野生樹(shù)鼩腸道蠕蟲(chóng)感染調(diào)查及分析

研究報(bào)告

野生樹(shù)鼩腸道蠕蟲(chóng)感染調(diào)查及分析

孫曉梅，仝品芬，匡德宣，陳玲霞，王文廣，陸彩霞，代解杰

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所樹(shù)鼩種質(zhì)資源中心，

云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明650118)

【摘要】目的調(diào)查野生樹(shù)鼩(Tupaiabelangeri Chinensis) 感染腸道蠕蟲(chóng)的主要種類(lèi)并進(jìn)行鑒定，為今后樹(shù)鼩寄生蟲(chóng)檢測(cè)提供形態(tài)學(xué)參考，為實(shí)驗(yàn)樹(shù)鼩寄生蟲(chóng)控制提供依據(jù)。方法采集203只野外來(lái)源的樹(shù)鼩新鮮糞便，蟲(chóng)卵采用常規(guī)糞便直接涂片以及孵化后顯微鏡觀察；絳蟲(chóng)采用壓片、固定染色，以及線蟲(chóng)經(jīng)透明后體視鏡觀察，蟲(chóng)卵與成蟲(chóng)相對(duì)應(yīng)鑒定。結(jié)果野生樹(shù)鼩腸道蠕蟲(chóng)的總感染率為75.86%，主要感染種類(lèi)有3種，經(jīng)鑒定為長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)、奇口線蟲(chóng)和糞類(lèi)圓線蟲(chóng)，感染率分別為27.67%，30.06%和51.52%。三種蠕蟲(chóng)的混合感染率為4.55%。兩種線蟲(chóng)蟲(chóng)卵在樹(shù)鼩糞便中多為含胚胎形態(tài)。 結(jié)論 野生樹(shù)鼩腸道蠕蟲(chóng)的感染率較高。對(duì)野外引入的新種源必須隔離檢疫，進(jìn)行針對(duì)性的藥物治療，才能有效地控制腸道寄生蟲(chóng)病的傳播。

【關(guān)鍵詞】樹(shù)鼩；腸道蠕蟲(chóng)；長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)；奇口線蟲(chóng)；糞類(lèi)圓線蟲(chóng)

[基金項(xiàng)目]國(guó)家科技支撐計(jì)劃 (2011BAI15B01-21)，云南省科技創(chuàng)新平臺(tái)建設(shè)(2013DA002)。

[作者簡(jiǎn)介]孫曉梅(1963-)，女，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原學(xué)研究。E-mail： sxm@imbcams.com.cn。

[通訊作者]代解杰(1961-)，男，研究員。E-mail： djj@imbcams.com.cn。

【中圖分類(lèi)號(hào)】R33【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.002.004

Survey of intestinal helminth infection in wild tree shrews

(TupaiabelangeriChinensis)

SUN Xiao-mei, TONG Pin-fen, KUANG De-xuan, CHEN Ling-xia, WANG Wen-guang, LU Cai-xia, DAI Jie-jie

(Center of Tree shrews Germplasm Resources, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and

Peking Union Medical College, Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research & Development on Severe

Infection Diseases, Kunming 650118, China)

Abstract【】ObjectiveTo analyze and understand the epidemic situation of intestinal helminthe infection in wild tree shrews (Tupaia belangeri Chinensis), and to provide useful reference and support for prevention and treatment of parasitic infection in tree shrews. Methods 203 wild tree shrews were used in this study. Stool ova in the smear from fresh feces and after incubation were observed and identified by routine microscopic examination. Cestodes were observed in press slide after fixation and staining, and nematodes were observed under a stereoscope after clearing. The ova were identified with corresponding adult parasites. Results In this survey, we found the total prevalence rate of intestinal helminthes in this wild tree shrew population was 75.86%, mainly including three kinds of important parasites, namely, Hymenolepis diminuta 27.67%, Rictularia sp. 30.06%, and Strongyloides stercoralis 51.52%, respectively. Mixed infection rate of the three species was 4.55%. For Rictularia sp. and Strongyloides stercoralis, embryonated eggs were often observed in their fresh feces. ConclusionsIntestinal helminth infection rate is rather high in the wild tree shrews. Quarantine inspection is necessary for new intake. Different control measures and surveillance should be taken to control the dissemination of intestinal helminth infection in tree shrews.

