半枝蓮總黃酮對(duì)反復(fù)腦缺血再灌注小鼠腦能量代謝的影響

半枝蓮總黃酮對(duì)反復(fù)腦缺血再灌注小鼠腦能量代謝的影響

馬霄1，邵南齊1，陳曉敏1，苗明三2*

(1.鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，鄭州 450064;2.河南中醫(yī)學(xué)院，鄭州 450008)

摘要：目的探討半枝蓮總黃酮對(duì)反復(fù)腦缺血再灌注小鼠腦能量代謝的影響。方法將小鼠隨機(jī)分為6組，采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉,建立反復(fù)腦缺血再灌注致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠模型。測(cè)定LD及TchE、LDH、ATP活力。結(jié)果與模型組相比，半枝蓮總黃酮中劑量組可顯著提高小鼠腦TchE活力(P<0.01)；半枝蓮總黃酮大、中劑量組均能顯著、明顯降低小鼠腦LD含量(P<0.01，P<0.05)，半枝蓮總黃酮大、中劑量組均可顯著、明顯提高小鼠腦LDH活力(P<0.01,P<0.05)；半枝蓮總黃酮大、中劑量組均能顯著、明顯提高小鼠腦Na+-K+-ATP、Ca2+-Mg2+-ATP、Ca2+-ATP酶活力(P<0.01，P<0.05)。結(jié)論半枝蓮總黃酮對(duì)反復(fù)腦缺血再灌注小鼠引起的腦神經(jīng)損傷具有保護(hù)作用，機(jī)制可能與其減輕腦水腫、改善腦細(xì)胞能量代謝有關(guān)。

關(guān)鍵詞：半枝蓮總黃酮；腦缺血再灌注；能量代謝；小鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.04.027

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)04-0399-03

基金項(xiàng)目:河南省重大公益性利研計(jì)劃(081100911000)；鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校重點(diǎn)課題(12002)。

作者簡(jiǎn)介:馬霄(1981-)，女，碩士研究生，講師，主要從事藥理學(xué)及中藥藥理學(xué)的教學(xué)與研究。

*通信作者:苗明三，電話-(0371)65362546，電子信箱-miaomingsan@163.com

Total flavonoids of scutellaria barbata on repeated cerebral ischemia

reperfusion for mice’s energy metabolism of brain

MA Xiao1,SHAO Nanqi1,CHEN Xiaomin1,MIAO Mingsan2*

(1.Zhengzhou Shuqing Medical College,Zhengzhou 450064,China;

2.Henan University of TCM,Zhengzhou 450008,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the effect of total flavonoids of scutellaria barbata on repeated cerebral ischemia-reperfusion for energy metabolism of mice.MethodsThe mice were randomly divided into six groups.Using bilateral common carotid arteries clip to establish repeated cerebral ischemia reperfusion mice model with learning and memory disorder.Determinate the activity of LD and TchE,LDH,ATP.ResultsCompared with the model group,medium dose of total flavonoids of scutellaria barbata group can significantly improve the mouse TchE activity (P<0.01);Large and medium dose of total flavonoids of scutellaria barbata group can significantly and obviously reduce mouse cerebral LD content (P<0.01,P<0.05);Large and medium dose of total flavonoids of scutellaria barbata group can obviously improve the mouse LDH activity (P<0.01,P<0.05);Large and medium dose of total flavonoids of scutellaria barbata group could significantly increase the mouse Na+-K+-ATP,Ca2+-Mg2+-ATP,Ca2+-ATP enzyme activity (P<0.01,P<0.05).ConclusionTotal flavonoids of scutellaria barbata have protection effect of brain nerves injury which caused from repeated cerebral ischemia-reperfusion mice,its mechanism could have related to relieve cerebral edema and improve the energy metabolism of brain.

Keywords:total flavonoids of scutellaria barbata;repeated cerebral ischemia-reperfusion;energy metabolism;mice

腦缺血是臨床常見(jiàn)的腦血管疾病之一[1]，局部的腦缺血障礙，會(huì)使腦缺血、缺氧，可造成腦細(xì)胞損傷，腦細(xì)胞缺血最易受損的是腦神經(jīng)，而腦神經(jīng)功能與腦能量代謝密切相關(guān)[2]。半枝蓮為唇形科植物半枝蓮Scutellaria barbata D.Don的干燥全草，半枝蓮總黃酮是半枝蓮的提取物，具有清熱解毒、散瘀止血、活血止痛、利尿消腫、抗癌等功效[3-4]。本研究通過(guò)結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈造反復(fù)腦缺血模型，旨在探討半枝蓮對(duì)小鼠腦能量代謝的影響。

