大黃水提液對戊四唑癲癇大鼠的腦保護作用

大黃水提液對戊四唑癲癇大鼠的腦保護作用

張慧杰1，張文風1*，楊焱2

(1.長春中醫藥大學,長春 130117;2.吉林省腫瘤醫院，長春 130012)

摘要：目的觀察大黃對戊四唑(pentylenetetrazol，PTZ)癲癇大鼠的腦保護作用。方法采用戊四唑復制癲癇大鼠模型,給予大黃4、2、1 g/kg，灌胃1次/d。觀察大鼠的驚厥發作頻率、發作潛伏時間及行為變化。測定腦組織超氧化物歧化酶(superoxide,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷光甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性。結果大黃可延長戊四唑癲癇大鼠發作潛伏期，大約1 min，縮短持續時間2 min左右。提高腦組織SOD含量10 U/mg、GSH-PX活性10 U/mg，降低MDA水平1 nmol/mg。結論大黃可以對抗戊四唑大鼠癲癇發作及腦組織氧化，對癲癇有一定的防治作用。

關鍵詞：大黃；癲癇；腦保護；大鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.025

中圖分類號：R285.5文獻標志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)10-1053-03

基金項目:吉林省中管局資助項目(2010-008)。

作者簡介:張慧杰(1989-)，女，碩士研究生，主要從事中藥復方的配伍及機理研究。

收稿日期:(責任編輯：趙玉芝2015-07-06)

*通信作者:張文風,電話-13154352263，電子信箱-wenfzh@163.com

Protective effects on brain of water extract of rhubarb after epilepsy by pentylenetetrazol in rats

ZHANG Huijie1,ZHANG Wenfeng1*,YANG Yan2

(1.Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China;

2.Tumor Hospital of Jilin Province,Changchun 130012,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the protective effects on brain of rhubarb after epilepsy by pentylenetetrazol.MethodsA epilepsy model on rats was establ-ished by injecting pentylenetetrazol,the rats were respectively treated with rhubarb 4 g/kg，2 g/kg and 1 g/kg,one time a day.Observing the frequency of convulsions attacking on rats,the incubation time and behavioral changes.The brain tissue superoxide (SOD),malondialdehyde (MDA) and glutathione peroxidase (GSH-Px) activity were measured.ResultsRhubarb could extend the incubation period of rats abou 1 minute after Epilepsy by pentylenetetrazol,reduce the duration of about 2 minutes,increase the activity of SOD of 10 U/mg,GSH-Px of 10 U/mg and decrease MDA content of 1 nmol/mg.ConclusionRhubarb could fight epilepsy by pentylenetetrazol in rats and oxidation of brain tissue.It is proved that rhubarb can obviously prevent and cure epilepsy.

Keywords:rhubarb;epilepsy;brain protection;rat

大黃味苦性寒，具有瀉熱通便，消散癰腫，清熱燥濕，逐瘀通經的功效[1]。張錫純解：“大黃能開心下熱痰以愈瘋狂，降腸胃熱實以通燥結，其香竄透竅之力又兼利小便”[2]。《神農本草經》謂大黃有“蕩滌腸胃,推陳致新”之妙。能刺激胃腸道的蠕動，產生瀉下作用，雖性寒主治熱性便秘，但經合理的配伍，制性取用，臨床對寒秘、氣結秘、血結秘、食積秘、陰血虛秘均有顯著療效[3]。《醫方集解》中記載:“大黃苦寒峻猛，能下燥結而去瘀熱，加以蒸曬，則藥性緩和。”現代藥理研究發現，大黃具有保肝利膽、活血的作用，可以預防和改善乙型肝炎的發作[4]，具有抗菌作用,對多種菌種有抑制作用[5]，能夠預防和避免肝性腦病的發生[6]。臨床可治療腸梗阻、急性胰腺炎、腎病、急性呼吸窘迫綜合征、皮膚病、新生兒高膽紅素血癥[7]。癲癇是神經系統常見的一種疾病，由神經元異常放電所導致，雖然國內研究學者也指出大黃可有效減輕腦水腫，預防腦缺血的發生，臨床應用可防治癲癇發作[8-9]，但對其作用機制研究甚少，本研究旨在通過戊四唑所致的癲癇大鼠模型對大黃的抗癲癇作用及機理進行初步研究，為癲癇的治療提供更多的思路。

1實驗材料

大黃水煎液(大黃飲片購于北京同仁堂大藥房,長春中醫藥大學藥學院王淑敏教授對藥品質量進行了嚴格鑒定。水提液的制備:大黃飲片100 g，水煎煮3次，第1次加水10倍量，煎煮2 h;第2次和第3次加水8倍量，煎煮2 h，合并水煎液，濾過，加熱高溫濃縮至每毫升含生藥1 g，備用。);戊四唑(北京三博遠志生物技術有限公司)；士的寧注射液(天津市人民制藥廠)。健康雄性Wistar大鼠，體質量(240±20) g，由吉林大學實驗動物中心提供，動物合格證號:SCXK(吉)2003-0007。SOD、MDA、GSH-PX試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)。高速冷凍離心機(安徽中科中佳科學儀器有限公司)；高速勻漿機(上海佛魯克流體機械有限公司)；721型分光光度計(上海精密儀器廠)；FA1004型號電子天平(上海精科儀器有限公司)。

