凝膠法檢查穿琥寧注射液細菌內毒素

孟軍

摘 要：建立凝膠法檢查穿琥寧注射液細菌內毒素的方法。本實驗細菌內毒素檢查應用鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理進行。選用靈敏度為0.5 EUmL-1的鱟試劑，并用細菌內毒素檢查用水將穿琥寧注射液稀釋成1∶10濃度的稀釋液，進行凝膠法反應實驗，結果表明該注射液中所含細菌內毒素對鱟試劑反應無干擾作用。同時將細菌內毒素檢查法與家兔法檢測結果進行比較，兩種方法測定結果相符。以上結果證明細菌內毒素檢測方法可以代替家兔法檢測穿琥寧注射液的熱原。

關鍵詞：穿琥寧注射液 細菌內毒素 凝膠法 鱟試劑 熱原

中圖分類號：R92 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）02（b）-0030-02

Gel Reaction Checking The Bacteria Endotoxin of Potassium Dehydroandrograpolide Succinate Injection

Meng jun

（The Institute of Food and Drug Contro，Tonghua Jilin，134001，China）

Abstract：The method of the determination about the bacteria endotoxin has been established for Potassium Dehydroandrograpolide Succinate injection.The checking of bacteria endotoxin was carried out based on the principle of agglomerate reaction between limulus reagent and bacteria endotoxin.In this experiment，Limulus reagent was selected at sensitivity 0.5EU·mL-1，and Potassium Dehydroandrograpolide Succinate injection was diluted to ten times with the water used for the checking of bacteria endotoxin， then the gel reaction was performed. The results of the experiments indicate that the bacteria endotoxin contained in the injection have no observed interfering with Limulus reagent.Compared with the results determined by cattle rabbit method， the two methods show same results.These results verify that the method of the bacteria endotoxin determination may replace cattle rabbit method to check Potassium Dehydroandrograpolide Succinate injection heating source.

Key Words：Potassium Dehydroandrograpolide Succinate Injection； Bacteria Endotoxin； Limulus Reagent；Heating Source

穿琥寧注射液具有較強的解熱作用，對流感病毒甲Ⅰ型、甲Ⅲ型、肺炎腺病毒均有滅活作用，主要與抗生素聯合用藥治療病毒性感染，在臨床上用于病毒性肺炎，病毒性上呼吸道感染等病癥的治療。目前該藥品制劑熱原檢查主要采用家兔法[1]，但家兔法存在操作繁瑣、費時、靈敏度低等缺點，根據《中國藥典》2010年版二部附錄細菌內毒素檢查法凝膠法，我們通過鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理來檢測內毒素，對該制劑進行了細菌內毒素檢查方法的探討和實驗，并與家兔法進行了比較，兩種方法結果一致。表明以細菌內毒素檢查法取代家兔法檢測穿琥寧注射液的熱原是可行的。

1 儀器與材料

1.1 儀器

旋渦式混懸器（上海精科實業有限公司）；電熱恒溫水箱（北京醫療設備廠）；微量注射器（北京國營青云儀器廠）；無熱原吸頭（湛江安度斯生物有限公司，批號131219）。

1.2 材料

鱟試劑（湛江安度斯生物有限公司，靈敏度0.5Eu/mL，批號：130713）；細菌內毒素檢查用水（湛江安度斯生物有限公司，規格0.5/支，批號：1306100，內毒素含量≤0.015 EU·mL-1）；細菌內毒素工作標準品（湛江安度斯生物有限公司，規格180Eu/支，批號：2013-3）；穿琥寧注射液（規格：每支2 mL：40 mg；哈藥集團三精制藥有限公司）3批；熱原實驗用兔：經吉林省科技廳審批的吉林省通化白山制藥廠實驗動物場提供，合格證號為006564。

2 方法與結果

2.1 鱟試劑標示靈敏度

（λ）的復核將細菌內毒素工作標準品用細菌內毒素檢查用水溶解，在快速混勻器上混和15 min，然后制成2.0、1.0、0.5、0.25λ等系列濃度，按中國藥典2010年版二部附錄XIE[2]方法操作。反應終點濃度即是系列濃度遞減的內毒素溶液中最后一個呈陽性結果的濃度，標示靈敏度為0.5EUmL-1的鱟試劑符合規定。

2.2 穿琥寧注射液細菌內毒素限值（L）的確定[3]

L=K/M，式中M為本品熱原檢查劑量1.0mlkg-1[1]，K為細菌內毒素致熱閥5.0EUkg-1，本品細菌內毒素理論限值，L=K/M=5/1.0=5.0 EUmL-1。

2.3 供試品的最大有效稀釋（MVD）

倍數選用鱟試劑靈敏度（λ）為0.5EUmL-1時，MVD=L/λ=5.0EUmL-1/0.5 EUmL-1=10（倍）

2.4 供試品干擾實驗

根據穿琥寧注射液的最大有效稀釋倍數，我們用細菌內毒素檢查用水將穿琥寧注射液稀釋成1∶5及1∶10濃度的稀釋液，分別做了干擾試驗；將細菌內毒素工作標準品分別稀釋成1.0、0.5、0.25、0.125EUmL-1的溶液，取上述溶液每一個濃度0.1 mL，分別加入λ=0.5EUmL-1的0.1 mL的鱟試劑中，在（37.0±1.0）℃水浴中保溫（60±2）min。結果，供試品1∶5濃度的稀釋液，對細菌內毒素檢查有抑制作用，而1∶10濃度的稀釋液，對細菌內毒素檢查無抑制作用也無增強作用；用檢查用水將細菌內毒素工作標準品同上法稀釋，與鱟試劑反應，每一濃度平行做4管，重復做3次。結果均相同。干擾實驗結果見表1。

表1結果顯示，供試品1∶10濃度的稀釋液對細菌內毒素檢查無抑制作用。

2.5 供試品細菌內毒素檢測結果與家兔法檢測結果比較

取3批供試品，用細菌內毒素檢查用水將穿琥寧注射液稀釋成1∶10濃度的稀釋液，用靈敏度為0.5EUmL-1的鱟試劑做細菌內毒素檢查，同時做陽性對照，陰性對照和供試品陽性對照，按中國藥典2010年版附錄XIE[2]操作，結果3批樣品均為陰性；家兔法熱原檢查按中國藥典2010年版二部附錄[4]進行，家兔法檢測結果均為陰性；兩種檢測結果完全一致。

3 結論

穿琥寧注射液的熱原檢查[1]目前仍采用家兔法，費時，成本高、操作繁瑣，影響因素較多。細菌內毒素檢查法，具有靈敏度高，操作簡便，快速，重現性強等優點。經過實驗論證，采用靈敏度為0.5EUmL-1的鱟試劑，以供試品1∶10濃度的稀釋液，進行細菌內毒素檢查而無干擾，并與家兔法檢查結果一致，因此，該法驗證了細菌內毒素檢查法可用于穿琥寧注射液的內毒素檢測。

參考文獻

[1] WS-10001-（HD-0016）2002 國家藥品標準.

[2] 黃汛，楊洪軍，宋雅蓮.穿琥寧注射液細菌內毒素檢查方法的建立[J].中國藥學報，2007（3）：32-33.

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[4] 中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ E頁.

[5] 雒琪，王復馨，李軍.凝膠法檢查甘露醇注射液細菌內毒素的應用[J].中國醫院藥學雜志，2003（1）：62-63.

[6] 黃江紅，孫華芳，姚佳生，等.硫羅寧注射液細菌內毒素檢查方法的建立[J].湖北中醫學院學報，2010（2）：22-24.