多種藥物治療后骨質疏松大鼠血清生化指標與骨組織形態計量學指標檢測

多種藥物治療后骨質疏松大鼠血清生化指標與骨組織形態計量學指標檢測

王強戰祥波1王巍2楊琦3

(吉林大學第二醫院婦產科，吉林長春130026)

摘要〔〕目的比較多種藥物干預治療后血清生化指標及骨組織形態計量學指標的改變情況。方法以去卵巢法復制骨質疏松動物模型，以丹杞顆粒、依普拉芬、結合性雌激素、 進行治療，飼養15 w后以腹主動脈放血法處死大鼠，取大鼠左、右側骨在扭轉試驗機驗機上進行扭轉實驗。結果骨質疏松動物模型組脛骨最大扭矩、最大扭轉角、最大扭轉切應力顯著低于正常對照組、丹杞顆粒、依普拉芬、結合性雌激素αD3治療組(P<0.05)，以丹杞顆粒組大鼠脛骨最大切應力、最大扭轉角大于對照組，差異顯著(P<0.05)。結論老齡骨質疏松模型組大鼠由于骨質疏松導致股骨扭轉力學特性發生改變，丹杞顆粒、依普拉芬、結合型雌激素、 干預治療后扭轉力學特性均有一定提高，丹杞顆粒效果最好。

關鍵詞〔〕骨質疏松；藥物干預；血清生化指標；骨組織形態計量學

中圖分類號〔〕R714.257〔文獻標識碼〕A〔

通訊作者：楊琦(1980-)，女，碩士，主治醫師，主要從事輔助生殖技術及產前診斷與骨質疏松的研究。

1吉化集團公司總醫院婦產科2吉林大學第一醫院泌尿外科

3吉林大學中日聯誼醫院婦產科

第一作者：王強(1970-)，女，博士，副主任醫師，主要從事女性生殖系統腫瘤及女性生殖內分泌與骨質疏松的研究。

堿性磷酸酶(ALP)是評價骨形成和骨轉換的重要指標。骨質疏松老年人發病率高，女性是本病的最大受害者，尤其是絕經后的女性，由于雌激素分泌水平降低，引起內分泌失調和紊亂，引起骨質疏松〔1〕。以往多以單一藥物治療人或動物骨質疏松模型為研究對象居多。本實驗擬對比分析中藥丹杞顆粒、西藥依普拉芬、結合型雌激素干預治療去卵巢骨質疏松動物模型的效果。

1材料與方法

1.1動物6月齡Wistar大鼠10只，12月齡Wistar大鼠50只，體重280～320 g，均購于吉林大學實驗動物部。

1.2藥品西藥依普拉芬，武漢濱湖制藥廠結合型雌激素片蘇州立達制藥有限公司，丹杞顆粒邯鄲摩羅丹藥業有限公司，昆明貝克諾頓制藥有限公司αD3。

1.3大鼠分組與骨質疏松模型復制6月齡Wistar大鼠設為正常對照一組12月齡大鼠隨機分為骨質疏松動物模型組10只，骨質疏松動物模型以丹杞顆粒治療組10只，αD3治療組10只，依普拉芬治療組10只，結合型雌激素治療組10只，所有大鼠均在籠中飼養，各組大鼠均自由攝食、飲水。對骨質疏松動物模型組大鼠和各治療組動物于0 w手術，摘除雙側卵巢；丹杞顆粒治療組、依普拉芬治療組、結合型雌激素治療組大鼠每天相應給服丹杞顆粒0.9 g/kg、依普拉芬100 mg/kg、結合型雌激素2 mg/kg。各組大鼠飼養15 w之后，以腹主動脈放血法處死各組大鼠，分別于各組大鼠心臟取血，分別取8 ml血液，之后將血液置于10 ml離心管中，以低溫離心機對血液進行離心處理，4 000 r/min離心7 min，離心溫度4℃，血液離心完成后，將血清放置在5 ml凍存管內保存待用。之后分別將各組大鼠麻醉以后，解剖大鼠，將大鼠左、右側股骨取出后，將各組大鼠股骨分別以生理鹽水浸濕紗布進行包裹后，-20℃冰箱內存放。

1.4主要儀器BI-2000醫學圖像分析儀(成都泰盟公司生產)，Poegcuts型切片機(德國OPTON公司生產)YD-51電鼓風干燥箱(上海實驗儀器四廠生產)。P-Max 3500FL型多功能熒光酶標儀(上海閃譜生物科技有限公司生產)。

