for treatment 〔J〕.Alzheimers Dis,2012;2012:914947.

2Kramer MF,Heath MD.Aluminum in allergen-specific subcutaneous immunetherapy-a German perspective 〔J〕.Vaccine,2014;32(33):4140-8.

3蘇強,楊俊卿,唐婕,等.美洛昔康對慢性鋁過負荷致神經元退變大鼠腦內金屬離子含量的影響〔J〕.中國老年學雜志,2014;34(4):938-40.

4Yang JQ,Liu BZ,He BC,etal.Protective effects of meloxicam on aluminum overload-induced cerebral damage in mice〔J〕.Eur J Pharmacol,2006;547(1-3):52-8.

5Cote S,Carmichael PH,Verreault R,etal.Nonsteroidal anti-inflammatory drug use and the risk of cognitive impairment and Alzheimer's disease 〔J〕.Alzheimers Dement,2012;8 (3):219-26.

6Khansari PS,Coyne L.NSAIDs in the treatment and/or prevention of neurological disorders 〔J〕.Inflammopharmacology,2012;20 (3):159-67.

7Cannon CP,Cannon PJ.Physiology.COX-2 inhibitors and cardiovascular risk〔J〕.Science,2012;336(6087)：1386-7.

8Hampel H,Lista S,Khachaturian ZS，etal.Development of biomarkers to chart all Alzheimer's disease stages:the royal road to cutting the therapeutic Gordian Knot〔J〕.Alzheimers Dement,2012;8 (4):312-36.

9Yu LJ,Jiang R,Su Q,etal.Hippocampal neuronal metal ion imbalance related oxidative stress in a rat model of chronic aluminum exposure and neuroprotection of meloxicam〔J〕.Behav Brain Funct,2014;10:6.

10Chen CP,Chen RL,Preston JE.Age-related increase of prostaglandin D(2) synthase concentrationand glycation in ovine cerebrospinal fluid〔J〕.Exp Gerontol,2009;44(10):639-45.

11Liu M,Eguchi N,Yamasaki Y,etal.Protective role of hematopoietic prostaglandin D synthase in transient focal cerebral ischemia in mice 〔J〕.Neuroscience,2009;163(1):296-307.

12Liang X,Wu L,Hand T,etal.Prostaglandin D2 mediates neuronal protection via the DP1 receptor〔J〕.J Neurochem,2005;92(3):477-86.

13Liu H,Li W,Rose ME.Prostaglandin D2 toxicity in primary neurons is mediated through its bioactive cyclopentenone metabolites 〔J〕.Neurotoxicology,2013;39:35-44.

14Wu L,Wang Q,Liang X,etal.Divergent effects of prostaglandin receptor signaling on neuronal survival〔J〕.Neurosci Lett,2007;421(3):253-8.

15Liang X,Wang Q,Shi Jetal.The PGE2 EP2 receptor accelerates disease progression and inflammation in a model of amyotrophic lateral sclerosis〔J〕.Ann Neurol,2008;64(3):304-14.

16Ahmad AS,Saleem S,Ahmad M,etal.Prostaglandin EP1 receptor contributes to excitotoxicity and focal ischemic brain damage〔J〕.Toxicol Sci,2006;89(1):265-70.

17Montine TJ,Milatovic D,Gupta RC,etal.Neuronal oxidative damage from activated innate immunity is EP2 receptor-dependent〔J〕.J Neurochem,2002;83(2):463-70.

18Wei G,Kibler KK,Koehler RC,etal.Prostacyclin deletion aggravates hippocampal neuronal loss after bilateral common carotid artery occlusion in mouse 〔J〕.Neurosci,2008;156(4):1111-7.

19Kong DL,Prough DS,Whitley JM,etal.Hemorrhage and intracranial hypertension in combination increase cerebral production of thromboxane A2〔J〕.Crit Care Med,1991;19(4):532-8.

20Yagami T,Tkahara Y,Ishibashi C,etal.Amyloid β protein impairs motor function via thromboxane A2 in the rat striatum〔J〕.Neurobiol Dis,2004;16:481-9.

21楊彬，余麗娟，王佳,等.全腦缺血再灌注大鼠皮層PGI2和TXA2時辰變化特征〔J〕.中國藥理學通報,2013;29(12):1667-71.

22Baran H,Heldt R,Hertting G,etal.Increased prostaglandin formation in rat brain following systemic application of kainic acid〔J〕.Brain Res,1987;404(1-2):107-12.

23Kim HJ,Chung JI,Lee SH,etal.Involvement of endogenous prostaglandin F2α on kainic acid-induced seizure activity through FP receptor:The mechanism of proconvulsant effects of COX-2 inhibitors〔J〕.Brain Res,2008;1193:153-61.

24Saleem S,Ahmad AS,Maruyama T,etal.PGF(2alpha) FP receptor contributes to brain damage following transient focal brain ischemia〔J〕.Neurotox Res,2009;15(1):62-70.

〔2014-09-11修回〕

(編輯徐杰)