黃龍止咳口服液對模型動物炎癥及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響

黃龍止咳口服液對模型動物炎癥及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響

陶迪1，司振陽2*，隆紅艷2,張驃2

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京 210029;2.南京市中醫(yī)院，南京 210001)

摘要：目的研究黃龍止咳口服液的抗炎、抗過敏作用。方法建立角叉菜膠致大鼠足趾腫脹模型，測量并比較致炎后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠的足趾周長，觀察黃龍止咳口服液的抗炎作用。采用2，4-二硝基氯苯(DNCB)背部皮下致敏、耳廓發(fā)敏的方法建立遲發(fā)型超敏反應(yīng)小鼠模型，觀察黃龍止咳口服液的抗過敏作用。結(jié)果抗炎實(shí)驗(yàn)表明，黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致大鼠足爪炎性水腫有顯著抑制作用，能抑制炎癥的發(fā)展，加速其消退，并顯示一定的量-效關(guān)系。抗過敏實(shí)驗(yàn)表明，與對照組比較,黃龍口服液各劑量組均可使DNCB所致的小鼠耳腫脹程度明顯減輕。結(jié)論黃龍止咳口服液具有顯著的抗炎和抗過敏作用。

關(guān)鍵詞：黃龍止咳口服液;抗炎;抗過敏;祛風(fēng)解痙;宣肺化痰;清熱降逆

DOI::10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.07.019

中圖分類號：R392.8文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)07-0710-03

基金項(xiàng)目:江蘇省中醫(yī)藥局科技項(xiàng)目(LZ13100)。

作者簡介:陶迪(1988-),女,碩士研究生，主要從事小兒肺系疾病研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：張瑞彬2014-10-20)

*通信作者:司振陽,電話-1391295104,電子信箱-sizhenyang@126.com

Huanglongzhike oral liquid on model animal inflammation and influence

of delayed-type hypersensitivity

TAO Di1,SI Zhenyang2*,LONG Hongyan2,ZHANG Biao2

(1.Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210029，China;

2.Chinese Medicine Hospital of Nanjing，Nanjing 210001,China)

Abstract:ObjectiveTo study the anti-inflammatory,anti-allergic effect of huanglong cough oral liquid.MethodsEstablish carrageenan to toes swelling of rats’ model,measure and compare the different time points after inflammatory rats toes circumference,anti-inflammatory effect of observation of huanglong cough oral liquid.The 2.4-2 nitrochlorobenzene (DNCB) back under the skin sensitization,auricle of sensitive method to establish delayed-type hypersensitivity in mice model,to observe the allergy of huanglong cough oral liquid.ResultsAnti-inflammatory experiments show that the huanglong cough oral liquid diagonal inflammatory edema caused by carrageenan in rats foot claw has significant inhibitory effect,can restrain the development of inflammation,accelerate its faded,and displays a certain amount-effect relationship.Allergy experiments show that,compared with control group,the yellow dragon oral liquid in each dose group can make the mouse ear swelling caused by DNCB significantly reduce.ConclusionHuanglong cough oral liquid has significant anti-inflammatory and anti-allergic effects.

Keywords:Huanglongzhike oral liquid;anti-inflammatory;anti-allergy;expelling wind to relieve convulsion;ventilating the lung and resolving phlegm;reducing fever and lowering the adverse

黃龍止咳口服液由炙麻黃、地龍、杏仁、紫蘇子、桑白皮、前胡、旋覆花、蟬蛻共8味藥組成,具有祛風(fēng)解痙、宣肺化痰、清熱降逆之功。臨床研究結(jié)果表明[1]，黃龍止咳口服液治療小兒咳嗽變異性哮喘(風(fēng)熱夾痰證)在改善患兒總體療效、主癥、次癥及證候等諸方面均優(yōu)于對照組。為進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以冀探明其臨床療效的藥理學(xué)基礎(chǔ)及作用機(jī)理，本文報(bào)告黃龍止咳口服液的抗炎及抗遲發(fā)型超敏反應(yīng)的作用。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1動物及分組SPF級SD大鼠，60只，雄性，體質(zhì)量(180±10)g；SPF級ICR小鼠,60只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，均購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，許可證號:SCXK(京)2012-0001，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。大鼠與小鼠各隨機(jī)均分為6組:空白對照組，黃龍止咳口服液低、中、高劑量組，先聲咳喘寧組和布地奈德組，每組10只。

