結直腸癌中ret及相關基因蛋白的表達及意義

摘要：目的 通過研究結直腸癌中的原癌基因ret、ras以及抑癌基因p53，揭示其在結直腸癌中的意義。方法 采用免疫組織化學Envision法來對60例結直腸癌、20例結直腸腺瘤和20例正常結直腸黏膜患者中ret、ras、p53基因蛋白的表達進行檢測。結果 ①ret在結直腸癌中的陽性表達率為30%，高于直腸腺瘤中0%及直腸正常組織中的5%，差異有統計學意義；原癌基因k-ras在腫瘤患者、腺瘤患者以及正常人中均表達，陽性率分別為70%、45%和5%，在腫瘤患者中的陽性率明顯高于腺瘤患者和正常人，在正常人中的陽性率很低，差異有統計學意義；p53在腫瘤患者、腺瘤患者以及正常人均有表達，陽性率分別為90%、30%、10%，在腫瘤患者中的陽性率明顯高于腺瘤患者和正常人，差異有統計學意義。②RET在結直腸癌中的表達和患者的性別、年齡、浸潤深度、生存期無關，與淋巴轉移有關；k-ras在結直腸癌中的表達和患者的性別、年齡、生存期無關，與浸潤深度和淋巴轉移有關；P53在結直腸癌中的表達和患者的性別、年齡、浸潤深度和生存期無關，和淋巴轉移有關。結論 ①ret原癌基因可能是結直腸癌發生發展的一個因素，在結直腸癌的發生、發展中起一定作用；②K-ras及p53蛋白在結直腸癌的陽性表達率均高于結直腸腺瘤和正常組織中，與淋巴轉移和浸潤深度有關，是腫瘤發生、發展的分子靶標。

關鍵詞：結直腸癌；ret；ras；K-ras；p53；表達；意義

結直腸癌（colorectal cancer）是比較常見的消化道惡性腫瘤，隨著老齡化的增加[1]，結直腸癌的發病率也在不斷的上升。其中早期診斷為提高結直腸癌預后的關鍵。我們對結直腸癌中的原癌基因ret、ras以及抑癌基因p53進行了研究，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選取貴陽醫學院附屬醫院病理科2003年1月～2004年12月手術切除的60例結直腸癌和同期活檢的20例腺瘤、20例結直腸正常粘膜存檔蠟塊進行研究，其中男性43例，女性57例，年齡從29～88歲，平均年齡為（57.3±6.2）歲。

1.2方法

1.2.1標本處理 用10%的中性福爾馬林將標本進行固定并用石蠟進行包埋。切片厚3～4 μm，按照Envision說明書進行免疫組織化學染色。

1.2.2 結果判斷 Ras和ret蛋白免疫組織化學染色陽性部位為胞漿；p53的陽性部位是細胞核。細胞核或細胞漿呈棕黃色則是陽性細胞。根據Friedrich免疫反應評分標準，染色強度的計分與陽性細胞的百分數計分相乘。陽性細胞的百分數計分為：0分：陽性細胞率<1%；1分：陽性細胞率為1%～25%；2分：陽性細胞率為26%～50%；3分：陽性細胞率為51%～75%；4分：陽性細胞率>75%。染色強度計分為：0分：不著色；1分：淺棕黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。IRS：陰性（-）：0～2分；弱陽性（+）：3～4分；中陽性（++）：5～7分；強陽性（+++）：>8分。

1.3統計學處理 用SPSS 17.0軟件包對數據進行統計學分析，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1 Ret、ras、P53在結直腸癌、結直腸腺瘤和結直腸黏膜中的表達，見表1。

由表1可得ret、ras和P53在結直腸癌、結直腸腺癌和結直腸黏膜三者中差異均具有統計學意義（P<0.05），見圖1～5。

2.2結直腸癌、結直腸腺瘤和結直腸黏膜中Ret、ras、P53表達的兩兩比較，見表2。

綜合表1、2可得：ret、ras和P53在結直腸癌與結直腸腺瘤中的陽性表達差異有統計學意義（P<0.05），ret、ras和P53在結直腸癌中的陽性表達比結直腸腺瘤高。

ret、ras和P53在結直腸癌與結直腸黏膜中的陽性表達差異有統計學意義（P<0.05），ret、ras和P53在結直腸癌中的陽性表達比結直腸黏膜高。ret、ras和P53在結直腸癌與結直腸腺瘤中的陽性表達差異無統計學意義（P>0.05）。