【Key words】Tree shrews; Intestinal helminthes;Hymenolepisdiminuta;Rictulariasp.;Strongyloidesstercoralis

寄生蟲(chóng)感染不僅危害實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，甚至引起人獸共患疾病的傳播，在使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物開(kāi)展生命科學(xué)研究過(guò)程中必須重視對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)的控制。近年來(lái)，對(duì)樹(shù)鼩(tree shrew，Tupaiabelangeri)的基因組研究發(fā)現(xiàn)，樹(shù)鼩在神經(jīng)、代謝和免疫系統(tǒng)等方面與人類(lèi)具有較高的同源性，特別適合于病毒免疫學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)和代謝性疾病研究，受到越來(lái)越多的科研工作者重視[1]。作為我國(guó)特有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新品種，開(kāi)展樹(shù)鼩標(biāo)準(zhǔn)化種群的飼養(yǎng)繁殖和質(zhì)量的控制是重要的基礎(chǔ)性工作。鑒于昆明郊區(qū)野生樹(shù)鼩種群數(shù)量較為豐富，目前已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)樹(shù)鼩繁育的種源補(bǔ)充來(lái)源地，而對(duì)此的研究報(bào)道又非常有限。因此，清晰了解野生樹(shù)鼩自身攜帶的寄生蟲(chóng)感染譜，有利于開(kāi)展實(shí)驗(yàn)樹(shù)鼩寄生蟲(chóng)質(zhì)量控制研究和標(biāo)準(zhǔn)化種群建立。

1材料和方法

1.1動(dòng)物

203只野生樹(shù)鼩來(lái)源于昆明西郊，引入后飼養(yǎng)于隔離觀察室進(jìn)行檢疫。

1.2設(shè)備及材料

Eclipse 80i Nikon顯微鏡，SMZ1500 Nikon體視鏡，美國(guó)產(chǎn)Forma恒溫培養(yǎng)箱；史克腸蟲(chóng)清，卡紅，鹽酸，乙醇，甘油，載玻片，牙簽，試管。

1.3方法

1.3.1糞便檢查：抓取并保定樹(shù)鼩，多數(shù)樹(shù)鼩在抓取過(guò)程中因緊張而主動(dòng)排出糞便,對(duì)無(wú)糞便者可輕輕按摩其腹部使其排便。每只采取豌豆粒大小新鮮糞便標(biāo)本，置于載玻片上，加生理鹽水?dāng)噭蛲科穸纫阅芡高^(guò)涂片看清書(shū)上字跡為宜。直接顯微鏡下檢查寄生蟲(chóng)蟲(chóng)卵。

1.3.2幼蟲(chóng)培養(yǎng)：方法同鉤蚴培養(yǎng)法[2]。培養(yǎng)1周后體視鏡可觀察到試管底部有游動(dòng)的幼蟲(chóng)。用吸管插入試管底部小心地吸出，置載玻片上。

1.3.3成蟲(chóng)制片：對(duì)尸解獲得的絳蟲(chóng)進(jìn)行制片、鑒定。絳蟲(chóng)分別截取頭頸部、成節(jié)和孕節(jié)三段進(jìn)行壓片；采用卡紅染色，制片步驟為先脫水，再染色，然后封片，鏡檢；卡紅染液配制：卡紅4 g，鹽酸2 mL，水15 mL，85%乙醇95 mL。先將卡紅溶解在鹽酸與水中，煮沸后加85%乙醇95 mL，加熱片刻，滴加氨液中和鹽酸，過(guò)濾后使用[2]。

對(duì)糞便檢查到有線蟲(chóng)卵的動(dòng)物，給予史克腸蟲(chóng)清進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)，次日收集糞便洗出成蟲(chóng)。將線蟲(chóng)和培養(yǎng)后獲得的幼蟲(chóng)置載玻片上，加甘油乙醇透明，然后體視鏡或顯微鏡觀察[3]。甘油乙醇溶液：甘油(5～10)mL，加入70%乙醇(90～95)mL。