1實(shí)驗(yàn)材料

半枝蓮購(gòu)自張仲景大藥房，半枝蓮總黃酮為鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供，采用醇提法提取，半枝蓮總黃酮含量為60%；養(yǎng)血清腦顆粒(當(dāng)歸、川芎、白芍、熟地黃、鉤藤、雞血藤、夏枯草、決明子、珍珠母、延胡索、細(xì)辛等),天津天士力制藥股份有限公司；乙酰膽堿酯酶(TChE)試劑盒，乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，乳酸(LD)測(cè)試盒，ATP酶測(cè)試盒，水合氯醛，天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心；甲醛溶液，煙臺(tái)三和化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉注射液，四川科倫藥業(yè)股份有限公司；UV-2000紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，南京利爾實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司。昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量19～22 g，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。

2實(shí)驗(yàn)方法

將昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組，雌雄分養(yǎng)，分別為空白組、模型組、養(yǎng)血清腦顆粒組(3 g/kg)、半枝蓮總黃酮大、中、小劑量組(0.4，0.2,0.1 g/kg，用0.5%CMC配制)。采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷法造小鼠缺血再灌注模型。其中，空白組和模型組給予同體積的生理鹽水，1次/d，連續(xù)給藥2周。2周之后，將小鼠用10%水合氯醛麻醉，仰位固定在鼠板上，行頸部切口并分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈?？瞻捉M僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不阻斷之。其余各組按上述方法，并用動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，阻斷血流10 min，之后松開(kāi)動(dòng)脈夾使血液再灌注10 min。術(shù)后創(chuàng)口以碘伏消毒并用抗生素消炎，縫合傷口。上述小鼠術(shù)后2 d，對(duì)其斷頭、取腦，并取一半腦進(jìn)行稱重，加9倍的生理鹽水制成10%的腦勻漿，備用測(cè)定LD、及TchE、LDH、ATP活力，上述測(cè)定方法均嚴(yán)格按照各自的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

半枝蓮總黃酮對(duì)反復(fù)腦缺血再灌注小鼠腦TChE、LDH、LD活力及腦ATP酶活力的影響，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　半枝蓮總黃酮對(duì)反復(fù)腦缺血再灌注小鼠腦TChE、LDH、LD及腦AT酶活力的影響 ± s, n=10)

注：與模型組相比，##P<0.01，#P<0.05

4討論

研究表明，腦神經(jīng)功能與腦能量代謝密切相關(guān)，局部的腦缺血障礙，會(huì)造成腦缺血、缺氧[5]。研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血發(fā)生時(shí)，腦血流一旦完全阻斷[6]，在短短幾秒內(nèi)腦神經(jīng)元的代謝就會(huì)受影響，2 min左右腦電活動(dòng)將會(huì)停止，6 min左右腦的能量代謝及離子平衡將會(huì)被破壞，致使ATP大量耗竭、腦細(xì)胞膜的離子泵功能出現(xiàn)障礙[7]，期間有K+外流，Na+、Cl-和水則大量進(jìn)入腦細(xì)胞內(nèi)，如果腦缺血時(shí)間持續(xù)5～10 min，腦神經(jīng)元會(huì)發(fā)生不可逆的損害[8]。大量研究證實(shí)，腦能量代謝直接反映腦神經(jīng)功能。在雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎致腦缺血模型的研究中發(fā)現(xiàn)，腦部的嚴(yán)重缺血會(huì)導(dǎo)致LD增加,LDH以及TChE活力下降，細(xì)胞膜的Na+-K+-ATP酶活性降低[9]，致使ATP耗竭，造成腦細(xì)胞能量代謝嚴(yán)重障礙，最終損傷腦功能。

半枝蓮之名最早見(jiàn)于《外科正宗》[10]，用治毒蛇傷人[11]?，F(xiàn)代研究表明，半枝蓮對(duì)組織胺引起的平滑肌收縮、咳痰有很好的對(duì)抗作用[12]，能夠減少泌尿系統(tǒng)感染機(jī)會(huì)、降低血糖[13]，對(duì)胃腸平滑肌亦有明顯的推動(dòng)作用[14]，還能促進(jìn)細(xì)胞免疫、抑制急性粒細(xì)胞性白血病血細(xì)胞[15]，另外，對(duì)肝腹水肝癌細(xì)胞也有一定的抑制作用[16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示， 半枝蓮總黃酮對(duì)腦細(xì)胞能量代謝具有一定的改善作用。