2實驗方法

2.1模型制備參考Diehl的PTZ致癇方法[10]復制癲癇模型。取健康雄性大鼠，皮下注射PTZ，劑量35 mg/kg，1次/d。

2.2觀察指標觀察大鼠的行為，記錄癲癇發作強度、發作時間以及持續時間。癲癇發作的分級標準按Smialowki癲癇的發作標準分級。0級：大鼠無任何反應；1級:面部運動，鼻子抽動，點頭，奔跑；2級：雙前肢痙攣；3級：前肢痙攣伴活動后退；4級:全身痙攣，伴后退行為及摔倒；5級:活動后摔倒，強直發作。連續3次腹腔注射PTZ后，均表現為4～5級的發作，為點燃成功。此時PTZ注射由每天1次改為間隔3 d 1次,劑量不變，以維持點燃效應，作為大鼠模型成功。

2.3分組給藥將癲癇模型大鼠40只隨機分為4組,即模型組和中藥大黃高劑量組、中劑量組、低劑量組，并取10只同批次大鼠作為正常對照組。大黃組灌胃給予大黃水提液4、2、1 g/kg ，模型組及正常組灌胃給予等體積的生理鹽水，1次/d，連續灌胃14 d。

2.4取材檢測實驗期滿后，將大鼠斷頭取腦，用濾紙擦干殘血，用分析天平稱重,按1∶9(W/V)加入生理鹽水，勻漿器勻漿后，3 000 r/min離心15 min，吸取上清液，制成10%腦組織，放入-20 ℃冰箱冷凍保存待用。采用化學比色法測定SOD、MDA、GSH-PX活性,操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

3結果

3.1大黃對PTZ大鼠驚厥潛伏期的影響見表1。

表1　大黃對PTZ大鼠驚厥潛伏期的影響 ± s)

注：與模型組比較，#P<0.05

3.2大黃對PTZ大鼠腦組織SOD、MDA、GSH-PX的影響見表2。

組 別SOD/(U/mg)MDA/(nmol/mg)GSH-PX/(U/mg)正常組 65.09±6.15#3.23±0.46#59.20±5.16#模型組 38.36±4.83 4.57±0.56 40.75±3.10 大黃低劑量組40.23±6.43 4.45±0.35 43.36±5.74 大黃中劑量組46.58±6.12#4.32±0.41#46.21±4.58#大黃高劑量組53.40±6.42#3.84±0.73#51.16±5.47#

注：與模型組比較，#P<0.05

4討論

《素問·奇病論》曰：“人生而有病癲疾者……病名為胎病，此得之在母腹中時，其母有所大驚，氣上而不下，精氣并居，故令子發為癲疾也。”《諸病源候論·癲狂候》指出：“癲者，猝發仆地，吐涎沫，口喎，目急，手足繚戾，無所覺知，良久乃蘇。”本病病因復雜，病程長久。

現代藥理研究表明，大黃具有瀉下、保肝利膽、抗病原微生物、止血、抗腫瘤、免疫抑制、腎功能不全的改善、精神調治等作用[11]。其化學成分復雜，主要有蒽醌類、蒽酮類、二苯乙烯苷類以及鞣質類化合物[12]，其中主要的有效成分是蒽醌苷及游離蒽醌衍生物，且致瀉強度與蒽醌含量呈一定的量效關系[13]。

現代醫學認為，癲癇發病過程中，氧自由基可直接損傷神經細胞[14]。氧自由基形成后可導致膜磷脂和蛋白質的過氧化反應并損傷DNA,攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發脂質過氧化反應，形成脂質過氧化物[15]。因此,測定MDA水平可以作為脂質過氧化反應程度的一個指標。自由基清除劑SOD是有效的保護神經物質，所以提高SOD活性的藥物能夠有效防止脂質過氧化反應的發生，從而保護腦組織不受損害，降低癲癇的發病率[16]。

本次實驗結果表明，大黃可有效延長大鼠癲癇的發作潛伏期，縮短發作時間。而且模型組與正常組比較，SOD和GSH-PX含量顯著下降，MDA水平明顯上升。說明大黃可提高腦組織SOD、GSH-PX活性，降低MDA水平，表明大黃可以抑制氧自由基的生成，提高超氧化物歧化酶活性，有效清除氧自由基，這種抗氧化作用能夠有效地減輕繼發的神經細胞損傷，也說明了大黃可能是通過抗氧化作用達到了防治癲癇的作用。近年來，有學者通過對《中醫方劑大辭典》中治療癲癇有效藥物的統計研究發現，有10味中藥在治療癲癇中使用頻率較高，其中便有中藥大黃[17]。中醫學認為，癲癇發病原因不外乎先天因素、七情失調、腦部外傷等。本病多由痰作祟，因風、火觸動，痰瘀互結，蒙蔽清竅，氣機閉阻而發病，有虛實之分，后期多虛實夾雜，病位在腦，與五臟相關，但主要責之于肝，肝風內動、風痰上擾是其主要病機特點。中醫學從整體觀念出發，結合體質、社會環境因素，治以鎮肝熄風、豁痰健脾、化瘀通竅，加之飲食護理、心理護理，每收良效[18]。在臨床用藥時，有學者主張在中西醫結合的理論指導下，中西藥分開用藥，不主張在中藥制劑中添加抗癲癇藥，以免造成大部分藥物在血中含量均達不到有效濃度，使患者出現中毒癥狀，造成不必要的損失，同時避免“醫源性難治性癲癇”的發生[19]。大黃入脾、胃、肝經，可破痰實，通臟腑，降濕濁，治療癲狂驚癇。臨床以方劑涼膈散[20]、地黃飲子為基礎方加減應用，療效顯著，患者滿意度高，但其作用機制有待于進一步實驗研究證實。

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