2.3 ret、ras、p53及相關基因蛋白的表達與結直腸癌患者生物學行為的關系，見表3。

由表3可見RET在結直腸癌中的表達和患者的性別、年齡、浸潤深度、生存期無關，與淋巴轉移有關；Ras在結直腸癌中的表達和患者的性別、年齡、生存期無關，與浸潤深度和淋巴轉移有關；P53在結直腸癌中的表達和患者的性別、年齡、浸潤深度和生存期無關和淋巴轉移有關。

3討論

結直腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，對人類危害嚴重。眾多研究者普遍認為，結直腸癌的發生是一個涉及多基因、涉及多個原癌基因的激活與抑癌基因的失活。

Ret原癌基因編碼一組屬于酪氨酸激酶受體超家族的跨膜蛋白，即Ret蛋白，該蛋白對神經內分泌系統、腎臟發育、神經嵴細胞增殖及腸神經系統發育具有重要作用，故其突變與多種疾病的發生密切相關[2-3]。Ret基因突變可增強Ret酪氨酸激酶信號轉導的功能，促使激酶的活化和原癌基因的轉化，其主要機制是[4]由于氨基酸位點發生突變。①Ret細胞外半胱氨酸區域外顯子10和11的突變阻止了分子間二硫鍵的形成，使游離的半胱氨酸殘基磷酸化，激活下游信號途徑；②細胞內的酪氨酸激酶區域外顯子13-16的突變，使Ret激酶催化及底物磷酸化發生改變而異常激活，而不適當的底物磷酸化使Ret不能正常參與信號轉導通路而引發疾病的發生。RET原癌基因是一個新發現的原癌基因，它可能介導了一種嶄新的信號轉導途徑，拓展了我們對細胞RTK信號轉導、細胞增殖分化及死亡規律，以及細胞生理活性調節的認識，而且RET原癌基因是研究受體酪氨酸激酶變異導致人類疾病的極好模型。

原癌基因K-ras它的編碼蛋白質是由188～189個氨基酸所組成。Ras蛋白在合成后需經過兩種方式翻譯后修飾才可定位于細胞膜內側[5]，其通過催化其效應底物進行信號轉導來調節一系列與細胞生長、分化、凋亡有關的重要功能。人類腫瘤的發生至少有30%是因為ras基因的激活而引起[6]。K-ras的激活可有許多種形式，可是基因突變，或表達增加，或可能是內在GTP酶活性的下降，也可能是和GDP及GTP結合的親和力有所下降。有約44%的結直腸腺瘤患者中出現了K-ras基因的過表達[7-9]。

本研究表明K-ras基因在結直腸癌中的突變率非常高，且突變一般都發生在結直腸癌早期，ras基因在腺瘤患者里的陽性率（45%）大于P53基因在腺瘤患者里的陽性率（30%），因此ras可當做結直腸癌早期檢測的重要標志。

抑癌基因p53具有維持基因組的穩定以及調控細胞生長的作用。突變了的p53抑癌基因失去了調節細胞周期的作用，因此致使細胞的惡性增生及癌變，并且其在細胞內的含量高，半衰期長，用免疫組化可檢測到[10]。經研究，約50%腫瘤中可檢測出P53基因的突變，是最常見的基因改變，其與多種基因之間存在相互調節的作用[11]。在3/4的結直腸癌患者、9/20有浸潤現象發生的腺瘤患者以及早期的腺瘤患者中均發現l7號染色體的短臂位缺失。通過對對結直腸癌患者的研究發現，17號染色體短臂的斷裂點恰在p53基因位點上，同時又對另一等位基因上的p53基因編碼區進行了檢測，發現其存在突變。結直腸癌同p53基因有非常大的相關性。

綜上所述，結直腸癌的發病與原癌基因ret、ras和抑癌基因P53的突變有非常密切的關系，K-ras在結直腸癌中的表達明顯高于結直腸癌良性病變，P53在結直腸癌惡性病變中表達較高，因此K-ras基因可以作為結直腸癌早期檢測的標志而P53被認為是腺瘤發展成為癌瘤的重要標志。

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編輯/張燕