四逆湯對腹主動脈縮窄大鼠血壓和壓力反射敏感性的影響

四逆湯對腹主動脈縮窄大鼠血壓和壓力反射敏感性的影響

吳 瓊,劉永明,高俊杰,邵春林,沈智杰,陳鐵軍,郭 蔚,王英杰,王肖龍

摘要:目的 研究四逆湯方對腹主動脈縮窄大鼠血壓和壓力反射敏感性(BRS)的影響。方法 采用腹主動脈縮窄法制備高血壓大鼠模型50只,造模成功后隨機分為模型組(M組)、假手術組(B組)、四逆湯組(S組)、四逆湯+培哚普利組(SP組)、培哚普利組(P組)共5組,每組10只。術后4周開始灌胃,以假手術組為空白對照組,培哚普利組為陽性藥物對照組,藥物干預8周。用尾動脈儀連續動態測量大鼠左前肢血壓。干預后8周通過股動脈插管,股靜脈注射苯腎上腺素觀察大鼠BRS、血壓變化。結果 造模后4周,與假手術組相比,各組收縮壓均顯著增高(P<0.001)、舒張壓增高不明顯(P>0.05),其中四逆湯組、四逆湯+培哚普利組舒張壓增高(P<0.05)。藥物干預后4周,與模型組相比,四逆湯組、四逆湯+培哚普利組、培哚普利組收縮壓均明顯降低(P< 0.001),舒張壓雖無明顯降低,但與造模后血壓相比有所下降(P<0.05)。藥物干預后8周,與前一時間點血壓相比,各組血壓均無進一步降低(P>0.05)。藥物干預后,與模型組相比,四逆湯組、四逆湯+培哚普利組、培哚普利組BRS明顯上升(P<0.001)。結論 四逆湯可改善腹主動脈縮窄大鼠的血壓,可增加腹主動脈縮窄大鼠壓力反射敏感性。

關鍵詞:腹主動脈縮窄;四逆湯;壓力反射敏感性;血壓

中圖分類號:R544.1 R285.5

文獻標識碼:A

doi:10.3969/j.issn.1672-1349.2015.12.008

文章編號:1672-1349(2015)12-1381-04

基金項目:上海市中醫臨床重點實驗室基金項目(No.14DZ2273200)

通訊作者:王肖龍,E mail:wxlqy0214@163.com

Abstract:Objective To study the effects of Sini decoction(SND)on blood pressure and baroreflex sensitivity(BRS)in rats with abdominal aortic coarctation.Methods Fifty hypertension rats were established by abdominal aortic coarctation operation.After mode-l ing,rats were randomly divided into 5 groups:Sham operation group,SND group,SND plus perindopril group,perindopril group and model group.Rats were gavaged 4 weeks later.The sham operation group was the control group,perindopril as the positive control group.Caudal artery with continuous dynamic measurement instrument left forelimb blood pressure in rats.By cannulating into femoral artery,injecting phenylephrine into femoral artery,we observe the change of BRS,MAP,and HR.Results After modeling of 4 weeks,compared with the control group,the systolic blood pressure were significantly increased in each group(P<0.001).After drug intervention of 4 weeks,compared with the model group,the systolic blood pressure were significantly lower in SND group,SND plus perindopril group,perindopril group(P<0.001).The diastolic blood pressure was lower after modeling(P<0.05).After drug intervention,compared with model group,the BRS obviously increased in SND group,SND plus perindopril group,perindopril group(P<0.001).Conclusion SND can improve the blood pressure and increase the baroreflex sensitivity in rats with abdominal aortic coarctation.

作者單位:上海中醫藥大學附屬曙光醫院(上海201203)

Influence of Sini Decoction on Blood Pressure and Baroreflex Sensitivity in Rats with Abdominal Aortic Coarctation

Wu Qiong,Liu Yongming,Gao Junjie,Shao Chunlin,Shen Zhijie,Chen Tiejun,Guo Wei,Wang Yingjie,Wang Xiaolong

Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China

Corresponding Author:Wang Xiaolong

Key words:abdominal aortic coarctation;Sini decoction;baroreflex sensitivity;blood pressure

壓力反射敏感性(baroreflex sensitivity,BRS)是血壓變化導致反射性心率變化的敏感程度,反映血壓升高所引起的心臟迷走神經反射調節情況。大量研究證實BRS降低可能是血壓變異性(BPV)升高的原因之一,同時也是導致原發性高血壓發生發展的原因之一。本實驗室前期研究發現四逆湯能夠改善高血壓患者的BPV,而BPV與BRS呈負相關。本研究通過觀察四逆湯對腹主動脈縮窄大鼠血壓、壓力反射功能的影響,進一步探討其治療高血壓的機制。

