腫瘤相關巨噬細胞在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義

程楓 王偉斌 朱磊

[摘要] 目的 觀察腫瘤相關巨噬細胞（TAMs）在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）的表達，探討其在PTC侵襲轉移中的作用。方法 選取我院2010年10月～2013年10月期間經病理診斷為PTC患者80例，取病理標本，采用免疫組化法檢測TAMs表達，對其臨床特征進行分析。 結果 TAMs在PTC中存在較高的表達（3～66/HP），高密度TAMs組腫瘤組織直徑（1.6±0.1）cm明顯大于低密度TAMs組（1.0±0.1）cm（P<0.01）。高密度TAMs組較低密度TAMs組腫瘤浸潤深度更深，且有更多的淋巴結轉移，Ⅲ期以上病例數也更多。 結論 TAMs有促進PTC生長的作用，在PTC的侵襲和轉移中發揮促進作用。

[關鍵詞] 腫瘤相關巨噬細胞；甲狀腺乳頭狀癌；免疫組化；侵襲轉移

[中圖分類號] R736.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2015）34-0011-03

The expression and clinical significance of tumor-associated macrophages in papillary thyroid carcinoma

CHENG Feng1 WANG Weibin2 ZHU Lei1

1.Department of General Surgery，the Central Hospital of Lishui City in Zhejiang Province， Lishui 323000， China；2.Department of Oncology Surgery，the First Affiliated Hospital to College of Medicine of Zhejiang University， Hangzhou 310003， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of tumor-associated macrophages（TAMs） in human papillary thyroid carcinoma （PTC） and the role of TAMs in invasion and metastasis of PTC. Methods Eighty patients who underwent surgeries after being diagnosed with PTC from Oct 2010 to Oct 2013 were included. Their paraffin-embedded tumor tissues were investigated using immunohistochemistry （IHC） and the clinical characteristics according to TAMs density was evaluated. Results The TAM densities varied from 3-66/HP， and tumors in the high density group were larger than those in the low density group [（1.6±0.1） cm vs （1.0±0.1） cm，P<0.01]. Meanwhile， in the high density group， the tumor infiltration was deeper， and more lymph node metastasis and the number of post-phase Ⅲ cases were found. Conclusion TAMs has an effect on promoting the growth of the PTC， and plays an important role in invasion and metastasis of PTC.

[Key words] Tumor-associated macrophages； Papillary thyroid carcinoma； Immunohistochemistry； Invasion and metastasis

腫瘤相關的巨噬細胞（tumor-associated macrophages，TAMs），早在上世紀80年代被描述，是一類與腫瘤相關有復雜功能的單核-巨噬細胞的總稱，由外周血單核細胞在一些趨化因子和腫瘤壞死因子的作用下定向遷移至腫瘤組織中分化而成。TAMs是一種分泌功能很強的細胞，可分泌多種細胞生長、轉移因子、降解細胞基質的酶等，從多方面影響腫瘤細胞局部的微環境，加速腫瘤的浸潤及轉移[1，2]。TAMs作用有一定的組織特異性，高密度TAMs存在于腫瘤晚期并提示預后差，像乳腺癌、肺癌、膀胱癌等[3-5]。盡管高密度的TAMs存在于低分化的乳頭狀甲狀腺癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）有被報道，但其分布和功能在PTC中仍未被研究清楚。我們討論TAMs在PTC組織中表達并結合臨床特征研究TAMs在PTC發生發展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料來源

于2010年10月～2013年10月在我院住院患者行甲狀腺全切或次切術，同時行頸部中央區淋巴結清掃，術后經病理診斷為乳頭狀甲狀腺癌，有或無淋巴結轉移。全部病例在術前均無放療、化療及免疫抑制治療史，無甲狀腺功能亢進、類風濕、糖尿病等疾病。標本均經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm切片。

1.2 TAMs免疫組化染色

用免疫組織化學SP法檢測TAMs的分子標記物CD68，微波修復抗原，將已脫蠟的組織切片放入已預熱至100℃的EDTA修復液（1 mmol，pH 8.0）中保持15 min，加一抗4℃過夜，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片。一抗、二抗及SP試劑盒等均購于上海生工生化公司。PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 陽性結果判定及分組

CD68陽性表達于巨噬細胞的胞質內，細胞質含清晰的黃褐色至棕黃色顆粒狀者為陽性細胞。低倍光學顯微鏡下找到5個CD68陽性細胞聚集最多的“熱點”（hot spot）后，在200倍高倍光學顯微鏡下計數每個“熱點”區的5個視野，計算每個視野陽性細胞的平均值標記為該標本中TAM的浸潤密度。參考其他同類文獻，取本組所有甲狀腺癌病例的TAMs浸潤密度的中位數作為高低密度的分界點，按TAM浸潤密度分為低密度組和高密度組。

1.4 統計學分析

采用SPSS16.0統計學軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率表示，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般臨床特征

