不同炮制方法對大黃遺傳毒性減毒效果的影響

摘要：目的 探析不同炮制方法對大黃遺傳毒性減毒效果的影響。方法 對200g生大黃中藥材分別按四種不同的中藥炮制方式進(jìn)行炮制。然后，對炮制后的藥材建立AMES實驗進(jìn)行檢測其效果，結(jié)果均進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理來比較差異。結(jié)果 生大黃不管是在代謝活化還是非代謝活化條件下，對于菌株TA97、TA102的致突變性均為陽性；除醋蒸炮制法所制得的大黃樣品在代謝非活化條件下呈陽性以外，清蒸炮制法以及醋蒸炮制法所制得的樣品對所有菌株的致突變性均呈陰性；但是不管是在代謝活化還是非代謝活化條件下，清炒炮制法、醋炒炮制法所制得的大黃樣品對所有菌株的致突變性均呈陰性。結(jié)論 生大黃具有相應(yīng)的遺傳毒性，不同炮制方法對大黃遺傳毒性減毒效果的影響不同，其中清蒸炮制法和醋蒸炮制法均具有有效的減毒效果，而清炒炮制法以及醋炒炮制法并無明顯的減毒效果。

關(guān)鍵詞：炮制方法；生大黃；遺傳毒性；減毒效果；影響

大黃具有瀉火、解毒等作用，其主要成分是蒽醌類衍生物。生大黃中的蒽醌類衍生物可以游離狀態(tài)存在，也可以結(jié)合狀態(tài)存在[1]。以往研究表明，生大黃除了具有其藥理作用外，還具有不可避免的毒性作用，如大劑量的生大黃可降低大鼠的懷孕率、甚至可升高死胎率[2]。近年來的研究結(jié)果均提示，生大黃除具有相應(yīng)的臨床藥理作用外，還具有較為嚴(yán)重的遺傳毒性[3]。這種毒性可使小鼠致癌，也有可能對人體具有某種不可避免的毒副作用。因此，尋找一種能有效降低生大黃的遺傳毒性的炮制方法顯得尤為重要。本研究對200g生大黃中藥材分別清炒炮制法、醋炒炮制法、清蒸炮制法以及醋蒸炮制法等四種炮制方法進(jìn)行炮制，以尋找一種能有效降低生大黃的遺傳毒性的炮制方法。

1 資料與方法

1.1實驗材料 將同一批次的200g生大黃中藥材平均分為四組，分別按清炒炮制法、醋炒炮制法、清蒸炮制法以及醋蒸炮制法進(jìn)行炮制。其中實驗中所用的主要試劑包括二甲基亞砜（DMSO）、敵克松、甲基磺酸甲酯以及溴化乙錠等。實驗所用菌株為組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門菌TA97、TA100、TA98和TA102均符合實驗要求。

1.2大黃炮制方法 平均分為四份的生大黃（各50g），分別按清炒炮制法、醋炒炮制法、清蒸炮制法以及醋蒸炮制法進(jìn)行炮制。其中清炒炮制法是指首先將50g生大黃用中火力翻炒至生大黃表面呈焦黃色，然后取出并于室溫放涼，備用；清蒸炮制法是指首先將50g生大黃加熱蒸透40min左右，然后取出并將其置于室溫放涼，備用；醋炒炮制法是指首先在50g生生大黃中加入9g醋，將其攪拌均勻，待9g醋及50g生大黃的混合物悶透后，將其放入鍋中翻炒至大黃表面呈焦黃色，然后取出并于室溫放涼，備用；醋蒸炮制法指首先在50g生生大黃中加入9g醋，將其攪拌均勻后，將9g醋及50g生大黃的混合物放入鍋中加熱蒸透30min左右，然后取出并將其置于室溫放涼，備用。

1.4 AMES實驗 采用文獻(xiàn)中所用的標(biāo)準(zhǔn)平皿摻入法[4]，按生大黃濃度梯度分別為0.05mg/表面皿、0.10mg/表面皿、0.50mg/表面皿、2.50mg/表面皿、5.00mg/表面皿對突變性進(jìn)行檢測。其中分別按清炒炮制法、醋炒炮制法、清蒸炮制法以及醋蒸炮制法進(jìn)行炮制四份生大黃均采用毒性最強(qiáng)的5.00mg/表面皿的生大黃濃度進(jìn)行實驗；代謝活化組以20ug/表面皿的2-AF作為陽性對照，TA100非代謝活化以50pg/表面皿的疊氮鈉作為陽性對照，其它菌株的非代謝活化時均以50ug/表面皿的Dexon作為陽性對照，以0.1ml/表面皿的二甲基亞砜（DMSO）作為陰性對照。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0統(tǒng)計件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計量資料用（x±s）表示，組間的均值比較采用多因素方差分析中兩兩比較方法LSD檢驗，統(tǒng)計結(jié)果均以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

生大黃不管是在代謝活化還是非代謝活化條件下，對于菌株TA97、TA102的致突變性均為陽性；除醋蒸炮制法所制得的大黃樣品在代謝非活化條件下呈陽性以外，清蒸炮制法以及醋蒸炮制法所制得的樣品對于AMES實驗中所有菌株的致突變性均呈陰性；但是不管是在代謝活化還是非代謝活化條件下，清炒炮制法、醋炒炮制法所制得的大黃樣品對于AMES實驗中所有菌株的致突變性均呈陰性。見表1。

3 討論

大黃一般比較安全，但是大劑量的生大黃會導(dǎo)致中毒，因此還具有一定的毒副作用。以往研究表明，生大黃若進(jìn)行炮制后再應(yīng)用于臨床，不僅能降低其毒副作用，還能提高其臨床應(yīng)用療效[5]。雖然炮制能使生大黃的臨床應(yīng)用達(dá)到減毒增效的目的，但是炮制方法種類繁多。因此，尋找一種能有效降低生大黃的遺傳毒性的炮制方法顯得尤為重要。本研究結(jié)果提示，生大黃不管是在代謝活化還是非代謝活化條件下，對于菌株TA97、TA102的致突變性均為陽性；除醋蒸炮制法所制得的大黃樣品在代謝非活化條件下呈陽性以外，清蒸炮制法以及醋蒸炮制法所制得的樣品對于AMES實驗中所有菌株的致突變性均呈陰性；但是不管是在代謝活化還是非代謝活化條件下，清炒炮制法、醋炒炮制法所制得的大黃樣品對于AMES實驗中所有菌株的致突變性均呈陰性。

綜上所述，不同炮制方法對大黃遺傳毒性減毒效果的影響不同，清蒸炮制法和醋蒸炮制法均具有有效的減毒效果。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/哈濤