1　材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 清潔級雄性Wistar大鼠,體重170 g~ 220 g,購自上海中醫藥大學實驗動物中心,動物合格證號:SCXK(滬)2012 0002。

1.1.2 藥品 中藥:熟附片、炙甘草、干姜、桂枝、山萸肉、茯苓,所有藥物均由曙光醫院藥劑科提供,按1∶1∶1∶1∶1∶1組方,將藥物浸泡后,加入適量蒸

餾水,武火燒開,文火煎煮30 min,藥液過100目不銹鋼篩,再放入濃縮鍋中濃縮,最終制成含生藥為0.972 g/mL及1.944 g/mL的藥液。培哚普利(每片4 mg),由施維雅制藥有限公司生產(批號202353),碾碎,過藥典100目篩后,置于加入含0.5%混懸劑(羥甲基纖維素鈉)的雙蒸水中,制成0.036 mg/mL、0.072 mg/mL濃度的培哚普利混懸劑。

1.1.3 試劑 戊巴比妥鈉:國藥集團化學試劑有限公司;注射用青霉素鈉:上海先鋒藥業有限公司;肝素鈉注射液:上海第一生化藥業有限公司;苯腎上腺素注射液:上海禾豐制藥有限公司。

1.1.4 儀器 EL120型電子天平:日本島津制作所;大鼠尾動脈血壓儀BP 3006A型:上海軟隆公司;501型超級恒溫水浴槽:上海精宏實驗設備公司。

1.2 方法

1.2.1 大鼠模型制備 動物喂養標準合成飼料,實驗前適應性飼養7 d。參照文獻[1,2]及本實驗室相關手術方法,用腹主動脈縮窄法制成心臟壓力負荷超載高血壓模型。

1.2.2 實驗分組 各組大鼠于造模4周后,用無創血壓儀BP 2000系統,通過左上肢袖法測量各組大鼠血壓,以收縮壓>140 mmHg為造模成功[3],隨機分為假手術組(B組)、四逆湯組(S組)、四逆湯+培哚普利組(SP組)、培哚普利組(P組)、模型組(M組),每組10只。

1.2.3 給藥方法 造模4周后開始給藥,根據“人和動物按體表面積折算的等效劑量比值表”折算等效劑量,模型組、假手術組予蒸餾水10 mL/(kg·d)灌胃;四逆湯組予四逆湯0.81 g/(kg·d)灌胃;四逆湯+培哚普利組先予四逆湯0.81 g/(kg·d),再予培哚普利混懸液0.36 mg/(kg·d)灌胃;培哚普利組予培哚普利混懸液0.36 mg/(kg·d)灌胃。每日1次定時灌胃,每周6 次,共干預8周。

1.3 觀察指標

1.3.1 血壓測定 參照文獻[4,5]用濃度為3%戊巴比妥鈉1.17 mL/kg腹腔麻醉,用大鼠尾巴固定裝置固定大鼠左前肢,通過應用尾動脈血壓儀(BP 2006A型)測定血壓和心率。每只動物測5次~7次,取其中3個較接近血壓的平均值作為最終的測量數據。檢測時間固定為09:00~11:00。分別于造模前、造模后4周、藥物干預后4周及8周測定1次。

1.3.2 動脈壓力反射敏感性測定 手術方法藥物干預第8周時,實驗大鼠禁食不禁水12 h,于末次給藥后6 h參照文獻按照改良的Smyth[6]方法進行動脈壓力反射敏感性檢測。BRS的測定按照Smyth法[6],靜脈注射苯腎上腺素,引起血壓升高、心率降低,以心率變化與血壓變化的比值代表BRS。本實驗靜脈注射苯腎上腺素5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg升高血壓,引起反射性心動過緩,反映壓力反射對升壓的敏感性,在比較了3種劑量在假手術組和模型組大鼠引起的血壓和心率變化后,最后選定PE為10μg/kg用于誘發壓力反射。

1.4 統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件分析,數據用均數±標準差(x±s)表示,組間分析采用ANOVA分析和配對樣本t檢驗。P <0.05為差異有統計學意義。

2　結 果

2.1 大鼠一般狀況 治療前假手術組、四逆湯組、四逆湯+培哚普利組、培哚普利組、模型組各10只。假手術組于藥物干預后第4周、第8周測量血壓時各死亡1只,最終剩余8只;四逆湯組于造模后死亡1只, 第4周測量血壓時死亡1只、檢查心臟超聲時死亡1 只,最終剩余7只;四逆湯+培哚普利組于灌胃時死亡2只,為窒息導致,最終剩余8只;培哚普利組于第8周測量血壓時死亡2只,最終剩余8只。模型組于干預后第4周測量血壓時死亡1只,檢查心臟超聲時死亡2只,最終剩余7只。

