食管鱗癌組織中HIF－1α和EGFR蛋白的表達與預后的關系

食管鱗癌組織中HIF－1α和EGFR蛋白的表達與預后的關系

賀春語

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胡曉娜

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王雯

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劉如

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劉勁松

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吳小源

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王建華

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(1.鄭州大學附屬腫瘤醫院/河南省腫瘤醫院放療中心河南鄭州450008;

2.河南省中醫學院三附院醫學影像科河南鄭州450008)

【摘要】目的研究食管鱗狀細胞癌(ESCC)中HIF－1α、EGFR蛋白的表達與食管癌病理特征及預后的關系。方法采用免疫組織化學(SP)法檢測116例ESCC組織中HIF－1α、EGFR蛋白的表達，并分析其與臨床病理因素及患者生存的關系。結果HIF－1α與EGFR在ESCC組織中的陽性率分別為63.8%和68.1%，HIF－1α與EGFR均陽性率為50. 9%。HIF－1α蛋白的陽性表達與T分期相關(P =0.014)。聯合檢測HIF－1α和EGFR蛋白均陽性表達與浸潤深度及臨床分期相關(P =0.006，0.023)。HIF－1α與EGFR蛋白表達呈正相關(r =0.331，P =0.000)。Kaplan－Meier生存分析結果顯示，EGFR蛋白陽性表達的ESCC患者生存時間短(P =0.019)。結論HIF－1α、EGFR蛋白在ESCC組織中呈高表達，二者密切相關，在ESCC發生發展中有重要作用，EGFR可作為判斷預后的重要指標。

【關鍵詞】食管腫瘤;鱗狀細胞癌;乏氧誘導因子－1α;表皮生長因子受體;預后

Relationship between the expression of hypoxia－inducible factor－1α，epidermal growth factor receptor and prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinomaHe Chunyu

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，Hu Xiaona

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，Wang Wen

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，Liu Ru

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，Liu Jinsong

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，Wu Xiaoyuan

缺氧誘導因子(hypoxia inducible factor，HIF)是一類重要的缺氧應答誘導因子，家族成員HIF－1α與腫瘤多藥耐藥、放療敏感性、血管生成及淋巴轉移密切相關［1］。表皮生長因子受體(epithelial growth factor receptor，EGFR)的過度激活通過下游多條信號傳導通路，可促進腫瘤細胞的轉化、分裂、增殖并抵抗細胞凋亡［2］。本文檢測食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)組織中HIF－1α和EGFR蛋白表達情況，分析其與臨床病理特征及生存之間的關系，探討對ESCC發生發展及預后判斷的價值。

1　資料與方法

1.1一般資料收集河南省腫瘤醫院2007年7月至2009年12月臨床資料完整的ESCC病例116例，被檢測的腫瘤標本均為食管癌根治術后石蠟包埋組織，所有患者均為初治，術前均未接受新輔助治療。其中男79例，女37例;年齡30～74歲，中位年齡61歲;采用2009年AJCC食管癌TNM分期標準分期，T1、T2、T3、T4期分別為6、45、49、16例; N0、N1、N2期分別為58、41、17例;ⅠA期5例，ⅠB期24例，ⅡA期21例，ⅡB 期15例，ⅢA期34例，ⅢB期9例，ⅢC期8例。腫瘤位于胸上段、胸中段、胸下段分別為15、61、40例。高、中、低分化分別為41、49、26例。行術后放療66例，化療84例。

1.2檢測方法所有標本均經10%甲醛固定，石蠟包埋，制成3 μm厚的切片，采用免疫組化SP法進行HIF－1α、EGFR染色。兔抗人HIF－1α多克隆抗體、鼠抗人EGFR單克隆抗體;即用型S－P試劑盒，DAB二氨基聯苯胺顯色劑試劑盒，均購自福州邁新公司。免疫組化染色按SP試劑盒操作說明進行，以微波修復法進行抗原修復，工作液濃度均為1∶150。

1.3結果判斷標準HIF－1α、EGFR均以ESCC細胞漿/胞膜內出現棕黃色細顆粒為陽性細胞。免疫組織化學染色以細胞質內出現特異性染色深淺來進行評分: 0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色;再依據染色細胞所占百分比評分:陽性細胞數＜10%為0分，10%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。兩項乘積即為該例免疫組織化學得分:(－)0 分;(+ )1～2分;(+ + )3～4分;(+ + + )5～6分。其中，(+ )和(+ + )定為弱陽性，(+ + + )定為強陽性。

