快速高效液相色譜分離技術在中藥分析中的應用分析

摘要：中藥藥效質量控制的關鍵之一就是對中藥化學成分的分析。中藥化學成分的復雜性決定了中藥成分的分析時間較長、分離難度較大等特點。本文結合近年來的科學研究，分析了快速高效液相色譜分離技術在復雜中藥體系中的化學成分分析中的運用。

關鍵詞：快速高效液相色譜；分離技術；中藥分析

中藥是我國人民在歷史長河中和無數疾病作斗爭時總結出來的智慧結晶，是我國的寶貴財富。但是，沒有標明活性化學物質含量的中草藥制劑，服用劑量太小起不到治療作用，而服用的劑量太大又會使人體發生危險[1]。所以，中藥藥效物質的質量控制在現代中藥研究中是至關重要的。其中，快速高效液相色譜主要分為高溫液相色譜、基于整體柱的高效液相色譜、超高壓液相色譜。傳統的高效液相色譜分析中存在著一些不足，為了彌補這些不足，快速高效液相色譜分離技術得到了充分的運用。

1高溫液相色譜在中藥分析中的運用

為了確保中藥安全有效，必須對中草藥的效應成分進行科學合理地標識，所以對效應成分的辨別和確認是非常重要的。隨著高溫液相色譜技術的不斷發展，其運用的范圍越來越廣，成為中藥分離分析的重要手段。對于液相色譜分析，不但要求其要有很高的準確性，同時也要求要有更高的分析頻率，方便測試對象數目特別龐大時使用，所以，分析效率也顯得越來越重要。Bino等[2]使用二維液相色譜分離玉米幼苗組織提取物代謝產物，運用二維分離時采用的是高溫液相色譜，和傳統二維色譜分離比較是在110℃高溫下與20s內將所有的化合物分離，不但減少了分析時間，還使得色譜峰容量增大，在短短的25min內就獲得了870個色譜峰，而較大的峰容量是保證有效分離大量化合物的前提，中藥成分很復雜，含有很多有效成分，這就決定了中藥的分離需要較大的色譜峰容量、較快的分析技術。具有這些優勢的高溫液相色譜在中藥成分分析中具有特別大的潛力。

2基于整體柱的高效液相色譜在中藥分析中的運用

中藥的物質體系復雜，含有化合物的種類多，數目不確定，各種物質含量差異也很大。基于整體柱的高效液相色譜具有較高柱效、較低柱壓降和選擇性較好的優點，因此可以作為中藥成分分析的有效技術。和傳統的C18填充柱比較，采用整體柱對化合物進行分離時，在柱壓降仍然保持降低的情況下把流動相的流速由原來1mL/min提高到2mL/min，分析時間大大減少了。由于分析時間的縮短，色譜峰變得高和尖銳，從而有效提高了分析的靈敏度，而提高一個數量級的檢出限對含量較低的物質的檢測是具有非常重要的意義的。此外，對于在填充柱上不能很好分離的化合物在整體柱上則能夠較好的分離。由于整體柱的柱壓降較低，所以在分析時使用的改性劑選擇范圍更廣，例如添加異丙醇，可以使流動相的流速提高1倍，很大程度上提高了色譜峰的容量和分析的速度。另一方面，由于整體柱的柱壓降較低，進行色譜分離時可以采用流速梯度，與溶劑梯度洗脫比較，流速梯度洗脫不必要進行第二次同類實驗以初始濃度的流動相對色譜柱進行平衡，這就節約了實驗溶劑和實驗時間。較低的柱壓降還可以使色譜柱使用壽命增加，降低企業成本。基于整體柱的高效液相色譜為含有復雜化學成分的中藥材鑒定和質量控制提供了更快速、更高效的分析方法。

3超高壓液相色譜在中藥分析中的運用

超高壓液相色譜現在已經廣泛運用在中藥成分分析、中藥復方制劑的定性和定量分析等方面。與傳統高效液相色譜相比，使用超高壓液相色譜在提高分析速度的同時，分離度也有所提高，可以使較難分離的化合物可以得到較好的分離。采用傳統高效液相色譜分離時未達到極限分離的化合物，采用超高壓液相色譜分離更容易實現基線分離。由于超高壓液相色譜的靈敏度的提高，中藥材中很多化合物的檢出限會降低，使得更容易檢出。由于流速的降低，有機溶劑的用量大大減少。超高壓液相色譜還可以與各種不同的檢測器聯用，可以用于中藥代謝產物等復雜的生物樣品分析[3]。總之，超高壓液相色譜具有高分離度、超快速、高色譜峰容量和高靈敏度等優點，在中藥分析中得到廣泛運用。

4超高效液相色譜-質譜聯用技術在中藥分析中的運用

超高效液相色譜-質譜聯用技術是一種新的現代技術手段，將其運用在中藥分析中具有高分離效能、高靈敏度以及專屬性強等優點，其定量分析和定性分析能力都很強，在藥物分析中運用非常廣泛，尤其是在中藥分析中的應用更為廣泛。超高效液相色譜據有高性能物理分析能力，質譜具有獨特的質量分析能力，而超高效液相色譜-質譜聯用技術很好的將二者的優點結合在了一起，同時還具有很高的選擇性和靈敏度。超高效液相色譜在達到最佳線速度時的流動相流速與質譜能夠承受的流速更加匹配，可以增加離子化的效率。中藥具有非常復雜的特點，中藥指紋圖譜就是將中藥材進行一定的處理后采用一定的分析手段得到可以標示這種中藥材特征共有峰的圖譜，具備個體絕對的唯一性，而超高效液相色譜-質譜聯用技術就是一種可以得到中藥指紋圖譜的技術。超高效液相色譜-質譜聯用技術還能根據指紋的特征反映出由于不同產地對中藥材造成的差異，差異越小說明這種藥材的穩定性越好，不但可以很好的鑒別基礎峰，還可以利用它很高的選擇性和靈敏度對于中藥材的指紋區域更好的定性分析[4]。

5結論

隨著科學技術的不斷進步，中藥產業也在不斷發展，因此，人們對中藥分析分離技術的要求越來越高。高溫液相色譜法、基于整體柱的高效液相色譜和超高壓液相色譜都屬于快速高效液相色譜分離技術，是色譜分析的新的發展領域。它們不但具有液相色譜的高選擇性，而且還具有氣相色譜的高分離效率的優點，主要是通過改變固定相的粒徑大小、升高系統的整體溫度、使用整體材料進行填充來減少分析時間的，同時還保持了很好地分析效果。快速高效液相色譜分離技術在中藥研究中發揮越來越重要的作用，為我國中藥分析提供強大的技術支持。

參考文獻：

[1]郭星，曾常青.高效液相色譜法測定不同產地鉤藤中異鉤藤堿和鉤藤堿的含量[J].河南中醫，2012，30（2）：40-41.

[2]李艷艷，周光明，辛丹敏，等.HPLC法測定杜仲中綠原酸和蘆丁[J].西南大學學報：自然科學版，2013，32（7）：60-61.

[3]胡英婕，承偉.高效液相色譜在中藥有效成分含量測定中的應用[J].現代中西醫結合雜志，2013，16（8）：556-558.

[4]黃昆，王文輝，李寶才，等.超高效液相色譜和質譜聯用在藥物研究領域的應用[J].光譜實驗室，2013，26（24）：922-930.

編輯/孫杰