1.2試驗(yàn)藥品與儀器黃龍止咳口服液由炙麻黃、地龍、杏仁、紫蘇子、桑白皮、前胡、旋覆花、蟬蛻共8味藥組成,中藥湯劑飲片來源于南京市中醫(yī)院中藥房,用蒸餾水煎至生藥1.5 g/mL，實(shí)驗(yàn)時(shí)以蒸餾水按劑量配制成所需濃度。先聲咳喘寧(江蘇先聲制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字Z32020967)，普米克令舒(吸入用布地奈德混懸液，批號3144771)，角叉菜膠(美國SIGMA公司，批號1001660420)，2，4-二硝基氯苯(DNCB，南京都萊生物技術(shù)有限公司，批號：J130920)，超聲霧化器402AI型(江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司)，METTLER TOLEDO電子天平PL83-S/01(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司制造)，打孔器。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響造模方法[2]:實(shí)驗(yàn)前每只大鼠右后爪踝關(guān)節(jié)處用油性筆畫一清晰橫線，先測出各鼠正常的鼠爪周長。各組藥物以蒸餾水配成相應(yīng)濃度的混懸液，空白對照組予等體積蒸餾水，布地奈德組配等量生理鹽水霧化吸入，各組均給藥6 d，1次/d。第6天各組(正常組除外)均在給藥1 h后于右后肢足跖部皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL/只，造模成功標(biāo)準(zhǔn)以與正常組腫脹度比較有顯著差異為準(zhǔn)，誘發(fā)足趾炎性腫脹。致炎前及致炎后1，2，4，6 h分別測量大鼠右后足周長，以致炎前后周長之差為腫脹指標(biāo)。腫脹度計(jì)算公式為：腫脹度=致炎后足趾周長-致炎前足周長。

2.2對DNCB所致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響造模方法[3]：各組灌胃給藥1次/d，連續(xù)9 d。采用首次給藥第2天小鼠背部皮下注射1.25% DNCB丙酮液20 μL/只致敏，末次給藥后1 h，在小鼠右耳兩面涂抹1.25% DNBC丙酮液20 μL/只進(jìn)行攻擊,誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型。攻擊后24 h，頸椎脫臼處死小鼠，用直徑8 mm打孔器于左右耳相同部位打下圓形耳片，精密稱重后分別計(jì)算小鼠耳腫脹度及腫脹抑制百分率。計(jì)算公式:腫脹度(mg)=右耳片重量-左耳片重量;抑制率(%)=(空白對照組平均腫脹度-各給藥組平均腫脹度)/空白對照組平均腫脹度×100%。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響結(jié)果見表1。黃龍高劑量組在致炎后1、2、4、6 h抗炎作用均優(yōu)于黃龍中、低劑量組，表明隨著黃龍劑量的增加，其抗炎作用在逐漸增強(qiáng)，提示黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致大鼠足爪炎性水腫有顯著抑制作用，能抑制炎癥的發(fā)展,加速其消退,并顯示一定的量-效關(guān)系。

表1　黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響 ± s, n=10)

注：與空白對照比較，##P<0.01

3.2黃龍止咳口服液對2，4-二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響結(jié)果見表2。與空白對照組比較,黃龍各劑量組均可使DNCB所致的小鼠耳腫脹程度明顯減輕。說明在致敏前至激發(fā)后全程給藥的情況下，黃龍止咳口服液對DNCB所致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)有顯著抑制作用，隨劑量加大，作用增強(qiáng)。

組 別劑量/(g生藥/kg)腫脹度/mg抑制率/%空白對照組 —12.4±2.7 黃龍低劑量組8.4610.3±1.6# 16.9黃龍中劑量組16.929.4±1.7##24.2黃龍高劑量組33.848.1±1.4##34.6先聲咳喘寧組6.1mL/kg7.6±1.6##38.7布地奈德組 0.3mg/kg11.9±2.2 4.1