1.4統計學處理應用SPSS 17.0統計軟件包進行統計分析，不同臨床特征間同一指標比較采用χ2檢驗，指標相關性采用Spearman等級相關分析;生存資料應用Kaplan－Meier表示，并采用Log－rank方法進行分析，以α=0.05為檢驗水準。

2　結果

2.1 HIF－1α、EGFR蛋白在ESCC組織的表達

116例ESCC患者中HIF－1α、EGFR蛋白均過表達，陽性率分別為63.8%、68.1%，HIF－1α蛋白陽性表達呈棕黃色，陽性細胞在癌組織內呈灶性/彌漫性分布。EGFR蛋白陽性顆粒位于細胞核和細胞漿，但癌巢中央以細胞核為主，周圍以細胞漿為主。

2.2 HIF－1α、EGFR蛋白與ESCC臨床病理特征之間的關系116例患者的ESCC組織中，HIF－1α蛋白的表達僅與ESCC的浸潤深度相關，T分期越晚，表達率越高(P＜0.05)，而與性別、年齡、分期及淋巴結轉移無關。EGFR蛋白的表達與性別、年齡、分期、分化程度以及淋巴結轉移均無關(P均＞0.05)，HIF－1α 與EGFR聯合檢測顯示二者均陽性表達與浸潤深度及分期有關(P＜0.05)，見表1。

表1　HIF－1α、EGFR蛋白表達與ESCC臨床病理特征的關系(n，%)

2.3 HIF－1α與EGFR蛋白在ESCC組織中表達的相關性116例患者的ESCC組織中HIF－1α與EG-FR蛋白均陽性率為50.9%(59/116)，采用Spearman等級相關分析發現HIF－1α與EGFR蛋白表達正相關(r =0.331，P＜0.001)，見表2。

表2　HIF－1α和EGFR表達的相關性

2.4 HIF－1α與EGFR蛋白表達對ESCC預后的影響116例ESCC患者1、3、5年生存率分別為92. 1%，53.3%，34.5%，中位生存時間為34.1月(5～81.4)。EGFR過表達與OS呈負相關，EGFR過表達的ESCC患者生存時間較無表達者明顯縮短(P = 0. 019); HIF－1α表達陽性組OS較陰性組短，但差異無統計學意義(P =0.124)。HIF－1α和EGFR聯合檢測均高表達組食管鱗癌患者OS更低，差異有統計學意義(P =0.029)。見圖1、2、3、4。

圖1　116例食管鱗癌患者總生存曲線

圖2　HIF－1α蛋白表達的生存曲線

圖3　EGFR蛋白表達的生存曲線

圖4　HIF－1α和EGFR蛋白共表達的生存曲線

3　討論

實體腫瘤體積大于1 mm3時，自身的血供就不能滿足腫瘤細胞快速生長的需要，腫瘤內部總處于相對缺氧的微環境［3］。HIF－1是由HIF－1α、HIF－1β組成的異二聚體。乏氧時HIF－1α表達增加，與HIF－1β聚合，調節下游基因，影響腫瘤的血管形成、侵襲、轉移及放化療抵抗等。趙富周等［4］發現HIF－1α表達與食管癌分級、浸潤深度、淋巴結轉移、手術切緣陽性率正相關。Zhu等［5］也報道ESCC組織中HIF－1α表達與患者分期、淋巴結轉移、分化程度和預后明顯相關。本研究結果顯示ESCC中HIF－1α陽性表達率63.8%，其表達僅與ESCC的浸潤深度相關，T4患者表達率高達87.5%。生存分析顯示盡管HIF－1α陰性表達患者生存時間優于HIF－1α過表達者，但差異無統計學意義。因此，HIF－1α能否作為預測ESCC預后的指標需要更多大樣本的實驗證實。

EGFR在眾多惡性腫瘤中都存在過表達，在ESCC中表達為30%～80%［6］。國內一項Meta分析證實EGFR過表達對食管鱗癌T分期、血管受侵及生存有預測價值［7］。本研究顯示，EGFR在ESCC中陽性率為68.1%，與性別、年齡、分期、分化程度以及淋巴結轉移均無明顯相關。生存分析顯示EGFR陰性者明顯高于EGFR高表達者，與報道一致［7］。本研究初步探索了ESCC中HIF－1α與EGFR關系，結果表明HIF－1α與EGFR表達有呈正相關的趨勢。基礎研究認為缺氧誘導EGFR和其配體的表達，進而上調HIF－1α的表達以增強細胞對缺氧的反應，促進血管生成，HIF－1α表達又與EGFR表達形成正反饋［8］。本研究中聯合檢測HIF－1α與EGFR，二者均過表達患者生存期更短，聯合檢測HIF－1α與EGFR比單獨采用HIF－1α 或EGFR可能會更好地預測ESCC患者預后。

