多指標綜合評分法優選補正續骨顆粒最佳提取工藝

多指標綜合評分法優選補正續骨顆粒最佳提取工藝

田原，樊暉，關雪峰*， 張錫瑋，孫科峰

(遼寧中醫藥大學附屬醫院，沈陽 110032)

摘要：目的優選補正續骨顆粒的提取工藝。方法采用L9(34)正交試驗法，以出膏率為考察指標，優選最佳水提取工藝，以川續斷皂苷Ⅵ與柚皮苷總含量及出膏率綜合評分為評價指標，優選最佳乙醇提取工藝。結果最佳水提取工藝為加6倍量水，提取2次，每次提取1 h。最佳乙醇提取工藝為加6倍量60%乙醇，提取3次，每次2 h。結論優選的提工藝穩定可行，適用于補正續骨顆粒的工業化生產。

關鍵詞：補正續骨顆粒；川續斷皂苷Ⅵ；柚皮苷；正交試驗

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2015.06.014

中圖分類號：R284.2文獻標志碼：A

文章編號：2095-6258(2015)06-1134-03

基金項目：遼寧省科學技術計劃項目(2013226012)；遼寧中醫藥大學“杏林學者青藍工程”。

作者簡介：田原( 1969-) ，女，副主任藥師，主要從事中藥質量分析與新藥開發。

收稿日期:(2015-02-13)

*通信作者：關雪峰, 電話-(024)31961111，電子信箱-lnzygxf@163.com

Optimization of extraction technology for Buzheng Xugu granules by multi-index comprehensive evaluation method

TIAN Yuan，FAN Hui，GUAN Xuefeng*，ZHANG Xiwei, SUN Kefeng

(Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110032,China)

Abstract：ObjectiveTo optimize extraction technology of Buzheng Xugu granules. MethodsOrthogonal experimental design was adopted, dry extract rate as evaluation index, to optimize water extraction technology, contents of asperosaponin；naringin and dry extract as evaluation index，to optimize ethanol extraction technology. ResultsOptimal water extraction technology was extracted 2 times with 6 times the amount of water for 1 h per time; optimal ethanol extraction technology was extracted 3 times with 6 times the amount of 60% ethanol for 2 h per time. ConclusionThis optimized extraction technology was stable, feasible, suitable for Buzheng Xugu Granules production.

Keywords：Buzheng Xugu granules; asperosaponin; naringin; orthogonal experimental design

補正續骨丸為遼寧中醫藥大學附屬醫院院內制劑，由制何首烏、菟絲子、鹿茸、續斷、合歡花、骨碎補等8味藥組成，具有壯腰補腎、強壯筋骨等功效，主要用于治療慢性挫傷，腰肌勞損等療效顯著。本課題擬將補正續骨丸開發成更加便于攜帶和服用的補正續骨顆粒。根據方中藥味所含有效成分的理化性質，方中枸杞子采用水煎煮法進行提取；鹿茸采用粉碎后原粉加入的方法，制何首烏等其他藥味采用乙醇提取的方法，本文采用L9(34)正交試驗法，以出膏率及有效成分含量相結合為考察指標，優選最佳水提取工藝和醇提取工藝。

1材料

1100型高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)，數顯恒溫水浴鍋(上海躍進醫療器械有限公司)，AE-240型電子分析天平(梅特勒-托利多公司)，HN101-3A型電熱鼓風干燥箱(南通滬南科學儀器有限公司)。鹿茸等藥材購自河北安國市神禾中藥飲片有限責任公司，經遼寧中醫藥大學翟延君教授鑒定，均符合2010年版《中國藥典》相關項下要求；川續斷皂苷Ⅵ對照品(上海源葉生物科技有限公司，批號20130126，純度HPLC≥98%)，柚皮苷(中國藥品生物制品檢定所，批號110722-200309)，乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2．1枸杞子水提取工藝考察[1]2．1．1正交試驗設計以出膏率為考察指標，考察加水量，煎煮時間，煎煮次數對提取結果的影響，采用四因素三水平L9(34) 正交試驗法優選最佳水提取工藝，因素與水平見表1。

表1　水提取正交試驗因素水平表

2．1．2干膏率的測定稱取枸杞子藥材共9分，每分40 g，分別按各因素水平煎煮，濾過，合并提取液，濃縮，置干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥至恒重，精密稱定質量，計算干膏率。