參考文獻1.5血清生化指標測定按〔3〕的方法對血清中的鈣、磷、ALP、抗酒石酸酸性磷酸酶(STR-ACP)進行測試，試劑盒為南京建成生物工程研究所生產，以鄰甲酚酞絡合酮比色法測定血鈣；以孔雀綠直接顯色法進行血磷的測定，以酶標法檢測血清中ALP 和STR-ACP 。

1.6大鼠骨組織形態計量學指標測量將大鼠右側股骨放入10%甲醛緩沖液固定3 d。脫鈣-將骨組織放入10%乙二胺四乙酸(EDTA)溶液(含0.1 %DEPC水)中脫鈣45 d。脫水-組織縱斷取材后,經梯度酒精(80%乙醇24 h,95%12 h),以二甲苯反復浸泡2 次，30 min/次，之后進行對組織以樹脂進行包埋，之后取出包埋組織浸入石蠟中，更換石蠟反復浸泡3 次，30 min/次，待石蠟凝固后，使蠟塊與樣品脫離，以切片機進行切片,切片厚度為5 μm，之后將切片置于蒸餾水中,將載玻片撈出后，放置于60℃ 環境箱中過夜。 之后將切片在二甲苯溶液中脫蠟30 min反復2次;然后經100% 乙醇5 min反復2次;95%乙醇5 min,反復2次;80%乙醇5 min，之后對樣品進行水洗，之后將樣品置于蘇木素染色液中染色15 min,之后以自來水進行沖洗,之后以1%鹽酸酒精分化樣品1 min,之后對樣品進行水洗,之后以弱氨水對樣品返蘭30 s,對樣品水洗后,以伊紅對樣品染色15 min,水稍洗后,以80%乙醇稍洗,以95%乙醇反復2次，5 min/次,以,100%乙醇5 min。以二甲苯反復2次，5 min/次,以中性樹脂膠封片,隨機對每張切片選取5個視野,以BI-2000醫學圖像分析儀測量各組大鼠股骨骨小梁面積(Tb.r),骨小梁周長(Tb.Pm),骨小梁相對體積(TBV)，骨小梁面積(骨髓面積+小梁面積)，骨小梁平均厚度(MTT)。

1.7統計學方法應用SPSS17.0軟件進行t檢驗。

2結果

2.1大鼠血鈣、血磷、ALP、STR-ACP測量結果模型組、血鈣、血磷、STR-ACP、ALP與正常對照組、丹杞顆粒治療組、依普拉芬治療組、結合型雌激素治療組差異顯著(P<0.05)。丹杞顆粒治療組、依普拉芬治療組、正常對照組血鈣、血磷、STR-ACP、ALP差異顯著(P<0.05)。見表1。

2.2各組骨組織形態學計量指標比較丹杞顆粒治療組、依普拉芬治療組、結合型雌激素治療組骨小梁平均間距(Tb、SP)、MTT、Tb、Pm、Tb.r、TBV大于模型組(P<0.05)。見表2。

組別血鈣(mmol/L)血磷(mmol/L)堿性鹽酸酶(U/L)STR-ACP(U/L)ALP(U/L)正常對照組2.36±0.031)3.86±0.51)129.6±8.112.4±1.121)26.8±5.131)模型組2.51±0.034.62±0.6104.3±9.215.1±1.7136.2±6.12丹杞顆粒治療組2.374±0.021)2)3.88±0.61)2)129.8±8.712.6±1.681)2)27.1±6.211)2)依普拉芬治療組2.34±0.041)2)3.92±0.81)2)128.9±7.412.8±1.321)2)27.6±5.671)2)結合型雌激素治療組2.41±0.031)4.120.71)117.9±6.813.6±1.471)30.6±6.351)αD3治療組2.51±0.034.59±0.8105.3±9.314.3±1.6734.8±7.14

與模型組比較：1)P<0.05；與正常對照組比較：2)P<0.05；下表同

組別Tb.Ar(μm2)Bv/TV(%)MTT(μm)Tb.Pm(μm)Tb.SP(μm)正常對照組3.31±0.1732.87±1.2246.74±1.6336.79±1.76119.21±1.82模型組2.46±0.1125.81±0.9738.46±1.5832.64±1.58102.61±1.73丹杞顆粒治療組3.25±0.1431.64±1.281)46.18±0.961)35.98±1.711)118.26±1.551)依普拉芬治療組3.19±0.1229.31±0.981)44.25±1.261)34.96±1.831)109.22±1.611)結合型雌激素治療組3.08±1.328.26±1.141)42.38±1.161)33.88±1.781)108.11±1.441)αD3治療2.62±1.326.08±1.539.77±1.2633.43±1.62104.33±1.57