當前腫瘤的個體化治療及分子靶向治療是腫瘤治療最有前景的新方向，筆者發現HIF－1α、EGFR在ESCC高表達，可能在ESCC發生發展中起重要作用，有助于深入研究ESCC細胞凋亡、侵襲轉移、放化療耐受的分子水平調控機制，同時為EGFR作為ESCC靶向治療的新靶點提供理論依據。

參考文獻

［1]Zhu H，Feng Y，Zhang J，et al.Inhibition of hypoxia inducible factor 1α expression suppresses the progression of esophageal squamous cell carcinoma［J］.Cancer Biol Ther，2011，11(11): 981－987.

［2]Kazi J U，Kabir N N，Flores－Morales A，et al.SOCS proteins in regulation of receptor tyrosine kinase signaling［J］.Cell Mol Life Sci，2014，71(17): 3297－3310.

［3]Carrera S，Senra J，Acosta M I，et al.The role of the HIF－1α transcription factor in increased cell division at physiological oxygen tensions［J］.PLoS One，2014，9(5): 979－988.

［4]趙富周，楊鯤鵬，龐志剛，等.食管鱗狀細胞癌組織中HIF－1α、CCR7和VEGF－C蛋白的表達［J］.鄭州大學學報(醫學版)，2011，46(5): 660－662.

［5]Zhu H，Feng Y，Zhang J，et al.Inhibition of hypoxia inducible factor 1α expression suppresses the progression of esophageal squamous cell carcinoma［J］.Cancer Biol Ther，2011，11(11): 981－987.

［6]劉云鵬，徐玲.影響表皮生長因子受體靶向治療的相關分子檢測［J］.中華腫瘤雜志，2011，33(2): 81－83.

［7］王軍，于金明，景紹武，等.EGFR過表達與食管鱗癌臨床病理特征相關性研究Meta分析［J］.中華腫瘤防治雜志，2013，20(22): 1767－1777.

［8]Allon I，Kaplan I，Allon D，et al.HIF－1α，VEGF，and EGFR: contributing factors in the pathogenesis of necrotizing sialometaplasia［J］.Oral Diseases，2014，20(5): 440－445.

·論著·

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，Wang Jianhua

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(1.Center of Radiation Oncology，the Affiliated Cancer Hospital of Zhengzhou University/Henan Cancer Hospital，Zhengzhou 450008，China; 2.Department of Medical Image，the Third Affaliated Hospital of Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，China)

【Abstract】Objective To investigate the relationship between the expression of epithelial growth factor receptor(EGFR)，hypoxia－inducible factor－1α(HIF－1α)and clinical characteristics and prognosis in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC).Methods 116 cases of ESCC were analyzed about their clinical pathology and survival data.The expression of HIF－1α，EGFR were detected by immnohistochemical staining.Results The positive rates of high expression of HIF－1α and EGFR were 63.8% and 68.1%.Positive rate of co－expression of HIF－1α and EGFR was 50.9%.The expression of HIF－1α was correlated with T stage(P = 0.014)，and the co－expression was correlated with T and TNM stage(P = 0.006，0.023).Spearman rank correlation analysis illustrated that there was a significant correlation between HIF－1α and EGFR.Kaplan－Meier survival analysis showed that high－expression of EGFR were associated with poor survival.Conclusion HIF－1α and EGFR played an important role in the development and progression of ESCC，and show intimate relationship with biological behavior.EGFR may be used as an important index to evaluate the prognosis of esophageal carcinoma.

【Key words】esophageal neoplasm; squamous cell carcinoma; hypoxia－inducible factor－1α; epithelial growth factor receptor; prognosis

(收稿日期:2015－03－15)

通訊作者:劉勁松，E－mail: 655088068@163.com。

基金項目:河南省醫學科技攻關計劃項目(201003125)。

doi:10.3969/j.issn.1004－437X.2015.05.001

【中圖分類號】R 735.1