2．1．3試驗結果正交試驗結果見表2，表3。

表2　正交設計表及試驗結果

表3　方差分析表

由表2、表3結果可知，各因素均不是顯著性因素，由直觀分析，C因素即提取次數對結果影響最大，提取1次與提取2次差別較大，但提取2次與提取3次差別很小，而A、B因素各水平差別均較小，因此，結合大生產實際，為節約成本，以A1B1C2作為最佳提取工藝，即加水6倍量，提取2次，每次提取1 h。

2．1．4驗證實驗取藥材40 g，共3分，按以上工藝操作，測定出膏率。結果平均出膏率分別為26．29%，RSD 1．8%。表明水提取工藝穩定，重現性好。

2．2制何首烏等醇提取工藝考察[2-3]

2．2．1正交試驗設計以川續斷皂苷Ⅵ 、柚皮苷[4]總含量及干膏率綜合評分作為考察指標，乙醇濃度，加醇量，提取次數，提取時間為影響因素，采用四因素三水平L9(34) 正交試驗法，優選最佳提取工藝。因素水平表見表4。

表4　乙醇提取正交試驗因素水平表

2．2．2川續斷皂苷Ⅵ含量測定

2．2．2．1色譜條件采用Agilent TC-C18色譜柱(4．6 mm×250 mm，5 μm)，乙腈-水(31∶69)為流動相；檢測波長為212 nm；流速1．0 mL/min，柱溫25 ℃。

2．2．2．2對照品溶液制備取川續斷皂苷Ⅵ對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含有對照品0．5 mg的溶液。

2．2．2．3供試品溶液制備取研細干膏0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，超聲30 min,濾過,取濾液備用。

2．2．2．4測定法分別精密吸取對照品與供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測定，計算含量。

2．2．2．5方法學考察經線性范圍考察，川續斷皂苷Ⅵ進樣量在2．078～12．468 μg與峰面積呈良好線性關系，回歸方程Y=156．99X-12．09(r=0．999 9)；精密度試驗結果RSD 0．9%，表明儀器精密度良好；8 h穩定性試驗結果RSD 0．8%，表明供試品溶液在8 h內穩定性較好；重復性試驗結果RSD 1．1%，表明本方法重復性較好；平均加樣回收率97．82%，RSD 2．8%。

2．2．3柚皮苷含量測定

2．2．3．1色譜條件采用Agilent TC-C18色譜柱(4．6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-水(38∶62)為流動相；檢測波長為283 nm；流速1．0 mL/min，柱溫25 ℃。

2．2．3．2對照品溶液制備取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含有對照品0．05 mg的溶液。

2．2．3．3供試品溶液制備取研細干膏1．0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，超聲30 min，濾過，取濾液備用。

2．2．3．4測定法分別精密吸取對照品與供試品溶液各20 μL,注入高效液相色譜儀，測定，計算含量。

2．2．3．5方法學考察柚皮苷進樣量在0．27～1．62 μg與峰面積呈良好線性關系，線性回歸方程Y=2 325X+60．1(r=0．999 7)；精密度試驗結果RSD 1．2%，表明精密度良好；穩定性試驗結果RSD 1．0%，表明供試品溶液在8 h內穩定；重復性試驗結果RSD 2．1%，表明本方法重復性較好；平均加樣回收率98．01%，RSD 2．3%。

2．2．4試驗結果按處方比例取藥材，每分136 g，共9分，按照因素水平表和L9(34)正交表進行試驗。將每分提取液濃縮，70 ℃減壓干燥，得干膏。以川續斷皂苷Ⅵ及柚皮苷總含量及干膏率作為考察指標，進行綜合評價(含量和干膏率的權重系數分別為0．7、0．3)優選最佳提取工藝。綜合評分方差分析結果見表5。

注: #P<0．05

由表5中結果可知，A、D因素為顯著性因素，各因素主次為D>A>C>B，由直觀分析可知，最佳工藝為A2B1C2D3，即加6倍量60%乙醇，提取3次，每次2 h。

2．2．5驗證試驗按處方比例稱取處方量藥材，共3分，按最佳提取工藝進行驗證試驗，結果川續斷皂苷Ⅵ及柚皮苷的平均提取量分別為17．66、3．01 mg/g，RSD分別為2．1%、2．8%，平均干膏率27．64%，RSD為1．7%，表明該提取工藝穩定可行。

3結論

川續斷皂苷Ⅵ為方中續斷指標性成分，柚皮苷為骨碎補指標性成分，二者與補正續骨顆粒功能主治密切相關，因此采用二者總含量為考察指標。曾嘗試采用HPLC同時測定川續斷皂苷Ⅵ[5-10]和柚皮苷[11-15]，結果分離度不好，陰性液有干擾，故分別測定。

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