2結(jié)果

2.1調(diào)查結(jié)果

203只野生來(lái)源的樹(shù)鼩腸道糞便中，共檢查出3種蠕蟲(chóng)蟲(chóng)卵，結(jié)合成蟲(chóng)的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定，分別為長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)(Hymenolepisdiminuta)、奇口線蟲(chóng)(Rictulariasp.)和糞類(lèi)圓線蟲(chóng)(Strongyloidesstercoralis)，感染率見(jiàn)表1。腸道蠕蟲(chóng)的總感染率為75.86%；糞便中常見(jiàn)到兩種或三種蠕蟲(chóng)混合感染的情況，三種混合感染率為4.55%，奇口線蟲(chóng)和糞類(lèi)圓線蟲(chóng)混合的概率較高。

2.2蟲(chóng)卵與成蟲(chóng)形態(tài)特征

本次調(diào)查中，從長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)孕節(jié)和奇口線蟲(chóng)卵巢中獲取的蟲(chóng)卵與糞便中排除的蟲(chóng)卵作一一對(duì)應(yīng)鑒定，顯示了明顯的形態(tài)特征，見(jiàn)表1、圖1～3(見(jiàn)文后彩插3)。長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)頭部特征見(jiàn)圖1b，經(jīng)卡紅染色后，每個(gè)成節(jié)內(nèi)含3個(gè)橫列的球形睪丸非常明顯，見(jiàn)圖1c；奇口線蟲(chóng)典型特征是在腹部?jī)蓚?cè)可見(jiàn)梳狀盾片，靠身體中后端漸漸稀疏為櫛刺，見(jiàn)圖2b；糞類(lèi)圓線蟲(chóng)單獨(dú)感染的糞樣經(jīng)過(guò)孵化培養(yǎng)，2 d后能看到游動(dòng)的蚴蟲(chóng)，培養(yǎng)7 d后取出鑒定，此時(shí)觀察到數(shù)量較多的絲狀蚴，并具有糞類(lèi)圓線蟲(chóng)的典型形態(tài)特征[3]，見(jiàn)圖3b。通常在樹(shù)鼩糞便中看到的奇口線蟲(chóng)和糞類(lèi)圓線蟲(chóng)的卵，多為含胚胎的形態(tài)，見(jiàn)圖2a、3a。

表1　野生樹(shù)鼩攜帶主要腸道蠕蟲(chóng)形態(tài)和感染率

3討論

本次開(kāi)展的野外來(lái)源的樹(shù)鼩腸道蠕蟲(chóng)調(diào)查，共發(fā)現(xiàn)3個(gè)優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種，分屬于絳蟲(chóng)綱和線蟲(chóng)綱，雖種類(lèi)不多但感染率非常高，達(dá)到75.86%，混合感染較普通，三種混合感染的占4.55%,大型蟲(chóng)體-長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)的最大感染強(qiáng)度達(dá)到單只動(dòng)物感染12條。本研究主要采用糞便直接涂片檢查蟲(chóng)卵，結(jié)合尸解、驅(qū)蟲(chóng)以及幼蟲(chóng)培養(yǎng)方法，獲得成蟲(chóng)，進(jìn)行一一對(duì)應(yīng)的鑒定，掌握了昆明西郊棲息的樹(shù)鼩攜帶的主要腸道蠕蟲(chóng)感染譜，為今后針對(duì)性開(kāi)展樹(shù)鼩寄生蟲(chóng)病的預(yù)防措施提供了重要的參考數(shù)據(jù)，為實(shí)驗(yàn)樹(shù)鼩寄生蟲(chóng)的控制提供了依據(jù)。其次，在現(xiàn)有的樹(shù)鼩腸道寄生蟲(chóng)研究報(bào)道中，作者很少提供可供借鑒的形態(tài)鑒定特征圖片。

