HPLC法測定克霉唑陰道片含量的方法研究

HPLC法測定克霉唑陰道片含量的方法研究

歷娜,于紅燕,姜愛霞

(山東藥品食品職業學院，山東 威海 264210)

摘要：目的建立克霉唑陰道片含量的高效液相色譜測定方法。方法采用大連依利C18色譜柱，流動相為甲醇-磷酸緩沖液(取磷酸5 mL，加50%甲醇溶液稀釋至1 000 mL，用三乙胺調節pH值至3.8)(40∶60)，流速：1.0 mL·min-1，檢測波長230 nm，進樣量為10 μL。結果在該色譜條件下，克霉唑在濃度為0.025～0.2 mg·mL-1范圍內線性關系良好，回歸方程為：A=30 397C-3.353 83，r=0.999 9，重復性試驗RSD為1.35%，平均回收率為96.67%(RSD=1.33%)。結論本法靈敏、簡便、準確、重復性好，能有效控制克霉唑陰道片的含量。

關鍵詞：克霉唑陰道片；高效液相色譜法；含量

作者簡介：歷娜，女，研究方向：藥品質量控制，E-mail:wjlinan@126.com

中圖分類號：R927.2文獻標識碼：A

StudyondeterminationofClotrimazoleVaginalTabletsbyHPLC

LI Na,YU Hong-yan,JIANG Ai-xia

(Shandong Drug and Food Vocational College,Weihai 264210,China)

Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Clotrimazole Vaginal Tablets.MethodsDalian C18 chromatographic column was adopted with methanol-phosphate buffer (phosphate from 5 mL and 50% methanol solution was diluted to 1 000 mL，with three procedures for adjusting the pH value to 3.8)(40∶60) as mobile phase，and the flow rate was 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was 230 nm，the injection volume was 10 μL.ResultsUnder the chromatographic conditions,the linear range of clotrimazole was 0.025～ 0.2 mg·mL-1，the regression equation was A=30 397C-3.353 83，r=0.999 9.The RSD of repeatability test was 1.35%，the average recovery rate was 96.67%(RSD=1.33%).ConclusionThis method was sensitive，simple，accurate，reproducible，and can effectively control the content of Clotrimazole Vaginal Tablets.

Keywords:ClotrimazoleVaginalTablets;HPLCmethod;Content

女性婦科炎癥發病率很高，且容易反復感染，因此婦科藥品市場的發展前景廣闊[1]。據衛生部調查統計顯示，婦科病發病率高達75%，2010年我國婦科藥銷售額已突破100億元人民幣，預計今后將繼續呈增長態勢[2]?？嗣惯蚴且环N廣譜抗菌藥，對于多種真菌尤其是白色念珠菌具有較好抗菌作用，克霉唑陰道片最早是在1971年在德國首次上市，由德國的拜耳公司生產，目前國內有19家企業獲得該藥品的批準文號[3]。本課題主要研究采用高效液相色譜法對克霉唑陰道片進行含量控制[4]。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀；超聲波清洗器；MettlerAE240電子天平；甲醇為色譜純；水為純化水；其他試劑為分析純。

2溶液配制

2.1對照液的配制精取克霉唑對照品約10mg，將其放置在100mL的量瓶中，再向量瓶中加入約30mL的甲醇，放在超聲波清洗器中超聲大約10min使對照液溶解后，再向量瓶中加流動相定容至刻度，搖勻[5，6]。

2.2供試液的配制取20片，精密稱定重量后，放在研缽中研細，再精稱細粉適量(約相當于克霉唑50mg)，按”2.1”項下方法制成100mL溶液，濾過后再精量續濾液2mL用流動相稀釋至10mL，搖勻。

3方法學考察

3.1色譜條件固定相：C18柱，流動相：甲醇-磷酸緩沖液(40∶60)，流速：1.0mL·min-1，檢測波長230nm，進樣量為10μL[7]。

3.2線性關系試驗精取對照品25mg，放置于50mL容量瓶中，加入約30mL的甲醇，放在超聲波清洗器中超聲使其溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻。分別取上述溶液制得不同濃度的線性溶液進行測定，求得回歸方程為：A=30 397C-3.353 83(n=5，r=0.999 9)。結論：克霉唑在濃度為0.025～0.2mg·mL-1范圍內，峰面積與濃度呈良好的線性關系。

3.3精密度試驗精取線性中間濃度的溶液10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積結果RSD=0.96%。結論：連續進行6次測定，測得峰面積計算RSD值為0.96%。表明儀器精密度良好。

3.4溶液的穩定性取分別供試液各10μL，注入色譜儀，測定峰面積，結果RSD=1.72%。結論：以室溫8h內測得峰面積計算RSD值為1.72%。表明溶液穩定性良好。

3.5加樣回收率試驗精密稱取克霉唑對照品約10、12.5、15mg各3份，分別置25mL量瓶中，按處方比例分別加入輔料適量后，加甲醇適量，超聲使溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液2mL置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。照“3.1”項下條件測定，測定結果見表1。

表1　加樣回收率試驗結果

結論：采用本法測定含量，方法準確可靠，回收率良好。

3.6重復性試驗取本品30片，按“2.2”項下操作，各級取10 μL注入液相色譜儀，測定克霉唑含量，結果克霉唑平均含量為97.44%,RSD=1.35%。結論：結果表明試驗操作重復性良好，該方法對本品進行含量測定是可行的。

3.7檢測限[8，9]精密量取對照品溶液1 mL，至100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，再依次逐級稀釋，各10 μL注入液相色譜儀，當其信噪比(S/N)為3∶1→5∶1時，克霉唑的最低檢測深度為0.07 ng·μL-1，即：最小檢出量為1.4 ng。

3.8含量測定分別精取對照品溶液和供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見圖1)。測定結果見表2。

圖1　供試品色譜圖

批號上市樣品樣1樣2樣3含量(%)100.699.8100.1100.4

結論：結果表明本公司試制的3批克霉唑陰道片樣品含克霉唑均為標示量的93.0%～107.0%，與上市樣品一致。

4討論

4.1采用本研究得到的配方，試制的藥品與上市樣品的含量一致，結果穩定可靠，產品質量合格。表明該配方可行，能生產出質量符合要求的產品。

4.2采用C18色譜柱，甲醇-磷酸緩沖液(40∶60)為流動相，試驗結果表明本法建立的色譜條件系統適用性良好，可以快速簡便的檢測克霉唑陰道片的含量，方法準確靈敏，簡便易行，能很好地控制本品的質量，同時也適用于本品中有關物質的測定。

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