2.2 各組大鼠血壓比較 造模前各組大鼠血壓差異無統計學意義(P >0.05)。造模后4周,與假手術組比較,其余各組大鼠收縮壓(SBP)均顯著增高(P<0.001);四逆湯組、四逆湯+培哚普利組舒張壓(DBP)升高(P<0.05),培哚普利組、模型組舒張壓均無明顯變化(P >0.05);各組大鼠平均動脈壓(MBP)均升高(P<0.05)。藥物干預后4周,與模型組相比,各組大鼠收縮壓顯著降低(P <0.01),其中四逆湯+培哚普利組、培哚普利組降低更明顯(P <0.001),但四逆湯+培哚普利組、培哚普利組比較差異無統計學意義;而各組舒張壓、平均動脈壓均無明顯降低(P > 0.05),但與造模后血壓相比,藥物干預組均明顯降低(P<0.01)。藥物干預后8周,與前一時間點血壓相比,各組血壓均無進一步降低,其中培哚普利組收縮壓略有升高,假手術組、四逆湯+培哚普利組舒張壓、平均動脈壓略有升高,但與假手術組、模型組相比差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。

2.3 大鼠動脈BRS比較 藥物干預后第8周,對大鼠BRS進行檢測。以同樣劑量注射苯腎上腺素至少3次,根據每次MAP變化及隨之變化的心率,算出直線回歸方程,并規定r值必需大于0.8。與假手術組相比,四逆湯組、四逆湯+培哚普利組、培哚普利組、模型組BRS均降低,其中模型組降低幅度最大(P<0.001),四逆湯+培哚普利組幅度最小(P< 0.05)。與模型組相比,藥物干預組BRS均升高(P< 0.001)。詳見表2。

表1　各組大鼠血壓比較(x±s) mmHg

表2　各組大鼠BRS比較(x±s)　ms/mmHg

3　討 論

目前,關于四逆湯是否能夠直接降低高血壓大鼠血壓方面的報道很少,在本研究的臨床部分,已經證實了四逆湯加基礎降壓治療具有降壓療效,但四逆湯自身是否有降壓效果還不得而知。而此次動物實驗部分,發現用藥4周后,四逆湯的確能夠降低高血壓大鼠的血壓,其中降低收縮壓的幅度更大,且療效與西藥相當。而四逆湯與四逆湯加載西藥治療相比,兩組降壓效果無明顯差異,更進一步提示單用四逆湯的確有降壓效果。另外,藥物干預后8周,無論是四逆湯、還是西藥,或是合并治療皆未能進一步降壓,提示當血壓降低到正常水平后,繼續服用抗高血壓藥物不會進一步降壓從而引起一些低血壓類事件。

壓力反射敏感性是迷走神經反應性指標,可以評價動脈壓力感受器反射活動。有研究證實,BRS降低可能是BPV升高的原因之一,同時也是導致原發性高血壓發生發展的原因之一。而有相關實驗表明,許多抗高血壓藥物被證明能夠改善壓力反射敏感性[7]。本實驗結果也提示,四逆湯在降低大鼠血壓的同時,具有改善壓力反射敏感性的作用,培哚普利組、四逆湯加培哚普利組也均能改善BRS,四逆湯組優于培哚普利組,但差異無統計學意義。另外,與模型組相比,四逆湯+培哚普利組BRS明顯上升(P <0.001),提示中藥聯合西藥治療在改善BRS上可能具有更加明顯的作用。

四逆湯出自《傷寒論》,由附子、干姜、甘草組成。本實驗以之為基礎方,加桂枝通陽、山萸肉收斂固澀、茯苓利水。近年來,關于四逆湯的研究越來越多,包括免疫調節、抗動脈粥樣硬化、保護腦缺血后損傷、保護心肌、胃腸黏膜等,但是四逆湯與BRS方面的聯系還未見報道,而本實驗證實四逆湯能夠改善高血壓大鼠的壓力反射敏感性,在結合了動脈壓力反射敏感性自身特點以及四逆湯作用特征后,推測四逆湯易化BRS,可能機制為:①通過降低血中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ),使其縮血管作用減少從而抑制大鼠主動脈弓的沖動發放[8]。楊學偉等證實四逆湯能夠降低腹主動脈縮窄大鼠的血漿AngⅡ,而本實驗也同樣證實了四逆湯有減少血漿血管緊張素的作用,因此降低AngⅡ可能是四逆湯易化BRS的機制。②通過降低AngⅡ致使壓力反射重調定減弱。有研究證實,靜脈注射AngⅡ可引起壓力反射重調定,其機制可能為興奮大腦中樞最后區的神經元,通過抑制心迷走活性,引起交感興奮,從而致使血壓升高[9]。但是這種作用在介導血壓上升的同時通常不引起心率的反射性降低。四逆湯在通過