3討論

骨質疏松動物模型大鼠通過以中藥丹杞顆粒、西藥依普拉芬、結合型雌激素干預治療后起到了降低大鼠血清血鈣和STR-ACP 的作用。這有利于促進去卵巢大鼠骨鈣化，有利于骨細胞對鈣的吸收，有利于促進骨鈣化，提高骨密度(BMD)，起到提高骨的內在質量和性能的作用〔4〕。

本研究結果證明，骨質疏松動物模型通過以中藥丹杞顆粒、西藥依普拉芬、結合型雌激素干預治療后，對骨質疏松模型大鼠都有一定的療效，尤其是丹杞顆粒效果最好。學者們對雌激素治療骨質疏松也進行了一定的研究，章曉霜〔5〕對不同強度運動和雌激素聯合作用對去卵巢大鼠骨骼影響進行了研究；曹珍山等〔6〕證明尼爾雌醇對防治骨質疏松具有一定的作用。金勛杰等〔7〕以補骨膠囊和炔雌醇聯用藥對大鼠骨質疏松的預防及對子宮刺激作用進行了研究，得出補骨膠囊和炔雌醇聯用可有效抑制炔雌醇對大鼠子宮刺激作用，得出了補骨膠囊與炔雌醇合用可有效防治骨質疏松的結論。本實驗結果與以往的研究均證明，雌激素對預防和治療骨質疏松具有一定的作用，但雌激素的副作用不容忽視，長期服用雌激素易患深靜脈血栓和股骨頭壞死等。

依普拉芬是治療骨質疏松的西藥，已用于臨床治療骨質疏松。張欣等〔8〕對女性圍絕經骨質疏松以依普拉芬進行干預后的治療效果進行了觀察。得出了依普拉芬有抑制骨吸收、促進骨形成的作用,能有效預防和治療婦女圍絕經期癥狀和骨質疏松,可以作為激素替代療法的補充的結論。韋永中等〔9〕研究表明依普拉芬對防止骨質疏松動物模型大鼠骨丟失具有一定作用。但其作為化學合成的西藥都具有一定副作用，長期服用時臟器等會造成傷害，其價格昂貴，也不易被患者接受。

沈鐵城〔10〕對維生素D治療原發性骨質疏松的療效進行了分析，得出服用維生素+鈣劑可迅速改善骨質疏松病人的癥狀，并增加BMD，降低骨折發生率的結論。

4參考文獻

1李全義，劉時璋，羅振群,等.骨髓損傷后骨代謝形態改變的髂骨形態計量學研究〔J〕，第四軍醫大學學報，2007;28(15)：1421-4.

2張光，李祎，呂俊峰,等.正常人的骨密度定量CT測量分析〔J〕.吉林大學學報(醫學版),2003;29(1)：112-4.

3李世昌，季瀏，劉體偉,等.不同方式運動對去卵巢大鼠骨密度、骨生物力學及代謝指標的影響〔J〕.體育學刊,2012;19(2):132-7.

4鐘顯春，羅民，李新穎，等.幾種藥物治療骨質疏松模型大鼠股骨蠕變特性的對比分析〔J〕.生物醫學工程研究，2012;31(3):180- 3.

5章曉霜.不同強度運動和雌性激素聯合作用對去卵巢大鼠股骨影響的實驗研究〔D〕.上海：華東師范大學博士論文,2004.

6曹珍山，葉長清，袁麗珍,等.尼爾雌醇防治骨質疏松癥的形態計量學研究〔J〕.中國老年學雜志,1992;12(2)：99-101.

7金勛杰，吳鐵，李清南,等.補骨膠囊與17-OC炔雌醇聯合用藥對大鼠骨質疏松的預防及對子宮刺激作用的研究〔J〕.中國骨傷,2003;16(5):272-4.

8張欣,李少聞,董春利,等.依普拉封治療婦女圍絕經期癥狀及骨質疏松的效果〔J〕.中國婦幼保健，2009;24(2)：215-6.

9韋永中，陶松年，包麗華,等.依普拉芬對去勢大鼠骨丟失防治作用的實驗研究〔J〕.南京醫科大學學報：自然科學版，1999；19(2)：215-6.

10沈鐵城.維生素D3治療原發性骨質疏松癥的療效觀察〔J〕.江蘇大學學報(醫學版),2004;14(3)：212-3.

〔2015-02-18修回〕

(編輯袁左鳴)