注：與空白對照比較，#P<0.05,##P<0.01

4討論

目前對咳嗽變異性哮喘(CVA)的發(fā)病機(jī)制尚不明確，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，兒童CVA的發(fā)病機(jī)制可能為[4]變應(yīng)原致敏引起的多種炎癥細(xì)胞、炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子共同參與相互作用所致的慢性非特異性炎癥，其間接表現(xiàn)為氣道高反應(yīng)性。臨床上用抗生素治療無效，用支氣管擴(kuò)張劑可緩解。 黃龍止咳口服液是治療小兒咳嗽變異性哮喘(風(fēng)熱夾痰證)的臨床經(jīng)驗(yàn)用方。現(xiàn)代藥理學(xué)[5]認(rèn)為，麻黃中麻黃堿是平喘的有效成分，有松弛支氣管平滑肌的作用，而揮發(fā)油具有很強(qiáng)的抑制流感病毒的作用。孫曉東等[6]通過動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)地龍對豚鼠過敏性哮喘有部分緩解作用，而且地龍作為一種外源蛋白，在發(fā)揮平喘功能的同時(shí)不會引起過敏反應(yīng)；杏仁的胃蛋白酶水解產(chǎn)物及苦杏寧球蛋白和苦杏寧白蛋白，具有明顯抑制實(shí)驗(yàn)動物的炎癥反應(yīng)的作用[7]。蘇子[8]具有祛痰鎮(zhèn)咳的作用，并能使過敏反應(yīng)受到抑制。馮冰虹等[9]證實(shí)，桑白皮的氯仿提取物和堿提取物鎮(zhèn)咳、祛痰作用明顯。前胡經(jīng)化學(xué)純化后可提取多種有效化合物成分，其中最為主要的化合物為香豆素類[10]，有活血平壓、降氣化痰等功效，臨床多用于治療風(fēng)熱郁肺、干咳痰黃、胸悶嘔逆等癥[11]。蟬蛻[12]對組胺參與的致喘模型有明顯的平喘作用，緩解慢性炎癥、改變“微觀血瘀”狀態(tài)，進(jìn)而緩解支氣管平滑肌的痙攣。旋覆花黃酮[13]有顯著保護(hù)由組胺引起的豚鼠支氣管痙攣性哮喘的作用，同樣有對抗組胺引起的離體豚鼠氣管痙攣的作用。

角叉菜膠致大鼠足腫脹模型是一個(gè)經(jīng)典的炎癥模型，常用于抗炎藥物的篩選及評價(jià)，其應(yīng)用十分廣泛。遲發(fā)型超敏反應(yīng)運(yùn)動模型類似于人類發(fā)生的病理生理過程，是評價(jià)藥物療效的較為理想的模型之一。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)該藥的功能主治進(jìn)行了抗炎、抗過敏等藥效學(xué)試驗(yàn)研究，設(shè)置高、中、低3個(gè)劑量組，結(jié)果黃龍各劑量組均可明顯減輕角叉菜膠所致的大鼠足腫脹及DNCB所致的小鼠耳腫脹程度，與對照組比較有顯著性差異；中、高劑量組給藥2 h后可明顯減輕角叉菜所致的大鼠足腫脹，與對照組比較差異有顯著性。隨著黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致的大鼠足腫脹及DNCB所致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)抑制作用不斷增強(qiáng)，顯示一定的量-效關(guān)系。提示黃龍止咳口服液具有良好的抗炎、抗過敏作用，為其臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]唐為紅.黃龍合劑治療小兒咳嗽變異性哮喘的臨床研究[J].中醫(yī)兒科雜志,2012,8(6):18-21.

[2]肖百全,朱少璇,楊威，等.角叉菜膠致大鼠足腫脹模型探討及其機(jī)制研究[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2008,23(3):63-65.

[3]李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].2版.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006:875.

[4]洪建國.咳嗽變異性哮喘的發(fā)病機(jī)制[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2010,25(16):1205-1206.

[5]聶樹祿,趙兵,姚黎.麻黃堿霧化吸入治療毛細(xì)支氣管炎101例[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2002,11(18):1771-1772.

[6]孫曉東,房澤海.鮮地龍平喘活性蛋白可能致敏性的研究[J].科技資訊,2009,14(5):6-7.

[7]劉青云.中藥藥理學(xué)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:294-295.

[8]何潔,肖堅(jiān).蘇子降氣湯治療老年性喘息型支氣管炎慢性遷延期的臨床觀察[J].臨床醫(yī)學(xué),2002,11(9):70-71.

[9]馮冰虹,蘇浩沖,楊俊杰.桑白皮丙酮提取物對呼吸系統(tǒng)的藥理作用[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2005,21(1):47-49.

[10]陳立麗.前胡的藥用與療效分析[J].中國科技博覽,2013,6(15):249.

[11]張雪梅.前胡屬植物的系統(tǒng)學(xué)研究進(jìn)展[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,11(8):156-158.

[12]徐樹楠,干永梅,張美玉,等.蟬蛻對豚鼠離體氣管環(huán)的作用研究[J].中藥藥理與臨床,2008,24(2):41-42.

[13]耿紅梅,張嫡群.旋覆花屬植物黃酮類化合物的研究概況[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(9):2126-2128.