野生樹(shù)鼩多有腸道蠕蟲(chóng)的感染，原因與它在野外的棲息環(huán)境和食性密切相關(guān)。昆明西郊多以次生林和山地森林為主，是野生樹(shù)鼩天然的棲息地，種群數(shù)量比較豐富，樹(shù)鼩為雜食性，以昆蟲(chóng)、果實(shí)和谷物為主，更偏向于昆蟲(chóng)。長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)屬絳蟲(chóng)綱膜殼科(Hymenolepididae)膜殼屬(Hymenolepis)絳蟲(chóng)，為世界性分布，多寄生于鼠類(lèi)小腸，也寄生于人體，是重要的人獸共患寄生蟲(chóng)病原，感染該寄生蟲(chóng)動(dòng)物表現(xiàn)為營(yíng)養(yǎng)不良、貧血、體重減輕，甚至腸阻塞。長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)的生活史必須要經(jīng)過(guò)中間宿主才能完成，中間宿主包括蚤類(lèi)、甲蟲(chóng)、鱗翅目等20余種昆蟲(chóng)，常見(jiàn)的有大黃粉蟲(chóng)、谷娥、印度客蚤；樹(shù)鼩喜食昆蟲(chóng)，尤其是黃粉蟲(chóng)[4]，樹(shù)鼩易攜帶長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)，可能是通過(guò)食入帶有長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)似囊尾蚴的昆蟲(chóng)而被感染。我們?cè)谑獾囊恢粯?shù)鼩小腸中最多取出12條長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)，蟲(chóng)體長(zhǎng)10～18 cm、寬0.3～0.4 cm，蟲(chóng)體塞滿整個(gè)小腸和結(jié)腸，已造成三段腸套疊和腸阻塞，導(dǎo)致動(dòng)物死亡，事實(shí)表明長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)可嚴(yán)重感染樹(shù)鼩并致病，是樹(shù)鼩的寄生蟲(chóng)病病原。以往報(bào)道的長(zhǎng)膜殼絳蟲(chóng)蟲(chóng)體長(zhǎng)多為(20～60) cm，而我們測(cè)量到的較短，可能與樹(shù)鼩體型小有關(guān)。

本次調(diào)查顯示，野生樹(shù)鼩感染奇口線蟲(chóng)的感染率為30.06%，與田保平等[5]報(bào)道的36%的感染率結(jié)果較為接近，在有限的樹(shù)鼩寄生蟲(chóng)調(diào)查研究中都有樹(shù)鼩攜帶奇口線蟲(chóng)的報(bào)道[6]，證明樹(shù)鼩是除了嚙齒類(lèi)動(dòng)物以外奇口線蟲(chóng)的自然宿主。其最明顯的特征是在蟲(chóng)體腹側(cè)有兩行明顯的櫛刺貫穿全身，病理發(fā)現(xiàn)它會(huì)造成小腸慢性炎癥病變。

糞類(lèi)圓線蟲(chóng)蟲(chóng)體非常細(xì)小，蟲(chóng)體分桿狀的自由生活型和絲狀的寄生型，主要宿主是人，蟲(chóng)卵在小腸粘膜內(nèi)發(fā)育孵化，隨糞便排出的有蟲(chóng)卵和桿狀蚴，作者在糞便檢測(cè)中也常看到活動(dòng)的桿狀蚴，與蟲(chóng)卵培養(yǎng)出來(lái)的幼蟲(chóng)一致，它能引起腸粘膜卡他性發(fā)炎，嚴(yán)重時(shí)粘膜損害處有如蜂窩，感染機(jī)體一般有腹瀉、消瘦及其他癥狀。

本次對(duì)樹(shù)鼩檢出的三種主要腸道蠕蟲(chóng)種類(lèi)都屬于嚙齒類(lèi)動(dòng)物腸道寄生蟲(chóng)感染譜范圍之內(nèi)[7]，這是否跟樹(shù)鼩與嚙齒類(lèi)動(dòng)物具有相同的生活環(huán)境和習(xí)性相關(guān)？還需要進(jìn)一步的研究來(lái)證實(shí)；它們對(duì)樹(shù)鼩均具有一定的致病性，形態(tài)特征也比較明顯。因

此，對(duì)野外引入的新種源必須隔離檢疫，開(kāi)展針對(duì)性的藥物驅(qū)蟲(chóng)，才能有效地控制腸道寄生蟲(chóng)病的傳播。

致謝：衷心感謝云南省畜牧獸醫(yī)研究院黃德生研究員在寄生蟲(chóng)鑒定方面給予的悉心指導(dǎo)！

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〔修回日期〕2014-10-24