回顧性分析我院2010年10月～2013年10月期間住院患者80例，其中女60例（75%），平均年齡（54.1±10.2）歲（38～79歲），腫瘤組織直徑大小（1.3±0.1）cm，淋巴結轉移占32例（40%），侵犯包膜占50例（62.5%），按照國際抗癌協會聯盟（UICC）和美國抗癌聯合會（AJCC）的TNM分期標準，Ⅲ期以上24例（30%），見表1。

2.2 TAMs染色結果及分組

免疫組化染色的切片中CD68陽性的巨噬細胞呈棕紅色顆粒狀，胞漿和（或）胞膜著色，細胞體積較大，形態多樣，呈不規則形，在癌組織中彌散或聚集分布，見圖1A、B。80例甲狀腺癌病理切片中TAM為3～66/HP，其中位數為30.5/HP。以中位數為界將甲狀腺癌組分為兩組：TAMs高密度組和TAM低密度組。高密度組40例，TAM中位數為48（31～66）/HP；低密度組40例，TAM中位數為12（3～30）/HP。

2.3 兩組臨床特征比較

兩組患者的年齡、性別等無顯著差異，TAMs高密度組腫瘤直徑顯著高于低密度組[（1.6±0.1） cm vs. （1.0±0.1） cm，P<0.01]，高密度TAMs組較低密度TAMs組腫瘤浸潤深度更深，有更多的淋巴結轉移，Ⅲ期以上例數也更多，見表1。

3 討論

TAMs是一類與腫瘤相關、有復雜功能的單核-巨噬細胞的總稱，近年越來越多的研究表明腫瘤組織通過表達CD68分子的巨噬細胞（TAMs）參與腫瘤血管生成、免疫抑制等多種機制促進腫瘤的進展，在促進腫瘤生長、侵犯和轉移中起重要作用，臨床研究表明在肺癌、結腸癌、乳腺癌、膀胱癌、經典型霍奇金氏淋巴瘤組織中TAMs浸潤密度與腫瘤患者的生存密切相關，可能是獨立的預后因子[6-15]。然而，TAMs在PTC中的作用尚存爭議，相關研究的資料目前仍十分有限，尤其是基礎方面的研究。

本研究顯示TAMs在PTC中存在較高的表達，高密度TAMs組腫瘤組織體積明顯大于低密度組，同時更多的淋巴結轉移、更多的包膜侵犯等發生在高密度TAMs組，但差異無統計學意義。基于這些發現，我們認為TAMs有促進PTC癌細胞生長作用，并在腫瘤轉移和侵犯中發揮重要作用。與既往的一些研究相似。Ryder[16]等發現TAMs密度在低分化的PTC和間變的甲狀腺癌中均高于分化良好的PTC，Qing[17]等報道TAM密度在3期腫瘤組織中更高。然而，Fiumara[18]等用CD68免疫組化發現TAMs避免了腫瘤在部分病人轉移，這些患者有更少的血管浸潤、遠處轉移、淋巴細胞浸潤等。雖說研究結果不一致，但總的來說，傾向于TAMs有促進甲狀腺癌增長的報道多一些。

TAMs在腫瘤或PTC生長、浸潤、轉移中的作用機制是多方面的，結合既往研究結果，其可能的原因有[19-24]：①TAMs在腫瘤微環境中經腫瘤細胞作用下喪失了殺滅腫瘤作用而轉為促進腫瘤生長效應，從而造成腫瘤的免疫逃逸。②腫瘤細胞生存和轉移依賴新生血管生成，TAMs多集聚在血管紊亂、腫瘤壞死的低氧區，低氧又促進TAMs聚集，參與腫瘤血管生成及細胞外基質（ECM）降解。③腫瘤組織中都有大量免疫細胞浸潤，如T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK 細胞和TAMs，而TAMs數量常占顯著優勢。TAMs多具M2表型，抗原遞呈能力弱，抗腫瘤效應被抑制，具有促腫瘤生長和轉移作用。

在本研究中我們也觀察了TAMs形態學，發現盡管TAMs存在，但甲狀腺癌組織的形態學特征仍被保持，因此，我們懷疑TAMs并沒有對PTC發展起到特別巨大的作用，這也和我們的研究結果基本一致，如雖然更多的淋巴結轉移、更多的包膜侵犯等發生在高密度TAMs組，但差異無統計學意義。

關于TAMs在甲狀腺癌中的研究今年來逐漸增多，特別是國外，但是關于機制的研究數據仍然很少。甲狀腺癌因為其增殖速度慢，有相對良好的進程，因此，其病理生理過程中并沒有特別適合TAMs的作用。當前，TAMs的作用僅僅在侵襲性的乳腺癌、肺癌和膀胱癌有相對一致的意見。我們的研究結果顯示TAMs同樣存在于PTC，其作用在癌癥的發展中是存在的。不管怎么說，更大樣本的、前瞻性的研究在接下來是必需的。

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（收稿日期：2015-06-09）