蝦夷扇貝組織結構分析

龐寶成+王憲岱+梁久征

摘要：把蝦夷扇貝作為實驗材料，掌握蝦夷扇貝血涂片的制作方法，并運用HE染色組織切片的方法對蝦夷扇貝的組織結構進行觀察以及分析。用5 mL注射器吸取2 mL肝素鈉，抽取1 mL左右蝦夷扇貝心臟血液，從載玻片一端滴一滴血液，左手水平拿著玻片，右手用另一個載玻片水平輕推血液，使其展平，在陰涼處風干，同樣方法制取五個血涂片。留一個做空白對照，取兩個血涂片用瑞氏染液染色，其他兩個吉姆薩染液染色，放于陰涼處晾干留作觀察。取新鮮扇貝組織切成1.0 cm×1.0 cm×0.3 cm的組織塊，經過固定、脫水與透明、浸蠟、包埋等過程后把組織塊切成4～6μm的石蠟切片。再經過蘇木素染色鹽酸酒精褪色，后用伊紅染液復染等過程后用中性樹膠完成封片，待干后進行顯微鏡的觀察以及拍照。最后通過觀察與人體以及魚類相關的組織結構進行分析對比。

關鍵詞：蝦夷扇貝;血涂片;蘇木素-伊紅染色法;組織結構分析

蝦夷扇貝于1982年引進我國[1]。其原產于日本、俄羅斯千島群島等地，主要分布于鹽度較高，底質硬，淤沙少且水深不超過40 m的沿岸海區[2]。后引進我國，主要養殖區域集中在遼東半島、山東長島等海區，生長速度較慢。蝦夷扇貝是近些年來貝類水產品的主要生產品種，其內含有大量蛋白質、EPA、DHA等對人體有益的成分[3]。具有相當高的營養經濟價值。并且因為蝦夷扇貝漂亮的外形，在我國南方將其稱為“圓貝”，其圓滿的造型象征著團聚、美滿，雌雄半殼貝作為“鴛鴦喜貝”經常被搭配擺上婚宴餐桌，代表著對新人的祝福;同時蝦夷半殼貝圓滿的造型還是中秋佳節一家人團聚時候必不可少的美味佳肴，代表著團圓美好。

蝦夷扇貝由我國引入后，進行了較為成功的人工育苗和養殖試驗。現如今蝦夷扇貝在我國的大規模人工養殖和增殖也主要集中于遼寧、山東等北方沿海地區，并且養殖面積已經達到了10萬平方公里[4]。在2011年，我國蝦夷扇貝產量達到1.3×106 t。遼寧大連的獐子島，因為其地理位置以及氣候環境等因素達到蝦夷扇貝成長所必須的要求，近年已經發展成為國內最大的蝦夷扇貝底播養殖基地，現已發展成為2 000多平方公里的海洋牧場。大連海洋島蝦夷扇貝生產基地也是因其含有蝦夷扇貝生長必須的營養鹽，并且海水的理化因子穩定，周年穩定的水溫，以及良好的水源環境和合適的鹽度發展成為了最為適宜蝦夷扇貝生長的理想之地。當地成熟蝦夷扇貝個體大、貝柱肥、肉質細、顆粒飽滿從而使海洋島蝦夷扇貝享譽國內外[5]。但是近年來隨著蝦夷扇貝養殖規模的不斷變大、扇貝品種、環境、病害的問題，并且伴因為連續多代的人工繁殖，蝦夷扇貝的群體內出現了近親雜交現象，因此蝦夷扇貝的養殖環境以及生長條件發生了劇變，導致近年的蝦夷扇貝各種問題，所以對蝦夷扇貝的觀察與組織結構分析就顯得尤為重要[6]。

本次實驗利用血涂片的制作以及常規的組織切片、蘇木素-伊紅染色（HE染色）的方法，更加細致直觀的對蝦夷扇貝的組織器官細胞進行觀察以及分析，并且通過和魚類、哺乳動物同類別的組織細胞進行對比，了解其組織器官的特性，加深對蝦夷扇貝的了解。掌握這種方法也可以運用此種方法對其他動物組織進行試驗，更加精確的反應一個生物的組織結構。

1實驗材料及方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗器材5 mL注射器、1 mL注射器、1 000 mL試劑瓶、500 mL試劑瓶、紗布、鑷子、剪刀、電爐、洗衣粉、250 mL試劑瓶、染色缸、染色架、切片機、恒溫水浴鍋、載玻片、蓋玻片、烘箱。

1.1.2實驗藥品瑞氏染色試劑盒、苦味酸、碘酸鈉、明礬、95%乙醇、石蠟、氨水、檸檬酸、甘油、冰醋酸、鹽酸羥胺、蘇木素、伊紅、鉀明礬、中性樹膠、二甲苯、100%乙醇、鹽酸。

1.1.3實驗對象蝦夷扇貝（市場購得）。

1.2實驗方法

1.2.1藥品配制

波恩氏液：苦味酸飽和水溶液75 mL、冰醋酸5 mL以及甲醛溶液25 mL，三者充分互溶，此液體必須現用現配，用作組織固定液。

蘇木素液[7]：用1 000 mL蒸餾水將0.2 g碘酸鈉加溫到100 ℃溶解后加入1g蘇木素，使其呈現深櫻桃紅色，再加50 g明礬，使溶液變為藍紫色，再繼續加熱煮沸，大約5 min過后加入50 g水合氯醛，并且攪拌，使液體變為紫紅色，溶解完成后加入1g的檸檬酸，冷卻過濾后備用。該液體可以長時間的保存，若陳液水分蒸發，可以加入適量的2%鉀礬液稀釋即可。

伊紅：為了使實驗效果更好本次配制的伊紅染液為醇溶性伊紅，取伊紅2.5 g加入蒸餾水（少許）慢慢攪動，再加入95%的酒精500 mL，在加入酒精的過程中要不停的攪拌，直到徹底溶解。此時的試劑有些渾濁，可取少量的冰醋酸加入到試劑中，試劑會逐漸變得澄澈，并且試劑顏色變為鮮紅色。

1.2.2外部形態觀察從實驗所用的蝦夷扇貝中選取個體較大，結構較為清晰，沒有明顯傷痕的扇貝，進行初步的外形觀察：蝦夷扇貝的外形呈標準的扇形，像一把打開的扇子，外形十分漂亮。觀察可見其殼頂位于中央、等側，并且殼頂兩側的殼耳大小相等，十分對稱。并且右殼的前耳有足絲孔。對貝殼的表面進行觀察可見貝殼的表面有15～20條放射肋，右殼的肋比較寬大短小，肋之間較為狹窄;左殼肋較細，肋間較寬有的有網目雕刻。右殼較左殼相對大些，并且呈現出黃白色，比較突出。而左殼相對平整，一般呈現紫褐色。殼內面為淺白色，位于殼頂下方的內韌帶呈倒三角，蝦夷扇貝為單柱類，其閉殼肌大，在殼的中后部[8]。

1.2.3血涂片制作選用5 mL的注射器抽取肝素鈉2 mL，再從蝦夷扇貝的心臟中抽取1 mL左右血液，從載玻片的一端滴一滴扇貝血液，左手拿玻片保持玻片水平，右手用另一個載玻片水平的輕輕將血液展平，置于陰涼處晾干，用相同方法制作五個血涂片。取其中兩個用瑞氏染液染色，再取兩個用吉姆薩染液染色，放于陰涼處晾干，清洗，留做后續觀察。